МД-2025, Молдова, г. Кишинев, Ул. Тестемицану, 20 Тел.:/+37322/ 739961,739968; факс: /+37322/ 727522 Email: *****@***com www. | Chol HDL-Direct. LqКод 3020C80 80 мл | PT MD 11-15796482-001:2003Только для диагностики «in vitro»Хранить при 2-80С |
ХОЛЕСТЕРИН HDL. ПРЯМОЙ ФЕРМЕНТАТИВНО-СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД. ПОЛИМЕР/ДЕТЕРГЕНТ |
DAC-SpectroMed s. r.l.ПРИНЦИП МЕТОДА Совместное действие полимеров и детергентов растворяет холестерин из липопротеинов высокой плотности (HDL), а холестерин из липопротеинов низкой плотности (LDL), липопротеинов очень низкой плотности (VLDL) и хиломикронов остаются нерастворимыми. Холестерин HDL, посредством реакций, описанных ниже, образует окрашенный комплекс. Абсорбция, измеренная при длине волны 600(±20) nm, пропорциональна концентрации холестерина HDL 1.
|
СОСТАВ НАБОРА
Reagent А | 60 ml | |
Буфер Гудса Холестерин оксидаза Пероксидаза N, N-бис(4-сульфобутил)-м-толуидин (DSBmT) Катализатор | > 1 U/ml > 1 U/ml 1 mmol/l 1 mmol/l | |
Reagent B | 20 ml | |
Буфер Гудса Холестерин эстераза 4-аминоантипирин Аскорбатоксидаза Детергент | > 1,5 U/ml 1 mmol/l > 3,0 KU/ml | |
Calibrator HDL/LDL | ||
Сыворотка. Концентрация холестерина HDL/LDL указана на упаковке |
ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ
Реагенты при 2-80С стабильны до срока, указанного на этикетке.
Признаки непригодности: присутствие взвеси, мутность.
Рабочий Calibrator HDL/LDL при 2-80С стабилен 1 неделю, замороженный порциями при минус 180С стабилен 2 месяца.
ОБРАЗЦЫ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ
Сыворотка.
Холестерин HDL в образцах при 2-80С стабилен 7 дней.
Гепарин, ЭДТА, оксалаты и фториды рекомендуется использовать в качестве антикоагулянтов.
Дополнительное оборудование
Анализатор, спектрофотометр или термостатирующий фотометр 370С с фильтром основной длины волны - 600(±20) nm и референсной длиной волны - 700(±50) nm.
Водяной термостат 370С. Дозаторы на 6, 250, 750 ml. Таймер.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Набор предназначен только для диагностики in vitro.
Образцы анализов пациентов должны рассматриваться как потенциально опасные и обрабатываться как инфекционные.
приготовление РАБОЧЕГО реагента
Reagent А и Reagent В готовы к использованию.
Рабочий Calibrator HDL/LDL:
Во флакон с Calibrator HDL/LDL прилить 1,0 ml дистиллированной воды, растворить при перемешивании.
ПРОЦЕДУРА ОПРЕДЕЛЕНИЯМетод: конечная точка Длина волны: 600 (±20) nm Температура: 370С Бланк: по дистиллированной воде 1. Доведите температуру реагентов, образцов и фотометра до температуры реакции (37оС). 2. Внесите пипеткой в кювету: 750 ml Reagent А и 7,0 ml Образца или Рабочего Calibrator HDL/LDL (Примечание 1). 3. Тщательно перемешайте и вставьте кювету в фотометр. Включите секундомер. 4. Учтите через 5 минут абсорбцию образца (А1) против дистиллированной воды при 600/700 nm (Примечание 2). 5. Внесите пипеткой в кювету: 250 ml Reagent В. 6. Тщательно перемешайте и вставьте кювету в фотометр. Включите секундомер. 7. Учтите через 5 минут абсорбцию образца (А2) против дистиллированной воды при 600/700 nm (Примечание 2). 8. Вычислите разницу между абсорбциями Образца - (А2-А1)о и Calibrator - (А2-А1)C. Вычисления Концентрация холестерина HDL (Ко) в образце вычисляется по следующей общей формуле:
Где: Ко - концентрация холестерина HDL в образце; (А2-А1)о - разница между последовательными абсорбциями Образца; (А2-А1)C - разница между последовательными абсорбциями Calibrator; КC - концентрация холестерина HDL в Calibrator. |
РЕФЕРЕНТНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ
Концентрации холестерина HDL меняется с возрастом и полом.
