ЩЕЛОЧНАЯ ФОСФАТАЗА (ЩФ)
ЭРБА, Cистемный Реагент
Применение
Реагент предназначен для in vitro диагностики щелочной фосфатазы в сыворотке и плазме.
Клиническое значение
Щелочная фосфатаза содержится в высокой концентрации в печени, в костях, плаценте, в кишечнике, злокачественных опухолях.
Повышение
Норма: Физиологическое повышение щелочной фосфатазы в сыворотке бывает у беременных женщин и у растущих детей.
Патология: Повышение активности щелочной фосфатазы (при нормальной активности GGT) наблюдается при заболеваниях печени, заболеваниях костей (рахит, остеомаляция, лимфогранулематоз, саркома), при болезни Hodgkins или при закупорке и остановке сердца. Повышение активности щелочной фосфатазы (при повышенной активности GGT) наблюдается при гепатите, циррозе, холестазе, злокачественных новообразованиях в костях и печени.
Понижение
Снижение уровня наблюдается при недостаточном питании
Метод
В соответствии с рекомендациями DGKC (Германское Общество Клинической Химии)
Принцип реакции
2-амино-2-метил-1-пропанол+ пара-нитрофенилфосфат +H2O
ЩФ
4-нитрофенол + 2-амино-2-метил-1-пропанол фосфат.
ЩФ : Щелочная Фосфатаза
Скорость образования окрашенного 4-нитрофенола пропорциональна активности щелочной фосфатазы. Максимум поглощения при 415 нм.
Состав реагентов
2-амино-2-метил-1-пропанол (АМП) рН9.8 650 ммоль/л
Mg+2 2.71 ммоль/л
Zn+2 1.36 ммоль/л
HEDTA 2.69 ммоль/л
p-паранитрофенилфосфат 19.51 ммоль/л
Меры предосторожности
Набор реагентов предназначен для in vitro диагностики профессионально обученным лаборантом.
Реагенты содержат азид натрия (0,9 г/л) в качестве консерванта. Реагент 2 содержит 3% фенол. Не глотать. Избегать попадания на кожу и слизистые.
Первая помощь
При приеме внутрь следует прополоскать рот водой, выпить 0,5 л воды и вызвать рвоту. При попадании в глаза быстро промыть их проточной водой. При попадании на кожу необходимо промыть теплой водой с мылом. Во всех серьезных случаях обратиться к врачу.
Приготовление рабочих реагентов
Реагенты (R1 и R2) готовы к использованию.
Для ручного метода исследования:
Смешать 4 части раствора реагента 1 (R1) с 1 частью раствора реагента 2 (R2), тщательно перемешать.
Хранение и стабильность
Не вскрытые реагенты стабильны до достижения указанного срока годности, если хранятся при 2-8°C.
Стабильность рабочего реагента
Рабочий реагент (4R1 : 1R2) стабилен
- 4 недели при 2-8°C
- 5 дней при 15 – 25 °C
при хранении в защищенном от света месте, избегая контаминации. Перед работой рекомендуется проверить рабочий реагент на пригодность.
Определение не пригодности реагента
- Замутнение
- Поглощение рабочего реагента > 1.25 при 405 нм
- Проверить попадание значений контролей в допустимый интервал
Образцы
Сыворотка без гемолиза или гепаризированная плазма. Антикоагулянты, такие как EDTA, цитрат, оксалат не использовать, так как они ингибируют активность щелочной фосфатазы. Активность ЩФ в сыворотке устойчива в течение 3 дней при 2-8°C или 4 часа при 20-25°C. Не замораживать образцы, это приводит к потере активности фермента. Если образцы были заморожены, после размораживания их необходимо стабилизировать при комнатной температуре 18 - 24 часа. Рекомендуется проводить анализ со свежеприготовленными образцами.
