Методы размножения грибов и получения биопрепарата на основе beauveria tenella

І. БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ

МЕТОДЫ РАЗМНОЖЕНИЯ ГРИБОВ И ПОЛУЧЕНИЯ БИОПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ BEAUVERIA TENELLA

, 2,

(Узбекистан Ургенч)

Термиты являются наиболее распространенными насекомыми, с чрезвычайно высоко развитым общественным образом жизни. Термиты играют двоякую роль в природе. С одной стороны, они осуществляют важную позитивную биологическую роль, участвуя в круговороте веществ в природе.

Термиты активно участвуют в разрушении растительных остатков, с образованием органических субстратов и, тем самым, способствуют почвообразовательным процессам в естественной среде их обитания. С дугой стороны, они причиняют огромный социальный и экономический вред, методично и успешно уничтожая всевозможные творения человеческих рук.

Результатом их жизнедеятельности является огромный ущерб, причиняемый населенным пунктам. Все деревянные конструкции в постройках, в памятниках архитектуры и культуры, в гидротехнических сооружениях, в жилых и административных зданиях подвергаются их разрушительной деятельности.

Особенно остро проблема вредоносности термитов стоит в регионе экологической катастрофы Южного Приаралья.

Угроза разрушения от деятельности термитов нависла и над всемирно известными городами Центральной Азии, такими как Бухара, Самарканд и Хива. К историческим памятникам этих городов, имеющим большую культурную ценность, растет международный интерес, благодаря чему расширяется и увеличивается количество туристических маршрутов, Хива получила статус Уча­стка мирового наследия ЮНЕСКО.

Но недавно проведенные исследования показали, что в Хиве 40 строений в крепости и 270 жилых строений вне крепости в значительной степени поражены термитами. Среди поврежденных - исторические памятники, такие как Куня Арк, Палвон Кари, мечеть Джума, минареты Хорезм Шахов и мавзолей Пахлаван Махмуда.

На земле нет другого насекомого, которое с такой методичностью и так успешно уничтожало бы всевозможные творения человеческих рук, как это делают термиты, обитающие в тропических, субтропических и жарких странах. По сравнению с другими вредителями планеты термиты наносят значительно больший урон сооружениям.

Общественный образ жизни, функциональная специализация каст в термитниках, высокая численность и степень защищенности от внешних экологических факторов делают их способными быстро восстанавливать популяцию с ничтожно малого числа оставшихся живых особей после истребительных мероприятий. Так как самка "царица" термита за сутки может отложить до 30 тыс., а за всю жизнь несколько десятков миллионов яиц. Колонии термитов проводят скрытый образ жизни в подземелье. Они также строят гнезда над землей в стенах и крышах домов, в дуплах деревьев.

Лет крылатых половых особей или "роение" термитов обычно бывает один раз в год (весной или осенью). "Роение" обычно происходит после дождя или между дождями, в основном днем при температуре воздуха 15-20°С. Оно может завершиться за короткое время (30-40 мин.). По завершению лета термиты обламывают крылья и начинают искать особь противоположного пола. После встречи они подыскивают подходящее место и начинают закапываться в почву для создания гнезда новой семьи.

Для поддержания жизнеспособности культур грибов, выделенных из термитов, почвы и растений, а также для размножения их проводили пересев их на стандартных питательных средах по общепринятой в микологии методике, а именно, небольшое количество спор с чистых грибных культур переносится, при помощи петлички, на свежеприготовленные агаризованные среды. После периода инкубации при 24оС и визуальной проверки чистоты пересеянного материала, культуры закладывали на хранение или использовали для проведения экспериментов. Размножение энтомопатогенного гриба B. tenella, для получения биопрепарата, проводили с некоторыми изменениями классического метода, а именно, для получения чистой без посторонних примесей грибной массы, использовали разделительную мембрану.

В качестве разделительной мембраны использовали целлофановые диски (диаметром 12 см), которые предварительно кипятили в течение 15 мин. в дистиллированной воде, затем раскладывали и плотно прижимали при помощи стеклянного шпателя к поверхности среды (картофельный агар или агар Чапека).

Водную суспензию спор B. tenella готовили путем смыва стерильной водой (10 мл) с поверхности колонии гриба, выращенного в пробирке. Затем 0.2 мл полученной суспензии вносили в 1 чашку, подготовленную вышеописанным способом, и равномерно распределяли по всей поверхности (посев методом «газон»).

Инкубирование инокулированных чашек Петри проводили при 24оС в течение 15-20 суток. Сбор грибной пленки с поверхности целлофанового диска и высушивание биомассы проводили при комнатной температуре. Во время сушки проводили контрольные взвешивания до получения воздушно-сухой грибной массы.

