МД-2025, Молдова, 0 Тел.:/+37322/ 739961,739968; факс: /+37322/ 727522 Email: *****@***com www. | Lipase - DAC Код 2048L48 48 ml | PT MD 11-38623324-002:2002Только для диагностики «in vitro»Хранить при 2-80С |
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЛИПАЗЫ КИНЕТИЧЕСКИЙ-СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД |
DAC-SpectroMed s. r.l.ПРИНЦИП МЕТОДАПигментообразующий субстрат липазы (1,2-О-дилаурил-рак-глицеро-3-глутаровой кислоты-6-метилрезоруфин) расщепляется вследствие каталитического воздействия липазы в щелочной среде, образуя 1,2-О-дилаурил-рак-глицерин, глутаровую кислоту и метилрезоруфин2. Интенсивность образующейся окраски, измеренной при 580(±10) nm, пропорциональна концентрации липазы. |
СОСТАВ НАБОРА
Reagent А | 4x10 ml | рН 8,3 |
Трис буфер Деоксихолат натрия Колипаза Тауродеоксихолат | 40 mmol/l 1,8 mmol/l ≥ 1 mg/l 7,2 mmol/l | |
Reagent В | 1x8 ml | рН 4,0 |
Тартратный буфер Пигментообразующий субстрат Хлорид кальция | 15 mmol/l ≥ 0,7 mmol/l 0,1 mmol/l | |
Lipase Standard | 1 ml | |
Стандарт липазы. Лиофилизированная человеческая сыворотка. Активность липазы (U/l метилрезоруфина при 37оС) указана на этикетке флакона. |
ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ
Реагенты при 2-80С стабильны до срока, указанного на этикетке. После вскрытия реагенты при 2-80С стабильны 90 дней.
Признаки непригодности: присутствие взвеси, мутность, абсорбция Бланка ≥ 1,00 при 580 nm (кюветы на 1 cm).
Reagent В представляет собой микро-эмульсию оранжевого цвета. Не используйте Reagent В при изменении цвета на красный (Примечание 1).
ОБРАЗЦЫ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ
Сыворотка (плазма).
В качестве антикоагулянтов рекомендуется использовать цитрат натрия, ЭДТА или гепарин1. Исключить повторное замораживание и размораживание образцов.
Липаза в сыворотке при 2-80С стабильна 2 дня.
ДОПОЛНИТЕЛЬНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ
Анализатор, спектрофотометр или термостатирующий при 37оС фотометр с фильтром 580(±10) nm.
Дозаторы на 10, 200 и 1000 ml.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Набор предназначен только для диагностики in vitro.
Образцы крови должны рассматриваться как потенциально опасные и обрабатываться как инфекционные.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧИХ РЕАГЕНТОВ
Reagent А и Reagent В готовы к использованию.
Перед использованием Reagent В перемешайте осторожным вращением до получения однородной суспензии
Lipase Standard: во флакон внесите точно 1,0 ml дистиллированной воды. Аккуратно вращайте флакон до полного растворения содержимого.
Реагент стабилен при 2-80С 7 дней, при минус 200С 3 месяца.
Целесообразно раствор расфасовать в пластиковые пробирки в соответствии с ежедневной потребностью лаборатории.
ПРОЦЕДУРА ОПРЕДЕЛЕНИЯМетод: кинетический Длина волны: 580(±10) nm Температура: 370С Установка нуля: по дистиллированной воде1. Доведите температуру Reagent А и фотометра до температуры реакции (37оС). 2. Внесите в маркированные кюветы (Примечание 2):
3. Тщательно смешайте и инкубируйте в течение 1 min при 37оС. 4. Учтите начальную абсорбцию при 580(±10) nm против дистиллированной воды, затем измерьте абсорбцию через интервалы в 1 min в течение 2 min при 37оС. 5. Вычислите разницу между последовательными абсорбциями и среднюю разницу абсорбции за 1 min (DА/min). ВЫЧИСЛЕНИЯ Концентрация липазы в образце (СО) вычисляется по следующей общей формуле:
Где: СО - концентрация липазы в образце, U/l; DА/minО – средняя разница абсорбций образца; DА/minСт – средняя разница абсорбций стандарта; DА/minБланк – средняя разница абсорбций бланка; ССт - активность липазы в стандарте, U/l. |
РЕФЕРЕНТНЫЕ ВЕЛИЧИНЫ
≤ 38 U/l (U/l метилрезоруфина при 37оС).
