ИФА в диагностике вирусных гепатитов.
Специфическая лабораторная диагностика вирусных гепатитов основывается на применении иммунохимических и молекулярно-биологических методов исследований. Основными иммунохимическими методами являются радиоизотопный или радиоиммунный (РИА) и иммуноферментный (ИФА). В основе иммунохимических методов диагностики лежит специфическое взаимодействие антиген — антитело с последующим выявлением комплекса при помощи специальных меток. Наиболее распространенным является иммуноферментный анализ. Первые сообщения о применении иммуноферментного анализа, как метода для определения каких-либо веществ были опубликованы в 1971 году одновременно двумя исследовательскими группами — В. VanWeemen, A. Schuurs и Е. Engvall, P. Perlmann. В основе иммуноферментного анализа лежит следующий принцип: на твердой фазе, в качестве которой используется, главным образом, поверхность лунок полистиролового планшета, фиксируется антиген возбудителя инфекции или антитела (часто смесь антител) к антигенам, которые необходимо обнаружить. Этот антиген или антитела, которые зафиксированы на твердой фазе, называются иммуносорбентом. В результате инкубации иммуносорбента и испытуемой сыворотки при наличии определяемого агента происходит их связывание в комплекс антиген — антитело. После процедуры промывки, в ходе которой удаляются несвязанные антигены и антитела, проводится инкубация с конъюгатом. В качестве конъюгата при детекции HBsAg используют анти-HBs, при детекции антител к вирусу гепатита С —антитела к иммуноглобулинам человека (антивидовойконъюгат), меченные пероксидазой хрена. В итоге этой инкубации происходит присоединение к уже имеющимся комплексам антиген — антитело дополнительно внесенного конъюгата. После удаления несвязавшегосяконъюгата (отмывки) в лунки вносится субстрат. При использовании пероксидазногоконъюгата в качестве субстрата используют перекись водорода в сочетании с индикатором, в качестве которого наиболее часто применяют ортофенилендиамин (ОФД) или тетраметилбензидин (ТМБ). Результат оценивается фотометрически. Качество и надежность аналитических возможностей иммуноферментного метода характеризуются рядом критериев, к числу которых относятся чувствительность, специфичность, правильность и воспроизводимость.
Для выявления вирусных гепатитов в организме медицина широко применяет метод иммуноферментного анализа, основанного на выявлении концентрации и вида антигенов с помощью антител и ферментов. Проводится поэтапно, путем лабораторных исследований, с высокой точностью показаний. В зависимости от количества и класса антител изменяется цвет и концентрация фермента, который использует ИФА и, согласно этому, врач диагностирует заболевание.
Наличие вирусного гепатита в организме больного определяют с помощью серологического метода анализа крови на присутствие вируса ВГВ, ВГС и маркеров, на него указывающих. Иммуноферментный анализ (ИФА) исследует разные вирусы, низкомолекулярные соединения, макромолекулы, их качественный и количественный показатели, используя проявление реакции на их антигены. Для этого применяют фермент, как метку для сигнальной регистрации. Его все шире используют в медицине, поскольку ИФА четко находит строго определенные антигены, не путая их с другими, имеет высокую чувствительность к наличию инвазии при вирусном гепатите.
Анализ нужно сдавать натощак.
Минус такой диагностики — невозможность выявить причину болезни, так как метод указывает только на реакцию иммунной системы организма. На результаты анализа влияет вакцинация, проведенная ранее. За 8 часов перед проведением анализа рекомендуется воздержаться от приема пищи, никотина, алкоголя. Основа ИФА теста — ферментативная и иммунная реакция организма на вирус. Биологические молекулы связываются с клеткой и ее элементами, микроорганизмами, обнаруживают вирус, далее работают ферменты, которые позволяют выразить иммунную реакцию в видимый и измеримый параметр.
Вирусные гепатиты в организме могут стать причиной возникновения онкологических заболеваний и цирроза печени. Важность своевременной диагностики неоспорима. Первичным способом диагностики является тест ИФА, который с высокой точностью определяет наличие HCV вируса (IgM и IgG) и активность его микроэлементов. В обязательном порядке анализы на вирусный гепатит сдают:
Люди с групп риска (наркозависимые, болеющие СПИДом, работники медицинских и правоохранительных учреждений).
Люди с острой или хронической формой гепатита.
Беременные и планирующие беременность женщины.
ИФА распознает болезнь на любой стадии. Результаты анализа, в среднем, готовы за 2 дня.
Иммуноферментный анализ крови поможет определить стадию болезни.
ИФА тест определяет наличие антител класса IgG, IgM, IgA. При диагностике вирусного гепатита врач не обращает внимания на их тип, так как присутствие любого такого проявления вируса HCV уже указывает на острую или хроническую стадию протекания болезни. На ранних стадиях заболевания повышается уровень IgM (через 5 дней после заражения); на 15—20 день появляются IgG антитела и могут долгое время находиться в крови человека даже после излечения; IgA — появляется через 10—14 дней, снижается после лечения.
В случае, если IgG и IgA обнаруживаются после применения препаратов и их уровень остается в том же показателе — у носителя хроническая форма гепатита. Важным критерием теста будет четкое определение класса имеющихся антител и их количества. На основании этого можно знать не просто о наличие заболевания, но и стадию его развития. Обнаружение таких элементов в крови больного дает возможность назначить правильное и своевременное лечение для предотвращения более тяжелых последствий.
В лабораторий ОЦ СПИД проводится исследование на Вирусные гепатиты на полуавтоматическом ИФА. Используют в работе высоко чувствительные и специфичные тест системы Российского производителя. Ежегодно участвует во Внешней Оценке Качества (ВОК) с правильным решением поставленных задач. За 2016 год сделано от 15080 лиц, 46013 анализов на разные виды вирусного гепатита. В том числе на ВГВ маркеры HBsAg – сделано 20275анализов от 15083лиц с 612(+)положительным результатом;
на ВГС сделано 20072анализов от 14887лиц с 934 (+) результатом;
И в дальнейшем социально значимые заболевание ВГС подтверждается следующими видами диагностики: ИФА на маркеры гепатитов и ПЦР РНК ВГС(качество), при ВГВ ПЦР на HBV ДНК (качественный тест, при положительном результате –количественный тест).
Зав. лаб. ОЦ МОЦ СПИД
16.05.2017.
