РСА-RATIO kit –Резистентность 5 фактора. Каталожный номер 5546.
Этот набор используется для обнаружения резистентности 5 фактора к Активированному ПрС. 5фактор обладающий такой резистентностью называется также фактор Лейдена.
Устаревший метод определения фактора Лейдена назывался APC ratio (иногда его некорректно называют просто APC) и выполнялся следующим образом.1-Вы выполняете АЧТВ тест с добавлением( не родного) активированного ПрС.(получаете секунды). 2-Вы выполняете обычный АЧТВ-тест (получаете секунды). Затем делите 1(сек) на 2(сек). Если результат выше чем 2,2-то у пациента нет фактора Лейдена. Если ниже-то есть фактор Лейдена.
Современный метод называется PCA ratio( иногда его некорректно называют просто PCA).В этом методе Вы не вносите активированный ПрС в плазму, а активируете собственный ПрС пациента. ПрС может перейти (только при наличии ПрS в плазме)в активированное состояние(ПрСа) при добавлении яда змеи Agkistrodon Contortrix. Еще одно отличие от старого метода –смешивание плазмы больного с плазмой дефицитной по 5 фактору.
Следует отметить, что если мы добавим в плазму больного плазму дефицитную по 5 фактору, то такие показатели как :витамин К зависимые факторы, факторы внутреннего пути свертывания, ПрС и ПрS- нормализуются. Таким образом добавление этой плазмы позволяет оценивать только 5 фактор.
В PCA ratio тесте плазма больного смешивается с плазмой дефицитной по фактору 5 в соотношении 1 к 4. Затем одна часть этой плазмы инкубируется с АЧТВ-реагентом и ядом змеи. Другая часть инкубируется просто с АЧТВ-реагентом. Затем к обеим порциям добавляют кальция хлорид и фиксируют время свертывания. Рассчитывают отношение= (время свертывания при АЧТВ-тесте с ядом змеи)/(обычный АЧТВ тест).
Предосторожности
Регенты представленные в этом методе - только для ин-витро диагностики-НЕ ГЛОТАТЬ. Надевайте перчатки при работе с компонентами этого набора. Внимательно смотрите этикетки на которых отмечены подстерегающие опасности и способы утилизации. В реагентах не содержится антигенов к гепатиту B (HBsAg), Anti-HCV и HCV антителам. Рассматривайте реагенты как источник потенциальной биологической опасности и, в связи с этим, применяйте все меры предосторожности.
Состав.
1 .25мМ Кальция хлорид в физиологическом растворе.
Флакончики с кальцием хлорида годны к использованию.
2. РСА-АРТТ реагент.
Каждый флакон содержит лиофилизированный АЧТВ вместе с ядом змеи. Добавить 2мл очищенной воды. Дать постоять 20 минут и помешать перед использованием.
3. АРТТ регент.
Каждый флакон содержит лиофилизированный АЧТВ реагент. Добавить 2мл очищенной воды. Дать постоять 20 минут и помешать перед использованием.
4. Factor 5 depleted plasma (дефицитная по 5 фактору плазма).
Каждый флакончик содержит лиофилизированную дефицитную по 5 фактору плазму. Добавить 2мл очищенной воды. Дать постоять 20 минут и помешать перед использованием.
5. APC resistant plasma. (плазма с 5 фактором устойчивым к действию ПрС).
Добавьте 0.5 мл очищенной воды. Дать постоять 20 минут и помешать перед использованием.
6. Другие компоненты набора.
В набор также входит инструкция.
Хранение реактивов.
25mM кальция хлорид в физиологическом растворе.Должен хранится при 2-6 гр Ц.. Помещенный на прибор АС-4 в позицию 26 (15гр Ц) годен 6 часов.
Неразведенный реактив хранится при 2-6 гр Ц и годен до конца срока годности указанного на этикетке. После добавления воды он стабилен 2 недели в холодильнике. Помещенный на прибор АС-4 в позицию 31(15гр Ц) годен 6 часов.
АРТТ-реагент.Неразведенный реактив хранится при 2-6 гр Ц и годен до конца срока годности указанного на этикетке. После добавления воды он стабилен 2 недели в холодильнике.
Плазма дефицитная по 5 фактору.Будучи неразведенной должна хранится при 2-6гр Ц и годна до окончания срока годности на этикетке. После разведения плазма может быть заморожена при -20гр Ц и использована еще только один раз.