Приведенные референтные величины ориентировочны. Рекомендуется в каждой лаборатории установить собственные референтные величины.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Для контроля хода реакции и процедуры измерения рекомендуется использовать нормальные и патологические контрольные сыворотки.
Каждая лаборатория должна установить собственную внутреннюю систему контроля качества.
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
- Предел чувствительности: 5 U/l.
- Предел линейности: 250 U/l.
Для более высоких значений разбавьте образец физиологическим раствором в 10 раз, результат умножьте на 10 (коэффициент разведения).
- Воспроизводимость в пределах периода:
Средняя концентрация | CV* | n* |
119 U/l | 3,33 % | 20 |
215 U/l | 2,78 % | 20 |
- Воспроизводимость от периода к периоду:
Средняя концентрация | CV* | n* |
119 U/l | 4,54 % | 20 |
215 U/l | 5,02 % | 20 |
* Где: CV–коэффициент вариации; n–количество определений.
- Корреляция:
Был выполнен сравнительный анализ нашего метода с другим коммерческим методом, на 100 образцах человеческой сыворотки.
Переводной коэффициент: 0,997
Параметры линейной регрессии были следующими:
Коэффициент корреляции: 0,986
Линейная регрессия: y (U/l)=0,304x+6,563
- Интерференция:
Билирубин до 20 mg/dl и гемоглобин до 150 mg/dl не влияют на результат определения.
Триглицериды 300 mg/dl снижают активность липаза на 6 %.
Повышают результат препараты, вызывающие спазм сфинктера Одди (например, наркотические аналгетики, бетанехол, секретин) или панкреатит, гепарин, высвобождение липопротеина и печеночной липазы.
Занижают результаты протамин, диизопропилфлюорофосфат, ЭДТУК, тяжелые металлы, хинин.
Данные метрологические характеристики были получены на анализаторе. Результаты могут варьировать в зависимости от используемого оборудования или процедуры определения.
ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Липазы – это ферменты, которые гидролизуют глицериновые эфиры высокомолекулярных жирных кислот. Фермент и его кофактор колипаза продуцируются в поджелудочной железе.
Липаза также выделяется в небольших количествах слюнными железами, слизистыми оболочками желудка, легких и кишечника.
Желчные кислоты и колипаза образуют с липидами мицелярные комплексы и привязывают липазу к границе раздела фаз субстрат/вода.
Определение липазы используется для исследования расстройств поджелудочной железы. При острых панкреатитах концентрация липазы возрастает в 2–50 раз выше верхнего предела нормы в течение 4–8 часов после болей в животе, достигая пика за 24 часа и снижаясь от 8 до 14 дней.
Повышенные значения липазы могут также наблюдаться при следующих патологиях: панкреатит любого происхождения, желчная колика, перфорация полого внутреннего органа, странгуляция или инфаркт кишечника, киста или псевдокиста поджелудочной железы, перитонит.
Клинический диагноз должен устанавливаться в результате интеграции лабораторных и клинических данных.
ПРИМЕЧАНИЯ
1. В случае выпадения осадка в Reagent В, его необходимо ресуспендировать осторожным вращением.
2. Эти реагенты могут быть использованы в автоматических анализаторах. Инструкции предоставляются или разрабатываются по запросу.
3. При остром перитоните активность сывороточной липазы в сыворотке остается повышенной дольше, чем активность амилазы.
4. При простом паротите уровень липазы не превышает норму.
5. При панкреатите липаза и амилаза дополняют друг друга. Липаза имеет более высокую клиническую чувствительность и специфичность, чем амилаза.
6. Асцитическая жидкость может иметь очень высокую активность липазы при панкреатите.
7. Эндоскопическая ретроградная холангиопанкреатография может вызвать повышение активности липазы в сыворотке.
ЛИТЕРАТУРА
1. McNeely M. Lipase. Kaplan A, et al. Clin Chem The C. V. Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1130:1134, 892.
2. Neumann U et ptes Rend. 4 colloque de Pont-a-Masson 627-634 (1979).
3. Junge W et al. J. Clin Chem, Clin Biochem., 21, 445-451 (1983).
4. Neumann U et al. Metods of Enzymatics Analysis. 3rd ed. Vol. 4, 26-34 (1984).
5. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 4th ed. AACC Press, 1995.
6. Young DS. Effects of disease on clinical laboratory tests, 4th ed. AACC, 2001.
7. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd edition. Burtis CA, Ashwood ER. WB Sa unders Co., 1999.
8. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory tests, 3rd ed. AACC, 1995.
