Влияние белка теплового шока 70 кДа (БТШ 70) на образование внеклеточных сетей (NETs) нейтрофилами костного мозга мыши.

Студент

Московский государственный университет имени , биологический факультет, Москва, Россия

postovskaya.ann@gmail.com

Оной из стратегий борьбы нейтрофилов с патогенами является высвобождение нейтрофильных внеклеточных ловушек (NETs), состоящих из ДНК, гистонов, белков гранул. При нетозе модифицированные ядерные антигены доступны иммунной системе, что может спровоцировать аутоиммунные заболевания. В данной работе была изучена способность стресс-ассоциированного шаперонного белка теплового шока 70 кДа (БТШ70) влиять на образование NETs нейтрофилами.

Зрелые нейтрофилы костного мозга мышей BALB/c были активированы фарбол-12-миристат-13-ацетатом (РМА), или формил-метионил-лейцил-фенилаланином (fMLP), или кальциевым ионофором (A23187) в разных временных и концентрационных диапазонах, с или без добавления БТШ70 или релевантных белков – бычьего сывороточного альбумина (БСА) или овальбумина (ОВА). Определение количества внеклеточной ДНК в динамике для подбора оптимальных концентраций реагентов проводилось с помощью измерения флюоресценции на люминометре; контроль наличия и оценка степени формирования NETs осуществлялась при помощи конфокальной микроскопии.

В ходе работы наблюдался градиент активации от дефрагментации ядра до гиперактивации (апоптоз). Также выявлены разные степени нетоза: от деконденсации ядра с набуханием клетки до потери границ клетки и образования сетей ДНК. Подобраны концентрации активаторов, при которых доминантно проявление нетоза в виде сетей с сохранением границ клеток. Наибольшее количество сетей и самая сильная активация наблюдались при использовании А23187, fMLP вызывал наименьшую активацию и степень нетоза, у РМА промежуточные показатели по силе эффектов. При инкубации нейтрофилов с PMA, fMLP, A23187 в присутствии БТШ70 выявлено пониженное содержание NETs во всех трех случаях. Максимальный эффект – NETs нет, ядра фрагментированы – зарегистрирован при наибольшей концентрации БТШ70 (6 µМ). Специфичность эффекта подтверждена повышенным образованием NETs при инкубации с БСА и отсутствием эффекта от ОВА.

PMA, fMLP, A23187 приводят к образованию активных форм кислорода (АФК), ключевая роль которых в нетозе известна. Внеклеточный БТШ70, но не БСА и не ОВА, способен подавлять продукцию АФК нейтрофилами. Данные сведения могут говорить о снижении БТШ70 эффективности образования NETs за счет уменьшения выброса АФК. Планируется выяснить, действительно ли БТШ70 препятствует формированию NETs или способствует их ускоренной деградации. Итак, экзогенный БТШ70 уменьшает количество NETs, причем эффект увеличивается при повышении концентрации исследуемого белка.