Дополнительные материалы необходимые для работы
- Анализатор с контролем температуры 37 ± 0.5°C
- Контрольный материал
- Калибратор
- Принадлежности к анализатору
Параметры для проведения анализа на полуавтоматическом анализаторе
Метод | Кинетика |
Длина волны1 (нм) | 405 |
Объем образца (мкл) | 10/20 |
Объем реагента (мкл) | 500/1000 |
Задержка ( Сек.) | 60 |
Интервал измерения ( Сек. ) | 60 |
Кол-во замеров | 1 |
Фактор | 2764 |
Температура реакции(°C ) | 37 |
Направление реакции | Увеличение |
Нижний предел нормы (Е/л) | 28 |
Верхний предел нормы (Е/л) | 111 |
Нижний предел линейности (Е/л) | 0 |
Верхний предел линейности (Е/л) | 700 |
Мин. Начальное поглощение | 1.25 |
Бланк | Реагент |
Единицы | IU/L(Е/л) |
Проведение анализа
Пипетирование | Тест |
Рабочий реагент | 1000мкл |
Образец | 20мкл |
Тщательно смешать, аспирировать
Расчеты
ЩФ активность (Е/л) = ΔA/мин. X Factor (2764) (37°C)
Протоколы для работы на автоматических биохимических анализаторах серии XL «Эрба Лахема с. р.о.», Чешская Республика могут быть получены по запросу.
Калибровка
Мы рекомендуем для калибровки автоматического анализатора использовать XL МультиКалибратор и Лионорм Калибратор, Кат.№ 000.
Контроль качества
Для проведения контроля качества рекомендуются контрольные сыворотки: Лионорм ГУМ Н, Кат.№ 000, Лионорм ГУМ П, Кат.№ 000
Коэффициент пересчета
Е/л х 0,017 = мккат/л
Специфичность / Влияющие вещества
Гемоглобин до 2,5 г/дл, билирубин до 20 мг/дл и триглицериды до 1000 мг/дл не влияют на результаты анализа.
Нормальные величины
Сыворотка/ Плазма 37°C
Девочки 1 - 12 лет < 500 Е/л (8,5 мкмоль/л)
> 15 лет 40 - 150 Е/л (0,68 - 2,55 мккат/л)
Женщины 20 – 50 лет 42 – 98 Е/л (0,714 - 1,67 мккат/л)
³ 60 лет 53 – 141 Е/л (0,9 - 2,4 мкмоль/л)
Мальчики 1 – 12 лет < 500 Е/л (8,5 мкмоль/л)
12 – 15 лет < 750 Е/л (12,75 мкмоль/л)
Мужчины 20 – 50 лет 53 – 128 Е/л (0,9 - 2,2 мкмоль/л)
³ 60 лет 56 – 119 Е/л (0,95 - 2,02 мкмоль/л)
Приведенные диапазоны величин следует рассматривать как ориентировочные. Каждой лаборатории необходимо определять свои диапазоны.
Воспроизводимость 37°C
Внутрисерийная | N | Среднеарифметическое значение (Е/л) | SD Е/л | CV ( % ) |
Уровень – 1 | 20 | 315.72 | 3.18 | 0.93 |
Уровень– 2 | 20 | 537.00 | 5.82 | 1.09 |
Межсерийная | N | Среднеарифметическое значение (Е/л) | SD Е/л | CV ( % ) |
Уровень– 1 | 20 | 81.60 | 1.74 | 2.15 |
Уровень – 2 | 20 | 216.12 | 4.38 | 2.02 |
Сравнение методов
Сравнение было проведено на 40 образцах с использованием ЭРБА реагентов ЩФ(у) и имеющихся
в продаже реагентов с коммерчески доступной методикой (х).
Результаты: y = 1.081x + 0.013 мккат/л
r = 0.996 (r – коэффициент корреляции)
Линейность
Реакция линейна до 960 Е/л. (16,00 мккат/л)
Чувствительность
Нижний предел определения - 2.2 Е/л (0.04 мккат/л)
Утилизация использованных материалов
В соответствии с существующими в каждой стране правилами для данного вида материала
Фасовка
Кат.№ | ЩФ Реагент -1 | ЩФ Реагент - 2 |
XSYS002 | 2 x 44 мл | 2 x 11 мл |
Литература
1. Zilva JF, Pannall PR, “Plasma Enzymes in Diagnosis” in Clinical Chemistry in Diagnosis and Treatment. Lloyd
London 1979 : Chapter 15 : 343.
2. IFCC method for the measurementof ALP J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1983 : 21 : 731-48.
3. Young DS. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. Third Edition 1990 : 3 : 19-25.
4. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, second Edition, WB Saunders 1994;
5 Kaplan and Pesce (Eds.) Clinical Chemistry, Theory analysis and correlation. Second Edition. CV Mosby.1989.
