Азур-эозин метиленовый синий раствор по Гимзе
- для окрашивания образцов крови и костного мозга, парафиновых срезов и клинико-цитологических образцов.
Азур-эозин метиленовый синий раствор по Гимзе используется для исследования гематологических, гистологических и клинико-цитологических образцов в медицинской диагностике.
Принцип
Окрашивающий раствор по Гимзе часто используется для гематологических и гистологических исследований.
Для диагностики гематологических образцов раствор по Гимзе используется в сочетании с другими окрашивающими растворами, например, с раствором Май-Грюнвальда для окрашивания по Паппенгейму. С помощью этого раствора ядра окрашивают в красный цвет, что происходит за счет молекулярного взаимодействия между эозином Y и комлексом азур В-ДНК. Оба красителя соединяются в комплекс Эозин Y - Азур B-ДНК, при этом интенсивность окрашивания зависит от содержания Азура В и соотношения Эозин Y: Азур B.
Помимо этого, результат окрашивания может зависеть от фиксации, времени окрашивания, значения рН растворов или буферных субстанций.
В гистологических и клинико-цитологических исследованиях раствор Гимзе используется без дополнительных красителей. При этом цвет различных клеточных компонентов зависит от предварительной обработки образца. В частности, цвет ядра может принимать различные оттенки синего, а ацидофильные компоненты – оттенки красного.
Образцы
Срезы фиксированных формалином и залитых парафином тканей (парафиновые срезы толщиной 3 – 4 мкм) или свежие образцы, мазки крови или костного мозга, клинико-цитологические образцы, например, седимент мочи, мокрота, импринты, смывы, образцы биопсии, полученные тонкоигольной аспирацией.
Реактивы
109204 Азур-эозин метиленовый синий раствор по Гимзе для микроскопии | 100 мл, 500 мл, 1 л, 2,5 л |
Дополнительно необходимо: | |
- для окрашивания мазков, высушенных на воздухе: | |
106009 Метанол для анализа EMSURE® ACS, ISO, Reag. Ph Eur | 1 л, 2,5 л, 5 л |
109468 Таблетки для приготовления буф. раствора с рН 7.2 для окрашивания по Вейзе | 100 таблеток |
111374 Таблетки для приготовления буф. раствора с рН 6,8 для окрашивания по Вейзе | 100 таблеток |
- для окрашивания парафиновых срезов | |
100063 Уксусная кислота (ледяная), 100 %, безводная, для анализа EMSURE® ACS, ISO, Reag. Ph Eur | 1 л, 2,5 л |
109634 2-Пропанол для анализа EMSURE® ACS, ISO, Reag. Ph Eur | 1 л, 2,5 л, 5 л |
- для окрашивания по Паппенгейму | |
101424 Эозин-метиленовый синий раствор Май-Грюнвальда для микроскопии | 100 мл, 500 мл, 1 л, 2,5 л |
Подготовка образца
Отбор образцов должен быть осуществлен квалифицированным персоналом.
Все образцы должны быть четко маркированы. Для отбора и подготовки образцов должны быть использованы подходящие инструменты. При их использовании следуйте инструкциям производителей. Депарафинизация и регидратация срезов осуществляется стандартными методами.
Примечания для окрашивания парафиновых срезов по Гимзе
Всегда используйте чистый ксилол или NEO-CLEAR® (Cat. No. 109843) для промывочных растворов, т. к. любые следы этанола в растворах могут привести к обесцвечиванию в процессе подготовки.
Предварительная обработка костного мозга и биоптата гребня подвздошной кости
Оптимальный результат может быть достигнут при использовании мягкого декальцинирующего раствора OSTEOSOFT® (101728). Чтобы бережно удалить кальцификат, фиксированный биоптат сначала помещают в OSTEOSOFT® на 6 часов, после чего подвергают обработке в гистопроцессоре. Блоки тщательно нарезают и если требуется дополнительно помещаются в OSTEOSOFT® еще на 20 минут.
Подготовка реактивов
Азур-эозин метиленовый синий раствор по Гимзе
Окрашивающий раствор поставляется в виде концентрата и перед использованием должен быть разбавлен так как указано ниже. После разбавления его также необходимо отфильтровать.