Для оценки риска поражения коронарных артерий приняты следующие предельные значения2:
до 35 mg/dl = 0,91 mmol/l | Высокий |
выше 60 mg/dl = 1,56 mmol/l | Низкий |
Данные величины ориентировочны, рекомендуется определение собственных референтных величин в каждой лаборатории.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Для контроля хода реакции и процедуры измерения рекомендуется использовать Контрольные сыворотки уровень I и II.
Каждая лаборатория должна установить собственную внутреннюю систему контроля качества.
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
- Предел чувствительности: 0,5 mg/dl = 0,01 mmol/l.
- Предел линейности: 200 mg/dl = 5,18 mmol/l.
- Воспроизводимость в пределах периода:
Средняя концентрация | CV* | n* |
32,9 mg/dl = 0,85 mmol/l | 0,8 % | 20 |
50,6 mg/dl = 1,31 mmol/l | 0,5 % | 20 |
- Воспроизводимость от периода к периоду:
Средняя концентрация | CV* | n* |
32,8 mg/dl = 0,85 mmol/l | 1,3 % | 40 |
50,0 mg/dl = 1,30 mmol/l | 1,5 % | 40 |
* CV – коэффициент вариации; n – количество определений.
- Достоверность: Результаты, полученные при использовании данного реагента, не показали системной разницы при сравнении с референсными реагентами. Подробности сравнительных экспериментов предоставляются по запросу.
- Интерференция:
гемоглобин до 10 g/l, липемия (триглицериды до 18 g/l) и билирубин до 60 mg/dl не влияют на результат определения. Некоторые лекарственные препараты могут влиять на ход реакции3.
Данные метрологические характеристики были получены на анализаторе. Результаты могут варьировать в зависимости от используемого оборудования или процедуры определения.
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
HDL играет важную роль при удалении холестерина из тканей и переносе его в печень в виде желчных кислот.
Пониженное содержание HDL-холестерина в плазме приводит к атеросклерозу – основной причине инфаркта миокарда и инсультов4,5.
Существует несколько причин, приводящих к пониженному уровню HDL-холестерина: острые или хронические гепатоцеллюлярные заболевания, внутривенное гиперали-ментация, нарушения питания, диабет, хроническая анемия, миелопролиферативные расстройства, болезнь Танжье, аналфалипопротеинемия, некоторые лекарства и курение4,5.
Клинический диагноз должен устанавливаться на основе интеграции клинических и лабораторных данных.
ПРИМЕЧАНИЯ
1. При необходимости объемы образца и реагентов можно пропорционально изменять.
2. Наибольшая точность определения достигается при использовании двух светофильтров: основная длина волны - 600(±20) nm и референсная длина волны - 700(±50) nm.
В этом случае повышение в образце уровня триглицеридов до 7,2 г/л не влияет на результаты анализа.
3. Эти реагенты могут быть использованы в автоматических анализаторах. Инструкции предоставляются или разрабатываются по запросу.
ЛИТЕРАТУРА
1. Warnick GR, Nauck M, Rifai N. Evolution of methods for measurement of HDL-cholesterol: from ultracentrigutaion to homogeneous assays. Clin Chem 2001; 47: 1579-96.
2. National Cholesterol Education Program Expert Panel. Third report of the National Cholesterol Education Program (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation, and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (ATP III). NIH Publication. Bethesda: National Heart, Lung and Blood Institute; 2001.
3. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 4th ed. AACC Press, 1995.
4. Tietz NW. Clinical guide to laboratory tests, 2nd ed. Saunders Co., 1991.