АРС резистентная плазма.Будучи неразведенной должна хранится при 2-6гр Ц и годна до окончания срока годности на этикетке. После разведения плазма может быть заморожена при.
Сбор и приготовление образцов для анализа.
Кровь собирается в вакутейнеры. Соотношение объемов крови и натрия цитрата –должно быть 9к 1. Натрия цитрат может быть 3.2% или 3.8%. Отцентрифугируйте при 2000g в течении 10минут. Плазма должна хранится при температуре 2-6гр Ц. Тесты должны проводится в течении 2 часов с момента сбора или плазму можно хранить при -20гр Ц в течении 2 недель или месяц при -70гр. Быстро разморозить при 37гр Ц. Не хранить при 37 гр более чем 5 минут.
Пошаговая процедура.
Рекомендуется проводить все анализы в дубле.
А)Выполнение анализа вручную.
1.Приготовьте две пробирки содержащие по 20мкл плазмы больного и по 80мкл плазмы дефицитной по 5 фактору.
2.В одну пробирку добавьте 100мкл Ачтв-реагента, вдругую 100мкл Ачтв-реактива с ядом.
3.Инкубируйте обе пробирки при 37гр в течении 5 минут.
4. Добавьте по100мкл мкл кальция хлорида в обе пробирки и запишите время свертывания.
5.Расчитайте отношение= АЧТВтест с ядом(сек)/АЧТВ тест.
Б)Выполнение анализа на приборе АС-4.(набор 5546 на 80 проб).
Обратитесь к мануалу по АС-4 для дополнительных инструкций. Приготовьте все реактивы как было описано выше.
Прибор сам осуществляет смешивание плазмы больного и плазмы дефицитной по 5 фактору.
Но отношение (ratio) Вы должны рассчитывать сами.
Поместите дефицитную по 5 фактору плазму в позицию 33.
Поместите АЧТВ –реактив с ядом в позицию 31.
Поместите обычный Ачтв –реактив в позицию 32.
Поместите кальция хлорид в 26 позицию.
Закажите этому больному сразу два теста :тест –APC(тест с ядом) и тест APCR. Отношение (ratio) рассчитывается следующим образом –АРС(сек)/АРСR(сек).
Интерпретация результатов.
Это метод, в сравнении с устаревшим АРС ratio , гораздо лучше показывает разницу между здоровым человеком и пациентом с фактором Лейдена. Этот метод можно применять при приеме пероральных антикоагулянтов, при высоком уровне 8 фактора(при беременности), при исследовании размороженной плазмы с низким уровнем 8 фактора, при наличии у пациента дефектов ПрС и ПрS. Также этот тест можно использовать для исследований плазмы больного волчанкой и пациентов во время гепаринотерапии. РСА-ratio набор гораздо более устойчивый набор чем APC-ratio.(Имеется в виду, что специально выделенный активированный ПрС гораздо сложнее хранить, чем просто фракцию из яда, которая активирует ПрС в плазме.-прим. переводчика).
Контроль качества.
Каждая лаборатория должна сама устанавливать свою программу контроля качества. Нормальная и патологическая плазма должны быть проанализированы перед проведением анализов, чтобы подтвердить исправность прибора и годность реактивов. Если контроли не измерялись - все результаты признаются ложными.
В этом наборе есть АРС резистентная плазма( плазма с дефектным 5 фактором)- она соответственно является патологическим( абнормальным ) контролем.
Референсные значения.
-могут различаться между лабораториями в зависимости от используемой техники и реактивов. Поэтому каждая лаборатория должна сама устанавливать референсные границы для здоровых людей.
Аналитические характеристики.
По оси –у отложены значения отношения (ratio) для методов PCAr и APCr. Лейден+ означает наличие фактора Лейдена.
Каждая лаборатория должна устанавливать собственные аналитические данные.
Литература.
Примечания переводчика: По представленному графику мы делаем вывод, что
Больные с фактором Лейдена будут иметь результат:1,3-1,8
Здоровые:2,9-4,5
Если Вы получили срединное значение(от1.8 до 2.9) то скорее всего это вызвано наличием волчаночных антикоагулянтов, гепаринотерапией или при потреблении непрямых антикоагулянтов.