Буферный раствор
Для приготовления прибл. 1000 мл раствора:
109468 Таблетки для приготовления буф. раствора с рН 7.2 или 111374 Таблетки для приготовления буф. раствора с рН 6,8 – в зависимости от требуемого цвета реакции | 1 таблетка |
Дистиллированная вода | 1000 мл |
Разбавление окрашивающего раствора по Гимзе для ручного окрашивания
Для приготовления прибл. 200 мл раствора:
Азур-эозин метиленовый синий раствор по Гимзе | 10 мл |
Буферный раствор | 190 мл |
Всё хорошо перемешать, дать отстояться в течение 10 минут и отфильтровать, если это необходимо |
Разбавление окрашивающего раствора по Гимзе для автоматического окрашивания
Для приготовления прибл. 300 мл раствора:
Азур-эозин метиленовый синий раствор по Гимзе | 25 мл |
Буферный раствор | 275 мл |
Всё хорошо перемешать, дать отстояться в течение 10 минут и отфильтровать, если это необходимо |
Уксусная кислота 0,1 % водная
Для приготовления прибл. 1000 мл раствора:
Уксусная кислота 100% | 1 мл |
Дистиллированная вода | 1000 мл |
Окрашивание по Гимзе
Процедура для образцов, высушенных естественным путем
Окрашивание вручную
После каждого этапа окрашивания с предметных стекол нужно давать стечь избытку раствора, чтобы избежать перекрестного окрашивания растворов. Для достижения оптимальных результатов нужно придерживаться указанного времени окрашивания.
Предметные стекла с образцами, высушенными на воздухе | |
Метанол | 3 мин |
Разбавленный окрашивающий раствор Гимзе для ручного окрашивания | 20 мин |
Буферный раствор | 1 мин |
Буферный раствор | 1 мин |
Высушивание на воздухе (например, в течение ночи или при 50°С в сушильном шкафу) |
Окрашивание в окрашивающем автомате
Время | Станции | Погружение | |
Предметные стекла с образцами, высушенными на воздухе | |||
Метанол | 3 мин | 2 | Вкл |
Разбавленный окрашивающий раствор Гимзе для автоматического окрашивания | 20 мин | 3 | Вкл |
Буферный раствор | 1 мин | 4 | Вкл |
Проточная вода | 2 мин | 5 | Вкл |
Сушка | 3 мин | 6 |
Для хранения гематологических образцов в течение нескольких месяцев рекомендуется использовать безводные заливочные среды (например, Neo-Mount®, Entellan®, DPX new, или Entellan® new) и покровные стекла. Если окрашенный образец не заливать, он остается стабильным около 3 дней, а при покрытии иммерсионным маслом – всего несколько часов.
Для анализа окрашенных образцов при увеличении микроскопа >40x рекомендуется использовать иммерсионное масло.
Результат
Буферный раствор рН 6.8 | Буферный раствор 7.2 | |
Ядро клетки | Красный до фиолетового | фиолетовый |
Лимфоциты | Плазма голубая | Плазма голубая |
Моноциты: | Плазма серо-голубая | Плазма серо-голубая |
- нейтрофильные гранулоциты | Плазма светло фиолетовая | Плазма светло фиолетовая |
- эозинофильные гранулоциты | Гранулы красноватые до красно-коричневого | Гранулы красноватые до красно-коричневого |
- базофильные гранулоциты | Гранулы темно фиолетовые | Гранулы темно фиолетовые |
Тромбоциты | Фиолетовые | Фиолетовые |
Эритроциты | Красноватые | Красновато-коричневатые |
Паразиты крови | Ядро клетки светло красные | Ядро клетки светло красные |
Окрашивание по Паппенгейму
(С растворами Май-Грюнвальда и Гимзе)
Процедура для образцов, высушенных естественным путем
Окрашивание в окрашивающих ячейках (кюветах)
Чтобы избежать получения неадекватных результатов окрашивания, предметные стекла нужно быстро погружать и перемещать из раствора в раствор.
После каждого этапа окрашивания с предметных стекол нужно давать стечь избытку раствора, чтобы избежать перекрестного окрашивания растворов. Для достижения оптимальных результатов нужно придерживаться указанного времени окрашивания.
