Оценка результатов
Таблица 2
Индекс | Интерпретация результатов | |
1 | ОП образца < 0,9 ОПкрит. | Отрицательный результат. При постановке на выявление одного класса антител указывает на то, что тестируемый образец либо не содержит антител класса G к Helicobacter pylori, либо уровень антител не детектируется. При этом образцы могут содержать антитела класса А или М к Helicobacter pylori |
2 | 0,9 ОПкрит. < ОП образца < 1,2 ОПкрит. | Сомнительный результат «серая зона». Повторить анализ. Если повторное исследование выявило, что ОП образца меньше ОПкрит. - результат считается отрицательным. Если ОП образца больше ОПкрит., то руководствуются п. З |
3 | 1,2 ОПкрит. < ОП образца < 3,5 ОПкрит. | Слабоположительный результат. Указывает либо на постинфекционный период, либо раннюю стадию сероконверсии. Рекомендуется провести повторное исследование пациента через 2-3 недели
|
4 | 3,5 ОПкрит. < ОП образца | Положительный
|
Интенсивность окрашивания коррелирует с титром антител к H. рylori в исследуемом образце. Рекомендуется соотносить данные серологического обследования с результатами других диагностических методов исследования, направленных на выявление антигенов или антител к H. рylori, а также с клинической картиной заболевания и на основании комплексных клинико-лабораторных исследований ставить окончательный диагноз.
Форма выпуска
1. Иммуносорбент – планшет с иммобилизованным рекомбинантным антигеном
Helicobacter pylori 1 шт.
2. Контрольный положительный образец,, инактивированный (К+) 1,3 мл
3. Контрольный отрицательный образец, инактивированный (К-) 1,5 мл
4. Конъюгат (антитела против иммуноглобулинов G человека
с пероксидазой хрена) 0,2 мл
5. Разводящий буферный раствор для сывороток (РБР-С) 11 мл
6. Разводящий буферный раствор для конъюгата (РБР-К) 13 мл
7. Концентрат фосфатно-солевого буферного раствора
с твином (ФСБ-Т), 25-ти кратный 26 мл
8. Буферный раствор для субстрата (БРС) 13 мл
9. Хромоген: ТМБ в DMSO 0,7 мл
10. Стоп-реагент 6 мл
Срок годности, условия хранения и транспортирования
Срок годности тест-системы 9 месяцев со дня выпуска. Препарат с истекшим сроком годности применению не подлежит.
Хранение в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8 ºС.
Транспортирование производить в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8 ºС. Допускается транспортирование при температуре до 25 ºС в течение 10 суток. На дальние расстояния только авиатранспортом.
Рекламации на качество наборов направлять в ООО “ИмДи-спектр” по адресу: (630559, Новосибирская область, Новосибирский р-н, пгт. Кольцово, а/я 172, тел./
ИНСТРУКЦИЯ
ПО ПРИМЕНЕНИЮ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИДОСПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ КЛАССА G к HELICOBAKTER PYLORI
«Хелико-IgG-антитела»
Настоящая инструкция распространяется на иммуноферментную тест-систему для выявления видоспецифических антител класса G к возбудителю хеликобактериоза - Helicobacter pylori. Желудочный бактериальный патоген - Helicobacter pylori является основной причиной развития хронического гастрита, язвенной болезни и, возможно, рака желудка. Основные пути передачи возбудителя: фекально-оральный и орально-оральный. Попав в желудок, возбудитель годами персистирует в слизистой оболочке, вызывает ее хроническое воспаление, атрофию, метаплазию и повышение секреции соляной кислоты, что ведет к формированию хронического гастрита и язвенной болезни.
Тест-система представляет собой многокомпонентный набор реагентов для постановки непрямого иммуноферментного анализа (ИФА) на твердофазном носителе, включающий в себя компоненты: иммуносорбент – 96-луночные – стрипованные планшеты с сорбированным рекомбинантными антигенами Helicobacter pylori; положительный контрольный образец (К+) – инактивированная сыворотка крови человека, содержащая антитела класса G к Helicobacter pylori – прозрачная жидкость красного цвета; отрицательный контрольный образец (К-) - инактивированная сыворотка крови человека, не содержащая антитела класса G к Helicobacter pylori – прозрачная бесцветная или светло-желтого цвета жидкость; конъюгат (Кг) – моноклональные антитела мыши к IgG человека, конъюгированные с пероксидазой хрена - прозрачная жидкость зеленого цвета; разводящий буферный раствор для коньюгата (РБР-К) - прозрачная жидкость зеленого цвета; разводящий буферный раствор для сывороток (РБР-С) – прозрачная жидкость синего цвета; фосфатно-солевой буферный раствор с твином (ФСБ-Т) - прозрачная, слегка опалесцирующая, бесцветная жидкость; буферный раствор для субстрата с перекисью водорода (БРС) - прозрачная бесцветная жидкость; хромоген: тетраметилбензидин (ТМБ) - бесцветная или бледно-желтая жидкость; стоп-реагент - раствор серной кислоты с концентрацией 0,9 моль/л - бесцветная прозрачная жидкость.
