МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ

УТВЕРЖДАЮ

Первт ~ еститель Министра


_

«20» 12 2012г.

Регистрационный № 000-1212

ПРОГНОСТИЧЕСКИЕ КРИТЕРИИ РЕАЛИЗАЦИИ РИСКА ВНУТРИУТРОБНОГО ИНФИЦИРОВАНИЯ В РАННЕМ НЕОНАТАЛЬНОМ ПЕРИОДЕ.

(инструкция по применению)

УЧРЕЖДЕНИЕ-РАЗРАБОТЧИК: Государственное учреждение образования «Белорусская медицинская академия последипломного образования»

АВТОРЫ: д. м.н., профессор , к. м.н. , к. м.н. доцент , к. б.н.

Минск, 2012

Настоящая инструкция по применению (далее - инструкция) описывает метод прогнозирования риска реализации внутриутробных инфекций и прогнозирования объемов энтерального жидкостного обеспечения и инфузионной терапии в раннем неонатальном периоде у недоношенных детей с риском реализации внутриутробного инфицирования на основании исследования уровня рецептора фактора некроза опухолей альфа (ФНО-а)- Р55. Определение уровня рецептора ФНО-а - р55 базируется на выявлении концентрации цитокинов в образцах мочи новорожденных, которое проводится с помощью «сэндвич»-ИФА на основе моноклональных антител по методикам, разработанным ранее в лаборатории клеточной и молекулярной иммунологии ГУ«РНПЦ трансфузиологии и медицинских технологии» под руководством д. м.н. профессора . Для прогнозирования реализации и тяжести течения внутриутробной инфекции у недоношенных детей проводится определение в 1-3 сутки жизни уровня растворимого рецептора ФНО-а р55 в моче, что является информативным неинвазивным методом, отражающим наличие и

выраженность системного воспаления.

Инструкция предназначена для врачей-неонатологов, врачей - анестезиологов-реаниматологов, врачей лабораторной диагностики.

ПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ

1.  недоношенные новорожденные в 1-3 сутки жизни;

2.  новорожденные дети с высоким риском инфицирования в 1-3

сутки жизни.

ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ

1. недоношенные дети, имеющие противопоказания к энтеральному

кормлению (врожденные пороки желудочно - кишечного тракта,

парез кишечника, патологическое содержимое в желудке).

ПЕРЕЧЕНЬ НЕОБХОДИМОГО ОБОРУДОВАНИЯ

«Сэндвич»-вариант твердофазного иммуноферментного анализа для количественного определения растворимого рецептора ФНО-а р55, разработанный в лаборатории клеточной и молекулярной иммунологии «РНПЦ гематологии и трансфузиологии» под руководством д. м.н. и описанный ранее (TNF receptor р55 and IL-872 and IL-877 isoforms: blood and urine levels in breast cancer patients / Shichkin V. P., Lon A. D., Yugrinova L. G., Grinevich Y. A., Belova O. B., Berezhnaya N. M., Akalovich S., Pashkova O., Voitenok N. N. // Journal of Immunotoxicology. - 2009. - Vol. 6. - P. 235-242).

ОПИСАНИЕ МЕТОДИКИ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ

1.1  Определение растворимого рецептора ФНО-а р55 в первой порции мочи в течение первых суток жизни недоношенного новорожденного ребенка.

Моноклональные антитела (МКА) В5, специфичные к растворимому рецептору ФНО-а р55, сорбируют на твердой фазе в концентрации 5 мкг/мл в 0,1 М карбонатном буфере, pH - 9,6 в течение 12-18 часов при +4°С.

В лунки вносят двукратные разведения растворимого р55 в качестве стандарта и разведения образцов биологических жидкостей в 10 шМ фосфатно-солевом буфере, pH - 7,4, содержащим 0,05% Твин-20 и 0,5% бычьего сывороточного альбумина (ФСБ-Т-БСА), и инкубируют при 18- 20°С в течение 50 мин при встряхивании.

Биотинилированные МКА АП, специфичные к растворимому рецептору ФНО-а р55, а затем и конъюгатстрептавидин - полипероксидазы хрена в ФСБ-Т-БСА вносят и инкубируют в течение 30-40 мин аналогично предыдущему этапу.

После каждого этапа инкубации планшеты промывают три раза 10 тМ фосфатно-солевым буфером, pH - 7,4, содержащим 0,05% Твин-20 (ФСБ-Т). Ферментативную активность пероксидазы измеряют в присутствии тетраметилбензидина при длине волны 450 нм.

1.2  Прогнозирование риска реализации внутриутробных инфекций у недоношенных детей на основании исследования уровня рецептора ФНО-а р55.

Повышение уровня растворимого рецептора ФНО-а р55 в моче на 1-3 сутки жизни у недоношенных новорожденных более 28,9 нг/мл является прогностически значимым критерием реализации внутриутробной инфекции и критерием тяжести течения раннего постнатального периода.

1.3  Прогнозирование энтерального жидкостного обеспечения и объемов инфузионной терапии в раннем неонатальном периоде у недоношенных детей с риском реализации внутриутробного инфицирования на основании исследования уровня рецептора ФНО-а р55.

При уровне содержания р55 в моче <28,9 нг/мл рекомендуется режим последовательного наращивания энтерального обеспечения (Таблица 1). Таблица 1 - Режим наращивания энтеральной нагрузки у

недоношенных новорожденных при низких уровнях содержания р55 в моче (< 28,9нг/мл)

Сутки жизни

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

:

Рекомендуемый энтеральный суточный объем, мл/кг

18

18

35

35

52

68

90

120

132

140

150

153

153

4

Если уровень р55 в моче больше 28,9 нг/мл (повышенное содержание), что ассоциируется с активностью системного воспалительного ответа, то имеется риск срыва энтерального обеспечения и развития некротического энтероколита. В этих случаях энтеральная нагрузка не должна превышать следующие величины (Таблица 2).

Таблица 2 - Режим наращивания энтеральной нагрузки у

недоношенных новорожденных при высоких уровнях содержания р55 в моче (>28,9нг/мл)

Сутки жизни

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

Рекомендуемый энтеральный суточный объем, мл/кг

15

18

22

33

44

57

58

63

84

97

120

118

133

139

1.4  Оценка результата

Недостающий жидкостной объем назначается в виде инфузионной терапии с элементами частичного парантерального питания в зависимости от возможностей. Но непременным условием является дотация базовых электролитов и, при энтеральном кормлении в объеме менее 50% жидкости поддержания - аминокислот. Повышение уровня растворимого рецептора ФНО-а р55 в моче недоношенных новорожденных на 1—3 сутки жизни более 28,9 нг/мл сопровождается нарушением энтерокинетики, проявляющимся в виде срывов энтеральной нагрузки и потребности в больших объемах и длительности инфузионного обеспечения; снижением объемов возможного энтерального обеспечения менее 17% от суммарного

5

необходимого количества жидкости при отсутствии увеличения энтеральной нагрузки к 3-4 суткам жизни.

ВОЗМОЖНЫЕ ОШИБКИ И ОСЛОЖНЕНИЯ

Отсутствуют.

6