REF № 17106 | Прямое колориметрическое определение концентрации меди (Cu) в сыворотке, плазме крови, без депротеинизации. |
Медь | РЕАГЕНТ А: 5 x 10 мл РЕАГЕНТ В: 1 x 3 мл РЕАГЕНТ С: порошок СТАНДАРТ: 1 x 10 мл |
СТАНДАРТ/КАЛИБРАТОР: термин относится к стандарту / калибратору РЕАГЕНТ: термин относится к отдельному реагенту КОНТРОЛЬ: термин относится к контролю |
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ Помимо возможных рисков, связанных с активными компонентами реактивы могут содержать дополнительные неактивные компоненты, такие как консерванты (например, азид натрия или другие), а также детергенты. Общая концентрация этих компонентов ниже предельно допустимой нормы, предусмотренной директивами 67/548/EEC и 1999/45/EC. Были соблюдены все требования по классификации, маркировке и упаковки реактивов (опасных препаратов). Однако рекомендуется с реактивами работать осторожно, необходимо избегать попадания их в организм, в глаза, на кожу и слизистые оболочки. С реактивами необходимо работать с соблюдением правил надлежащей лабораторной практики. КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ Двухвалентная медь (Cu ++) образует комплексы с белками. Основными функциями медь содержащих металлопротеинов – это участие в процессах оксиления-восстановления. Наиболее известные медь содержащие ферменты непосредственно реагируют с молекулярным кислородом. В плазме крови примерно 95% меди связано с альфа-2-глобулином церулоплазмином (оксидазой, обладающей фероксидазной активностью). Показано, что тяжелый дефицит меди связан с развитием заболеваний сердца, остеоартритом и остеопорозом костей и суставов. Также при снижении концентрации меди уменьшается антиоксидантная защита. ПРИНЦИП В буферной системе с pH 4.7, медь образует со специфическим комплексоном 3.5-DiBr-PAESA [4-(3.5-дибромо-2-пиридилазо)-N-этил-N-(3-сульфопропил)-анилин] стабильный окрашенный продукт. Интенсивность окрашивания этого комплекса пропорциональна количеству меди в исследуемом образце. РЕАГЕНТЫ Компоненты набора, хранящиеся при температуре 2-8°C в невскрытых флаконах, стабильны в течение всего срока годности, указанного на этикетке упаковки. Реагенты должны быть прозрачным; не использовать при наличии мутности. Компоненты набора и концентрации реактивных ингредиентов: РЕАГЕНТ А Ацетатный буфер ≥ 1 моль/л, рН 4.7 РЕАГЕНТ В Комплексон 3.5-DiBr-PAESA 0.4 ммоль/л Маленькая ложка РЕАГЕНТ С Восстановитель: аскорбиновая кислота, порошок СТАНДАРТ Стандарт меди 100 мкг/дл (15.73 мкмоль/л) Штрих-код и кодовый номер флакона, указанный на этикетках реагентов, относятся к использованию продукта на анализаторах Hitachi 911/912. Пожалуйста, смотрите протокол по адаптации, вся дополнительная информация предоставляется по запросу. ПРИМЕЧАНИЯ И ОГРАНИЧЕНИЯ 1) Используйте одноразовые пробирки и стеклянную посуду промытые 1N раствором соляной кислоты и дистиллированной водой. 2) Информация, специфичная по реагентам: - Стандартное значение верифицируется с использованием референсного прослеживаемого стандарта NIST (Национальный институт стандартов и технологий). - Рабочий раствор должен быть прозрачным; не использовать при наличии мутности. | - Реагент A в качестве добавки содержит мочевину. При настройке работы биохимического анализатора со свободным доступом не проводите тест на мочевину сразу после теста на медь. ПОДГОТОВКА РАСТВОРОВ РЕАГЕНТОВ Раствор АС: добавьте одну маленькую ложку РЕАГЕНТА С в один флакон с РЕАГЕНТО до полного растворения. Стабильность: в течение 15 дней после вскрытия при 2-8°C, при условии отсутствия контаминации и плотном закрывании пробирок сразу после использования. РЕАГЕНТ В готов к использованию. Реагент в невскрытых флаконах стабилен в течение всего срока годности, указанного на этикетке упаковки. Стабильность: в течение 90 дней после вскрытия при 2-8°C, при условии отсутствия контаминации и плотном закрывании пробирок сразу после использования. СТАНДАРТ: готов к использованию. Реактив в невскрытых флаконах стабилен в течение всего срока годности, указанного на этикетке упаковки. Стабильность: в течение 120 дней после вскрытия при 2-8°C, при условии отсутствия контаминации и плотном закрывании пробирок сразу после использования. