НАТРИЙ
Энзиматический Колориметрический Метод
______________________________________________
Кат № :
NA 7167 | 1.Буфер 1a. Энзим 2.Разбавитель 2а. Субстрат Стандарт низкий Стандарт высокий | 6 х 45 мл 6 х 45 мл 3 х 39 мл 3 х 39 мл 1 х 3 мл 1 х 3 мл |
ПРИНЦИП МЕТОДА
Натрий определяется энзиматически в виде натрий зависимой b-галактозидазной активности с ONPG в качестве субстрата. Абсорбция продукта реакции О-нитрофенола при 405 нм пропорциональна концентрации натрия.
Na+
ONPG --------------------> o-nitrophenol + galactose
b-galactosidase
ONPG = O-nitrophenol-b-D-galactopyranose
ПРОБА
Сыворотка или гепаринизированная плазма.
_РЕАГЕНТЫ
Состав | Концентрация раствора |
1.Буфер/Энзим Трис буфер Криптанд b-галактозидаза 2.Разбавитель/Субстрат Трис буфер о-нитрофенилгалактозид Стандарт низкий Стандарт высокий | 450 ммоль/л, pH 9,0 5.4 ммоль/л >0.8 Е/мл 10.0 ммоль/л, рН 9.0 5.5 ммоль/л 90 ммоль/л (207мг/дл) 175 ммоль/л (402мг/дл) |
ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАСТВОРОВ
1. Буфер/Энзимы
Используя воронку перенести содержимое флакона Энзим 1а в флакон Буфера 1 и, с помощью легких вращений, растворить. Избегайте вспенивания. Стабилен 2 недели при +2 - +8оС или 5 дней при +15 - +25оС.
2. Разбавитель/Субстрат
Используя воронку перенести содержимое флакона Субстрата 2а в флакон и, с помощью легких вращений, растворить. Стабилен 4 недели при +2 - +8оС или 2 недели при +15 - +25оС.
Стандарты низкий и высокий
Готовы для употребления. Стабильны в течение срока, указанного на этикетке при +2 - +8оС.
ПРОЦЕДУРА
Длина волны Температура Кювета Измерение | 405 нм 30/37оС Световой путь 1 см Против бланка-реагента |
Внести в пробирки:
Бланк (мкл) | Стандарт (мкл) | Проба (мкл) | |
DDH2O Стандарт Проба 1 Буфер/энзим | 40 - - 1000 | - 40 - 1000 | - - 40 1000 |
Перемешать, инкубировать 5 мин при 30/37оС. Затем добавить:
Субстрат/ Разбавитель | 400 мкл | 400 мкл | 400 мкл |
Перемешать и инкубировать 1 мин при 30/37оС. Измерить начальную абсорбцию А1, а спустя 2 мин измерить абсорбцию А2.
А2 -А1 =DА Проба или Стандарт
КАЛИБРОВКА
1. Калибровку проводить имеющимися в составе набора низким и высоким Стандартами Натрия.
2. Построить калибровочную кривую относительно концентраций Стандарта и соответствующей абсорбции.
3. Концентрацию натрия расчитывать по калибровочной кривой.
НОРМАЛЬНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
136-146 ммоль/л (313-336 мг/дл)
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Для контроля качества и воспроизводимости рекомендуется использовать предлагаемые фирмой RANDOX сыворотки с нормальным, пониженным и повышенным содержанием натрия.
ЛИНЕЙНОСТЬ
Линейность метода при концентрациях Na от 80 до 180 ммоль/л (184 и 414 мг/дл).
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Набор предназначен только для диагностики in vitro. Не пипетировать ртом.
Раствор 1 содержит Азид натрия. Избегайте попадания реактива в рот, контакта с кожей и слизистыми. В противном случае промойте пораженные участки большим количеством воды. В случае попадания в глаза или проглатывания - обратитесь к врачу.
Азид натрия реагирует со свинцом и медью с образованием потенциально взрывчатых веществ. Для уничтожения таких образований используйте большие количества воды. Наружные металлические поверхности должны быть обработаны 10% раствором гидроокиси натрия.
RANDOX
____________________________________________