Для получения биопрепарата, полученную сухую массу гриба растирали в ступке, просеивали через сито с порами диаметром 0.25, расфасовывали по 1.0 г в специальные ампулы и проводили их запайку на специальном стенде – вакуумном коллекторе (Методы размножения, консервирования и хранения уредоспор ржавчинных грибов, 1990).

При выращивании грибов на жидких питательных средах часть токсинов и других биологически активных веществ, вырабатываемых микомицетом, переходит в среду. По действию культуральной жидкости на живые тест-объекты (термиты) можно судить о степени токсичности тестируемого гриба.

При глубинном культивировании, в колбу, содержащую 300 мл жидкой питательной среды (картофельная среда, среда Чапека) вносили 5,0 мл водной суспензии с титром 5-6х106 грибных спор/мл. Инокулированные колбы помещали на стационарную качалку на весь период инкубации при комнатной температуре.

В экспериментах использовали или фильтрат культуральной жидкости или культуральную жидкость вместе с мицелиальной грибной массой.

Фильтрат культуральной жидкости получали путем фильтрации через бумажный фильтр. В результате происходило отделение мицелиальной массы гриба от его культуральной жидкости.

Инокуляцию термитов проводили путем скармливания искусственно зараженного корма (Евлахова, Швецова, 1964).

Термитов (по 20 особей в каждой повторности опыта) помещали в предварительно подготовленные камеры. Камерами служили чашки Петри с фильтровальной бумагой, размером 3х3см, каждый. Фильтровальная бумага служила в качестве корма для опытных термитов.

В опытных вариантах, фильтровальную бумагу предварительно обрабатывали 1 мл водной суспензии грибных спор с титром 5х106 спор на мл воды.

При определении эффективной концентрации энтомопатогена в антитермитной приманке, заражение проводили путем использования фильтровальной бумаги или измельченных стеблей подсолнечника с нанесенной на них водной суспензии, содержащей от 2.5 до 100 мг грибных пропагул в 1 мл воды.

Контролем служили бумажные диски, смоченные водой или жидкой питательной средой.

Повторность опытных и контрольных вариантов – 5-ти кратная. Учеты погибших термитов проводили на 5, 10, 15, 20 и 30 сутки.

Расчеты гибели термитов в опытах рассчитывали по формуле Аббот

Х=(Мо-Мк):(100-Мк)х100,

где Мо – количество погибших насекомых в опыте,

Мк – количество погибших насекомых в контроле.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1.Абдуллаев особенности термитов хорезмского оазиса и меры предотвращения их вреда.: Автореф. дисс... наук. –Ташкент: 2002. -22с.

2. рибные заболевания озимой совки (Agrotis segetum Schiff.) в Ташкентской области и их перспективы в биологической борьбе.: Дисс… канд. биол. наук. –Ташкент: 1978. -109 с.

3. Алешина и перспективы изучения энтомопатогенных грибов в СССР // Микология и фитопатология. – М.-Л., 1978, - том 12, выпуск 6, С. 457-460.

4. , , Кононова сохранения жизнеспособной культуры Beauveria bassiana (Bals.) Vuil // Микология и Фитопатология. –М.-Л., 1973, - том 7, выпуск 5, С.455-456.

5. , , Янгулова свойства экстрактов из мицелия грибов. // Антибиотики, 1961, №2, с.108-111.

6. Василевский мюскардина и ее возбудители – Spicaria aphodii Vuill. S. fumoso-rosea (Wize). // В кн.: Болезни растений. Вестник отдела фитопатологии Главного Ботанического сада. Л. 1929, 18, №3, с.113-148.

7. Велицкая жидких питательных сред для выращивания энтомопатогенного гриба Beauveria bassiana (Bals.) Vuill.//Ботанический журнал, 1961, т.46, №10, с.1504-1507.

Для преподавателей и научных сотрудников:

1) фамилия, имя, отчество автора; Абдуллаев Икром Искандарович

2) научная степень и ученое звание (при наличии); доктор биологический наук

3) полное название высшего учебного заведения или научного учреждения, в котором работает участник конференции; Ургенческий Государственный университет

4) название кафедры (отдела) и посада; Биология

5) контактный телефон; [phone]

6) электронный адрес;*****@***ru

7) электронный сертификат участника конференции (нужен).

1) фамилия, имя, отчество автора; Досчанова Манзура Бахтяровна

2) научная степень и ученое звание (при наличии); препадаватель

3) полное название высшего учебного заведения или научного учреждения, в котором работает участник конференции; Ургенческий Государственный университет

4) название кафедры (отдела) и посада; Почваведения

5) контактный телефон; [phone]

6) электронный адрес; *****@***ru7)

электронный сертификат участника конференции (нужен).