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА Для проверки точности теста рекомендуется использовать следующие контрольные материалы при различных уровнях определяемого компонента: Контроль для клинической химии 1 REF 16150 6 x 5 мл Многопараметровая лиофилизированная контрольная сыворотка. При использовании руководствуйтесь инструкцией, вложенной в набор. Контроль для клинической химии 2 REF 16250 6 x 5 мл Многопараметровая лиофилизированная контрольная сыворотка. При использовании руководствуйтесь инструкцией, вложенной в набор. ОБРАЗЦЫ Сыворотка или плазма (используйте только соли гепарина в качестве антикоагулянта). Собирайте образцы в соответствии с процедурой Национального комитета по клиническим лабораторным стандартам, указанной в библиографии (1). Стабильность образцов: 24 часа при 2-8°C или 15 дней при -20°C. ПРИБОРЫ И МАТЕРИАЛЫ НЕОБХОДИМЫЕ, НО НЕ ПОСТАВЛЯЕМЫЕ • Стандартное лабораторное оборудование. • Спектрофотометр со светофильтрами. АНАЛИТИЧЕСКАЯ ПРОЦЕДУРА
Перед проведением анализа нагрейте реагенты до рабочей температуры. Пропорциональное изменение объемов реакционной смеси, указанных в аналитической процедуре не влияет на результат. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Тщательно перемешайте. Через 4-5 минут при рабочей температуре считайте абсорбцию Образца (ASВ) и Стандарта (AST) против реагентного бланка. Конечное окрашивание стабильно в течение 1 часа. РАСЧЕТ [(AS - ASB) / AST] x 100 = мкг меди/дл образца КОЭФФИЦИЕНТЫ ПЕРЕСЧЕТА Медь: [мкг/дл] x 0.1573 = Медь [мкмоль/л] РЕФЕРЕНСНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ Мужчины: 70-140 мкг/дл (11.0-22.0 мкмоль/л) Женщины: 80-155 мкг/дл (12.6-24.4 мкмоль/л) Рекомендуется, чтобы в каждой лаборатории были установлены свои собственные референтные значения. ХАРАКТЕРИСТИКИ МЕТОДА Интерференция: на результат теста не влияет присутствие конъюгированного и неконъюгированного билирубина до 15 мг/дл, гемоглобина до 0.5 г/дл и триглицеридов до 1000 мг/дл. АНАЛИТИЧЕСКИЙ ДИАПАЗОН: 3.0 - 500 мкг/дл. Если концентрация в образце превышает диапазон измерений (500 мкг/дл), разведите его физиологическим раствором 1:10 и результаты умножьте на коэффициент разведения (10). ВНУТРИАНАЛИТИЧЕСКАЯ ТОЧНОСТЬ: Определяют в 20 повторностях (на анализаторе Hitachi 717) на каждый контроль (тестировали 3 уровня - L1/L2/L3). Результаты были следующие: L1: среднее 71.80 мкг/дл, SD 2.19, CV% 3.05 L2: среднее 120.65 мкг/дл, SD 2.64, CV% 2.19 L3: среднее 170.65 мкг/дл, SD 2.68, CV% 1.57. ТОЧНОСТЬ МЕЖДУ СЕРИЯМИ АНАЛИЗОВ: Определяют в течение 10 дней в 2 повторностях (на анализаторе Hitachi 717) каждого контроля (3 уровня - L1/L2/L3). Получены следующие результаты:
| ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ: Чувствительность: 3 мкг/дл. Чувствительность рассчитывалась при трехкратном измерении 20 проб физиологического раствора и выражалась как "среднее нулевое значение + 3 SD". ТОЧНОСТЬ: Данный метод (y) сравнивали с методом атомной абсорбции (x). Результаты были следующими: N = 60, r = 0.9624, y = 0.9774x + 2.5776 УТИЛИЗАЦИЯ Реагенты утилизируются в соответствии с местными нормативными актами. БИБЛИОГРАФИЯ 1) NCCLS Document: “Procedures for the Collection of Arterial Blood Specimens; Approved Standard - Third Edition (1999)”. 2) Kaplan, L. A., Pesce, A. J.: “Clinical Chemistry”, Mosby Ed. (1996). 3) EU-Dir 1999/11 Commission Directive of 8 March 1999 adapting to technical progress the principles of Good Laboratory Practice as specified in Council Directive 87/18/EEC. 4) Jakobs, D. S., Kasten, Jr., B. L., Demmott, W. R., Wolfson, W. L.: “Laboratory Test Handbook”, Lexi-Comp and Williams & Wilkins Ed. (2nd Edition - 1990). 5) Abe, A., Yamashita, S., Noma, A.:"Sensitive, direct colorimetric assay for copper in serum". Clin. Chem., 35/4, 552-554 (1989). | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
