ВА-скрининг каталожный номер5484-(10 флаконов по 2мл)
Для чего нужен этот реактив.
Волчаночные антикоагулянты - это антитела классов IgG и IgM которые блокируют фосфолипиды участвующие в процессе свертывания. Появление этих антител связывают с такими заболеваниями как: recurrent foetal loss, тромбоцитопения, тромбоз неизвестного генеза и неврологические заболевания. Наличие волчаночных антител может повлиять на результаты АЧТВ-теста.
Данный набор предназначен для обнаружения ВА в плазме - то есть это качественный анализ. Яд гадюки Рассела активирует десятый фактор (он становится соответственно фХа) в присутствии фосфолипидов и кальция –запускается процесс свертывания и образуется легко обнаруживаемый сгусток. Конечно этот тест более чувствителен к наличию ВА, чем тест АЧТВ.
В случае обнаружения патологии на скрининговом тесте, Вам нужно будет воспользоваться подтверждающим тестом(каталожный номер 5485-confirm test).
Предосторожности
Реактивы входящие в этот набор используются только для ин-витро диагностики - НЕ ПРОГЛАТЫВАЙТЕ ИХ. Надевайте перчатки при работе со всеми компонентами набора.
Обратитесь к вложенному листу с указаниями по безопасности и способу утилизации.
Что входит в набор.
1.DRVVT Screen reagent.
В каждом флакончике содержится лиофилизированная смесь= яд змеи Рассела, кальция хлорид и фосфолипиды. ПРИГОТОВЛЕНИЕ - Добавляем 2мл дистиллированной/деионизированной воды во флакон и оставляем на 10 минут. Аккуратно перемешиваем –НЕ ТРЯСТИ.
2.Остальные компоненты набора содержат свою инструкцию.
Хранение и сроки годности.
1.DRVVT Screen reagent.
Неоткрытые флакончики годны до окончания срока годности(при правильном хранении).
Разведенный реактив годен 24 часа при 15-30гр Ц, 5 дней при 2-6гр Ц, 2 недели при -20гр Ц. Реагенты могут быть заморожены только в пластиковых пробирках. Размораживать их нужно при 37гр Ц –только перед использованием.
Что нужно обязательно докупать для работы с этим набором.
Каталожный номер 5485- - Подтверждающий тест(10флаконов по 1мл)
Каталожный номер 5499—Нормальная плазма(Norm0Trol 1)-10 флаконов по 3мл
Каталожный номер 5186—Нормальная плазма(Norm0Trol 1)-10 флаконов по 1мл
Забор крови для проведения этого анализа.
Кровь собирается в вакутейнеры. Соотношение объемов крови и натрия цитрата –должно быть 9к 1. Натрия цитрат может быть 3.2% или 3.8%. Отцентрифугируйте при 2000-3000g в течении 15минут. Если в плазме остались тромбоциты-то либо еще раз центрифугируйте, либо пропустите через фильтр с диаметром пор 0.22um. Плазма должна хранится при температуре 2-6гр Ц. Тесты должны проводится в течении 2 часов с момента сбора или плазму можно хранить при -20гр Ц в течении 2 недель или месяц при -70гр. Быстро разморозить при 37гр Ц. Не хранить при 37 гр более чем 5 минут.
Пошаговая процедура.
1.Ручной метод
А)Предварительно нагрейте готовый реагент до 37гр Ц.
Б)Поместите 200мкл плазмы пациента( или контроля) в реакционную кювету. Инкубируйте при37 гр 2минуты.
В)Добавьте в кювету 200мкл реагента и засекайте время.
Г)Определите время образования сгустка с точностью до 0.1 секунды.
Д) Рассчитайте отношение=
Плазма пациента на скрининговом реагенте/Norm Trol1 на скрининговом реагенте.
2.Измерение на автоматическом анализаторе.
Этот тест может быть осуществлен практически на любом авомате. Прибор должен быть запрограммирован-смешивать равные объемы плазмы и реактива, предварительно прогревать реактив. Старайтесь использовать одноразовую посуду. Для получения более подробных инструкции - обратитесь к руководству на прибор.
Интерпретирование результатов.
Вы должны обязательно найти значение нормальной контрольной плазмы как на скрининговом, так и на подтверждающем реактивах. Также для окончательного анализа Вам могут понадобится разведения плазмы пациентов с контрольной плазмой.
Если Вы померили плазму больного и ее значение вышло за референсные значения для скринга(нормальная плазма +/- 3 среднеквадратических отклонения), то возможно присутствие ВА. Вы должны провести тест смешивания с контрольной плазмой (Norm - Trol1) в соотношении 1:1. А также обязательно подтверждающий тест (каталожный номер 5485).
В случае если время смеси не попадает в референсные значеня- то возможны ВА. Если время смеси укладывается в референсные значения - то скорее всего мы имеем дело с недостаточностью фактора( чаще всего 2, 5 или10).Использование подтверждающего теста позволяет раличить - ВА, недостаточность фактора и другие ингибиторы свертывания.
Референсные значения.
Могут колебаться между лабораториями - так как зависят от разных реактивов и приборов.
Поэтому каждая лаборатория должна устанавливать свои референсные значения. Нужно найти 20 здоровых взрослых мужчин и женщин –провести тест. Высчитать среднее арифметическое и среднеквадратическое отклонение. Референсные пределы= среднее значение +/- 3 среднеквадратических отклонения). Результаты полученные фирмой Хелена на скрининговый тест = 33.3+/-9.3секунд(то есть 24.0-42.6 секунд).
Ограничения.
Плазма с недостатком факторов (2,5 или10) дает патологию на скрининговом тесте.
При смешивании с контрольной плазмой (Norm-Trol1) в соотношении 1:1- результат (в случае недостаточности факторов) должен вернутся в референсные значения.
Случай когда смешивание не приводит к возвращению в референс - может быть обусловлен: гепарином(концентрация >1U/ml), пероральными антикоагулянтами, ДВС синдромом.
Обязательно удалите остаточные тромбоциты, так как они являются источником фосфолипидов и могут давать ложно-отрицательные результаты.
Контроль качества.
Каждая лаборатория должна сама устанавливать программу контроля качества. Перед анализами должны быть измерены нормальная и патологическая плазма - чтобы убедится что реактивы не испортились и прибор исправен. Если измерения контролей не проводились, то все полученные результаты за этот день признаются недостоверными. Компания Хелена Биосайенсес предлагает контрольные плазмы для теста ВА. –
-Каталожный номер 5486 DRVVT positive control (1флакон на 1мл).
Аналитические характеристики.
Хелена биосайенсес и ее представители определили следующие аналитические характеристики-«коэффициент вариации для одной серии и между сериями не должен превышать 5%» . Каждая лаборатория должна устанавливать собственные характеристики.
Использованная литература.
1. National Committee for the National Laboratory (NCCLS) Standards: Collection transport and preparation of blood specimens for coagulation testing and performance of coagulation assays. Document H21-A2, vol. 11, No. 23, 1991.
