Определение групповой принадлежности крови по системе АВО

Определение групповой принадлежности  крови по системе  АВО

  (Эритротестомтм  - цоликлонами Анти – А и Анти – В и Анти – АВ)

Оснащение: цоликлоны Анти – А и Анти – В и Анти – АВ, пипетки для взятия и нанесения сывороток, маркированные белые фаянсовые или стандартные планшеты, стеклянные палочки, 0,9% раствор хлорида натрия, песочные часы на 5 мин.

Эритротесттм  - цоликлон Анти – А и Анти – В и Анти – АВ предназначены для определения групп крови человека системы АВО в прямых реакциях гемагглютинации и применяются взамен или параллельно с поликлональными иммунными сыворотками.

Цоликлоны выпускаются в жидкой форме во флаконах объемом 10мл. Цоликлон Анти – А – бесцветный. В качестве консерванта применяется азид натрия в конечной концентрации 0,1%.

Срок хранения – 2 года при температуре 2 - 8°. Вскрытый флакон можно хранить при температуре 2 - 8°С в течение месяца в закрытом виде.

Выполнение манипуляции

Определение производится в нативной крови, взятой в консервант; в крови, взятой без консерванта; в крови, взятой из пальца. Используется метод прямой гемоагглютинации на плоскости: на пластине или планшете. Определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 - 25°С.

Нанесите на планшет или пластину индивидуальными пипетками Цоликлоны Анти – А, Анти – В и Анти – АВ по одной большой капле (0,1мл) под соответствующими надписями. Рядом с каплями антител нанесите по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01-0,03мл). Смешайте кровь с реагентом. Наблюдайте за ходом реакции с Цоликлонами визуально при легком покачивании пластины или планшета в течение 3мин. Агглютинация эритроцитов с Цоликлонами обычно наступает в первые 3 – 5сек, но наблюдение следует вести 3мин ввиду более позднего  появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются. Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с Цоликлонами представлена в таблице

Результат реакции* с Цоликлном	Исследуемая кровь принадлежит к группе*
Анти – А	Анти – В	Анти – АВ
-	-	-	О (I)
+	-	+	А (II)
-	+	+	В (III)
+	+	+	АВ (IV)

* Знаком (+) обозначено наличие агглютинации, знаком (-) - отсутствие агглютинации.

** Окончательно АВО принадлежность устанавливается по результатам перекрестного определения: антигенов А и В на эритроцитах и изогемагглютининов в сыворотке.

Контроль специфичности реакции агглютинации

В составе Цоликлонов нет высокомолекулярных  добавок, способных вызвать неспецифическую полиагглютинацию эритроцитов, поэтому не требуется проведения контроля с растворителями. При положительном результате реакции агглютинации со всеми тремя Цоликлонами необходимо исключить спонтанную неспецифическую агглютинацию исследуемых  эритроцитов.  Для этого смешайте на плоскости 1 каплю исследуемой крови (эритроцитов) с каплей физиологического раствора. Кровь можно отнести к группе АВ (IV)только при отсутствии агглютинации эритроцитов в физиологическом растворе.

Завершение манипуляции:

После определения группы крови необходимо сделать отметку о групповой принадлежности на лицевой части истории болезни, занести данные в протокол гемотрансфузии и журнал определения группы крови и резус принадлежности. Использованный материал обрабатывается в соответствии с отраслевыми нормативными документами по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения. Провести дезинфекцию и утилизацию медицинских отходов в соответствии с СаНПиН 2.1.7.728-99 «Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений»

Определение резусной принадлежности крови

Оснащение:  ЭритротестТМ  - Цоликлон Анти – D Супер, пробирки, 0,9% раствор хлорида натрия, маркированные белые фаянсовые или стандартные планшеты, стеклянные палочки,

ЭритротестТМ  - Цоликлон Анти – D Супер предназначен для выявления D антигена системы резус в эритроцитах человека.

Цоликлон Анти – D Супер выпускается в жидкой форме во флаконах по 2,5 или 10мл (1мл содержит 10доз). В качестве консерванта применяется азид натрия в конечной концентрации 0,1%.

Срок хранения – 1 год в холодильнике при 2 - 8°С. Вскрытый флакон можно хранить в холодильнике в течение месяца в закрытом виде.

Выполнение манипуляции

Реакция агглютинации на плоскости

На пластинку со смачиваемой поверхностью нанесите большую каплю (около 0,1мл) реагента. Рядом поместите маленькую каплю (0,01 – 0,05мл) исследуемой крови и смешайте кровь с реагентом. Наиболее крупная агглютинация наблюдается при использовании эритроцитов в высокой концентрации. Реакция агглютинации начинает развиваться через 10 – 15сек. четко выраженная агглютинация наступает через 30 – 60сек. Использование подогретой до 37 - 40°пластинки сокращает время наступления агглютинации. Результаты реакции учитывайте через 3мин.  Пластинку после смешивания реагента с кровью рекомендуется покачивать не сразу, а через 20 – 30сек., что позволяет за это время развивать более полной крупнолепестковой агглютинации – резус положительный, если нет агглютинации – резус отрицательный.

Завершение манипуляции:

После определения резус-фактора необходимо сделать отметку о групповой принадлежности на лицевой части истории болезни, занести данные в протокол гемотрансфузии и журнал определения группы крови и резус принадлежности. Использованный материал обрабатывается в соответствии с отраслевыми нормативными документами по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения. Провести дезинфекцию и утилизацию медицинских отходов в соответствии с Сан. ПиН 2.1.7.728-99 «Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений»

Проведение пробы на индивидуальную совместимость.