Один набор рассчитан на проведение 96 анализов, включая контрольные образцы.
Назначение
Тест-система предназначена для выявления антител класса lgG к антигенам Helicobacter pylori в сыворотке (плазме) крови человека и рекомендуется для эпидемиологического скрининга крови, для диагностики заболеваний желудка и двенадцатиперстной кишки, как составная часть комплексного обследования пациентов с данной патологией.
Способ применения
Для исключения ложноположительных результатов исследуемые сыворотки необходимо готовить и хранить в стерильных условиях, исключающих возможность бактериального пророста. Необходимо осветлять образцы сывороток, содержащих осадок и агрегаты, путем центрифугирования.
Не использовать сыворотки с выраженным гемолизом, гиперлипедимией и бактериемией. Избегать повторных циклов замораживания-оттаивания образцов. Не допускается тестирование пула, содержащего несколько образцов сывороток.
Предупреждение! Несмотря на то, что тест-система «Хелико-IgG-антитела» является полностью биологически безопасной, с ней следует обращаться, как с потенциально инфекционным материалом:
- не пипетировать растворы ртом;
- работать в резиновых перчатках;
- все использованные материалы подвергать обработке раствором этилового спирта с объемной долей 70 % или раствором перекиси водорода с массовой долей 6 % с последующей выдержкой при температуре от 20 до 25 °С не менее 2 ч.
Окисляющие агенты, ионы металлов, моющие средства на посуде могут разлагать ТМБ. Во избежание ложных результатов необходимо тщательно отмывать посуду дистиллированной водой с последующей отмывкой раствором этилового спирта с объемной долей 70 %.
Для проведения анализа дополнительно требуются следующие материалы:
-дистиллированная вода;
-спирт этиловый и перекись водорода;
-резиновые перчатки.
Внимание! При проведении анализа нельзя использовать компоненты из наборов разных серий или смешивать их в процессе приготовления растворов.
1. Приготовление реагентов
Внимание: Перед использованием набора все компоненты тест-системы необходимо выдержать не менее 30 минут при температуре 18-25оС.
При постановке ИФА нельзя использовать компоненты из наборов разных серий или смешивать их при приготовлении растворов.
1. Приготовление реагентов.
1.1 Приготовление ФСБ-Т
При наличии во флаконе с ФСБ-Т визуально определяемого осадка солей флакон с концентратом выдержать при температуре (37±1) °С до полного растворения солей.
Содержимое одного флакона с ФСБ-Т перенести в мерный цилиндр вместимостью 1 л и довести объем раствора до 650 мл дистиллированной водой.
В случае использования одного или нескольких стрипов планшета в мерный цилиндр внести концентрат ФСБ-Т из флакона и добавить дистиллированную воду в соответствии с таблицей 1.
Хранение: неиспользованный концентрат ФСБ-Т хранить при температуре от 2 до 8°С в течение срока годности набора, раствор ФСБ-Т - при температуре от 2 до 8 °С в течение месяца.
1.2 Подготовка РБР-С, РБР-К, БРС
РБР-С, РБР-К, БРС - готовы к использованию.
В РБР-С и РБР-К возможно выпадение осадка. Перед использованием тщательно перемешать.
Хранение: после вскрытия флакона раствор хранить при температуре от 2 до 8°С в течение срока годности набора.
1.3 Подготовка контрольных образцов.
К+ и К - готовы к использованию.
Хранение: после вскрытия флакона до 48 ч при температуре от 20 до 25 °С, в течение срока годности набора при температуре от 2 до 8 °С.
1.4 Приготовление рабочего разведения конъюгата
Для приготовления рабочего разведения конъюгата в чистый флакон отобрать необходимое количество РБР-К в мл и добавить конъюгат в соответствии с таблицей 1. Раствор тщательно перемешать, не допуская вспенивания.
Хранение: рабочий раствор конъюгата до 15 мин при температуре от 20 до 25 °С, остаток концентрата при температуре от 2 до 8°С в течение срока годности набора.
1.5 Приготовление рабочего раствора субстрата.
При пониженной температуре возможна кристаллизация ТМБ во флаконе. В этом случае перед приготовлением рабочего раствора субстрата выдержать флакон с ТМБ в течении 3-5 минут при температуре (37±1)°С до полного растворения ТМБ.