Предметные стекла с образцами, высушенными на воздухе | |
Окрашивающий раствор по Май-Грюнвальду | 3 мин |
Разбавленный окрашивающий раствор Гимзе для ручного окрашивания | 20 мин |
Буферный раствор | 1 мин |
Буферный раствор | 1 мин |
Высушивание на воздухе (например, в течение ночи или при 50°С в сушильном шкафу) |
Окрашивание на окрашивающих стойках (штативах)
Для достижения оптимальных результатов нужно придерживаться указанного времени окрашивания.
Предметные стекла с образцами, высушенными на воздухе | ||
Окрашивающий раствор по Май-Грюнвальду | Покрыть полностью | 3 мин |
Буферный раствор | 1 мл | Смешать |
Разбавленный окрашивающий раствор Гимзе для ручного окрашивания | Покрыть полностью | 20 мин |
Буферный раствор | Промыть | |
Высушивание на воздухе (например, в течение ночи или при 50°С в сушильном шкафу) |
Для хранения гематологических образцов в течение нескольких месяцев рекомендуется использовать безводные заливочные среды (например, Neo-Mount®, Entellan®, DPX new, или Entellan® new) и покровные стекла. Если окрашенный образец не заливать, он остается стабильным около 3 дней, а при покрытии иммерсионным маслом – всего несколько часов.
Для анализа окрашенных образцов при увеличении микроскопа >40x рекомендуется использовать иммерсионное масло.
Результаты
Буферный раствор рН 6.8 | Буферный раствор 7.2 | |
Ядро клетки | Пурпурный до фиолетового | фиолетовый |
Лимфоциты | Плазма голубая | Плазма голубая |
Моноциты: | Плазма серо-голубая | Плазма серо-голубая |
- нейтрофильные гранулоциты | Плазма светло фиолетовая | Плазма светло фиолетовая |
- эозинофильные гранулоциты | Гранулы кирпично-красные | Гранулы красно-коричневые |
- базофильные гранулоциты | Гранулы темно фиолетовые до черного | Гранулы темно фиолетовые до черного |
Тромбоциты | Фиолетовые | Фиолетовые |
Эритроциты | Красноватые | Красновато-серые |
Окрашивание по Гимзе
Процедура
Парафиновые срезы
Окрашивание в 60 мл кювете (по Хеллендалю)
После каждого этапа окрашивания с предметных стекол нужно давать стечь избытку раствора, чтобы избежать перекрестного окрашивания растворов. Депарафинизация гистологических образцов осуществляется обычным способом, а регидратация с помощью серии спиртовых растворов. Для достижения оптимальных результатов нужно придерживаться указанного времени и дегидратация окрашивания. Всегда используйте чистый ксилол или NEO-CLEAR® (Cat. No. 109843) для промывочных растворов, т. к. любые следы этанола в растворах могут привести к обесцвечиванию в процессе подготовки.
Предметное стекло с гистологическим образцом | |
Дистиллированная вода | 10 сек |
Окрашивающий раствор Гимзе (неразбавленный, фильтрованный) | 15 мин |
Уксусная кислота 0,1 % | 10 сек |
Дистиллированная вода | 10 сек |
2-Пропанол | 10 сек |
2-Пропанол | 10 сек |
2-Пропанол | 10 сек |
Ксилол или NEO-CLEAR® | 5 мин |
Ксилол или NEO-CLEAR® | 5 мин |
Закрепите с помощью среды Neo-Mount® влажные предметные стекла, обработанные NEO-CLEAR®, или, например, с помощью среды Entellan® влажные предметные стекла, обработанные ксилолом, а также используйте покровные стекла |
После дегидратации и осветления ксилолом или с помощью NEO-CLEAR®, гистологический образец должен быть покрыт безводной заливочной средой и покровным стеклом. Лишь после этого он может храниться в течение длительного срока.
Для анализа окрашенных образцов при увеличении микроскопа >40x рекомендуется использовать иммерсионное масло.
Результат
Ядро клетки, клетки | Голубой до темно-синего |
Коллаген, остеоид | Бледно-голубой |
Эозинофильная гранула | Красный |
Кислотные мукополисахариды, гранулы мастоцитов, хрящевая матрица | Красновато-фиолетовый |
Ацидофильные вещества | Оранжево-красный |
Хранение
Хранить азур-эозин метиленовый синий раствор по Гимзе для микроскопии нужно при температуре от + 15°С до + 20°С.