Пробу на совместимость следует производить двояко: проба на

совместимость по группам крови системы АВО и проба на совместимость по резус-фактору.

Проба на совместимость по группам крови производится на тарелке общепринятым способом:

- к двум каплям сыворотки реципиента прибавляют в 5 - 8 раз меньшую каплю эритроцитов донора, капли перемешивают и учитывают результат в течение 5 минут.

- При появлении агглютинации проба считается положительной, кровь несовместимая.

Если реакция окажется отрицательной, то необходимо сразу приступить к проведению пробы на совместимость по резус-фактору.

Для пробы на совместимость по резус-фактору рекомендуется использовать одну из следующих методик:

Проба на совместимость переливаемой крови по резус-фактору с

использованием 33% раствора полиглюкина.

- Пробу проводят в пробирке без подогрева в течение 5 минут.

- На дно пробирки, на которой предварительно сделаны соответствующие обозначения, наносят 2 капли сыворотки реципиента, 1 каплю донорской крови и 1 каплю 33% раствора полиглюкина, специально приготовленного для лабораторных целей.

- Содержимое пробирки перемешивают путем встряхивания, затем пробирку наклоняют почти до горизонтального положения и медленно поворачивают таким образом, чтобы содержимое растекалось по стенкам пробирки. Эту процедуру продолжают 5 минут.

- После этого в пробирку доливают 3-4мл. изотонического раствора хлорида натрия, перемешивают содержимое путем 2-3 кратного перевертывания пробирки (не взбалтывать!) и просматривают на свет невооруженным глазом. Оценка результатов: наличие агглютинации эритроцитов на фоне просветленной или полностью обесцвеченной жидкости указывает на то, что кровь донора несовместима с кровью реципиента и не может быть ему перелита. Если содержимое пробирки остается равномерно окрашенным, без признаков агглютинации эритроцитов, кровь донора совместима с кровью реципиента в отношении резус-фактора.

2. Проба на совместимость переливаемой крови по резус-фактору с

использованием 10% раствора желатины. Пробу производят в пробирках при температуре 46-48°С. На дно пробирки, соответственно обозначенной, помещают 1 каплю эритроцитов донора, предварительно отмытых десятикратным объемом изотонического раствора хлорида натрия. Затем добавляют туда 2 капли подогретого до разжижения 10% раствора желатины и 2-3 капли сыворотки реципиента. Раствор желатины перед употреблением необходимо тщательно просмотреть. При помутнении или появлении хлопьев - желатина непригодна. Содержимое пробирки перемешивают путем встряхивания и помещают в водяную баню при температуре 46-48" С на 10 мин. Затем пробирку извлекают из водяной бани, добавляют в нее 5-8 мл. изотонического раствора хлорида натрия, перемешивают содержимое путем 1-2 кратного перевертьюания пробирки и просматривают на свет невооруженным глазом или через лупу.

Оценка результатов: наличие агглютинации в виде взвеси мелких, реже крупных комочков на фоне просветленной или полностью обесцвеченной жидкости означает, что кровь донора несовместима с кровью реципиента и не должна быть ему перелита. Если содержимое пробирки остается равномерно окрашенным, слегка опалесцирует и в ней не наблюдается агглютинация эритроцитов, кровь донора совместима с кровью реципиента в отношении резус-фактора.

При отсутствии полиглюкина и желатины, в экстренных ситуациях допустимо проведение пробы на совместимость по резус-фактору на водяной бане. На чашку Петри наносятся 2 большие капли сыворотки реципиента и к ним прибавляется полкапли крови донора. Капли перемешивают и чашка помещается на водяную баню (46°С) на 10 минут.

Затем просматривают результат по агглютинации. Если агглютинация

отсутствует, следовательно, кровь совместима по резус-антигенам.

• В некоторых случаях положительная реакция может быгь неспецифического характера, что иногда наблюдается с кровью больных, страдающих заболеваниями системы крови, но и в таком случае надо считать кровь несовместимой и не переливать ее.

• Трансфузия крови возможна лишь тогда, когда врач абсолютно уверен в том, что при производстве пробы на совместимость не наступило никакой агглютинации.

Проведение биологической пробы.

Первые 45 мл крови вводят внутривенно струйно в три этапа по 15 мл с паузой в 3 мин. Отсутствие признаков несовместимости после вливания 45 мл крови позволяет производить переливание крови без перерыва.

При переливании нескольких порций от разных доноров пробы производят с каждой новой порцией.

Проба считается положительной в случае если после переливания 15мл крови больные жалуются на ломоту, боли в мышцах, конечностях, груди, тошноту, головокружение, сердцебиение, шум в ушах, расстройства зрения и прочие явления субъективного характера.

Возможно возникновение вазомоторных расстройств: резкая бледность, обычно сменяющаяся цианозом, частый малый пульс. Дыхание учащается и становится поверхностным, артериальное давление заметно снижается, больной покрывается холодным потом. Затем появляется непродолжительный озноб, сопровождающийся повышением температуры до субфебрильных цифр. Нередко наблюдается крапивница.

• Синдром несовместимости не всегда клинически выявляется после

однократного введения 15мл групповонесовместимой крови. Поэтому показано обязательное проведение троекратной биологической пробы.

• Если биологическая проба положительная, следует переливание крови прекратить и начать проводить противошоковую терапию.