Раствор ТМБ готовить непосредственно перед использованием в защищенном от света месте.
Для приготовления рабочего разведения ТМБ в чистый флакон отобрать необходимое количество БРС в мл и добавить ТМБ в соответствии с таблицей 1.
Раствор тщательно перемешать, не допуская вспенивания.
Хранение: рабочий раствор субстрата до 20 мин при температуре от 20 до 25 °С в защищенном от света месте, остаток ТМБ хранить в течении срока годности набора при температуре от 2 до 8°С.
1.6 Подготовка стоп-реагента.
Стоп –реагент готов к использованию.
Хранение: не ограничено.
2. Подготовка исследуемых образцов
Для выявления антител класса G к Helicobacter pylori использовать сыворотку (плазму) крови человека как свежеприготовленную, так и хранившуюся в течении 24 ч при температуре от 2 до 8°С или в течении трех месяцев при температуре минус 20 °С. Для проведения анализа использовать образцы сыворотки (плазмы) крови человека объемом не менее 20 мкл.
Каждый образец сыворотки или раствора необходимо отбирать новым наконечником. Для отбора исследуемых проб и компонентов применять автоматические пипетки с погрешностью измерения объёма не более 5 %.
3. Проведение иммуноферментного анализа
Набор тест-системы перед проведением анализа выдержать в течении 30 минут при температуре 20 - 25°С.
Проведение первой реакции
В лунки планшета А1 и В1 внести по 100 мкл К+, в лунки С1 и Д1 внести по 100 мкл К-.В остальные лунки планшета внести по 90 мкл разводящего буферного раствора для сывороток (РБР-С). Лунку H1 оставить с РБР-С для контроля конъюгата. В остальные лунки планшета внести сыворотки объемом по 10 мкл и тщательно перемешать пипетированием, при этом цвет РБР-С должен измениться.
После этого планшет закрыть крышкой или клейкой лентой и инкубировать 30 мин при температуре (37±1) °С.
По окончании инкубации содержимое лунок собрать в сосуд с дезинфицирующим раствором. Планшет промыть 5 раз раствором ФСБ-Т, при помощи автоматического промывателя или вручную, добавляя раствор в каждую лунку не менее 250 мкл, в процессе одного промывания. Время между заполнением и опорожнением лунок должно быть не менее 10 сек., остатки влаги удалить, постукивая планшетом по сложенной в несколько раз фильтровальной бумаге.
Проведение второй реакции
После промывки и удаления влаги в каждую лунку внести по 100 мкл конъюгата в рабочем разведении (приготовление см. п. 1.4.). Планшет закрыть, как описано выше, и инкубировать 30 мин при
температуре (37±1) °С.
По окончании инкубации содержимое лунок собрать в сосуд с дезинфицирующим раствором. Планшет промыть 5 раз раствором ФСБ-Т, при помощи автоматического промывателя или вручную, добавляя раствор в каждую лунку не менее 250 мкл, в процессе одного промывания. Время между заполнением и опорожнением лунок должно быть не менее 10 сек., остатки влаги удалить, постукивая планшетом по сложенной в несколько раз фильтровальной бумаге.
Проведение ферментативной реакции
Внести в каждую лунку планшета по 100 мкл раствора субстрата (приготовление см. п. 1.5). Планшет закрыть, как описано выше, и поместить на 15 мин в защищенное от света место при температуре (37±1) °С.
Реакцию остановить внесением в каждую лунку планшета по 50 мкл стоп-реагента и измерить оптическую плотность.
Внимание! Стоп-реагент представляет собой раствор серной кислоты с концентрацией 0,9 моль/л. В случае попадания на кожу раствора хромогена или стоп-реагента необходимо их немедленно смыть водой с мылом.
Учет результатов
Результаты ИФА регистрируют на спектрофотометре. Оптическую плотность (ОП) измеряют при длине волны 450 нм. Нулевой уровень («бланк») задают по воздуху. Измерение проводят сразу или в течении 20 минут после остановки реакции.
Результаты учитывают только в том случае, если среднее значение ОП в лунках с контролем коньюгата ОП(ККг) не превышают 0,15, в лунках с К - среднее значение ОП (ОПК-(ср.)) не более 0,2, а в лунках с К+ среднее значение ОП (ОПК+) не менее 0,7.
Результаты теста считаются положительными, если ОП анализируемой сыворотки больше ОПкрит.
ОПкрит. рассчитывают по формуле:
ОП крит. = ОПК-(ср.) + 0,25
При визуальной оценке результатов положительным считают образец, дающий желтое окрашивание раствора различной интенсивности.
