ДИАГОНСТИЧЕСКИЙ ПОТЕНЦИАЛ экзосом, СВЯЗАННЫХ С ФОРМЕННЫМИ ЭЛЕМЕНТАМИ КРОВИ
Цель исследования: Поиск в крови маркеров, характерных для онкотрансформированных клеток, является актуальной задачей молекулярной онкологии. Одним из новейших объектов для поиска опухолеспецифических маркеров являются экзосомы биологических жидкостей - мембранные частицы эндоцитозного происхождения размером 30-100 нм. Поскольку в кровотоке онкологических больных циркулируют экзосомы, секретируемые клетками опухолей, и содержащие биополимеры, характерные для этих клеток, циркулирующие экзосомы рассматриваются в качестве удобного источника диагностического материала для неинвазивной диагностики/мониторинга злокачественных новообразований.
Целью работы является исследование особенностей циркуляции экзосом и оценка их диагностического потенциала в крови больных раком молочной железы (РМЖ).
Материалы и методы: Плазму и элюаты с поверхности форменных элементов (ПФЭ) крови клинически здоровых женщин (ЗЖ, n=10) и больных РМЖ (n=10, T1-2N0M0). получали как описано ранее (Tamkovich, 2005, Clinical Chemistry). Препараты экзосом из плазмы и элюатов с ПФЭ получали путем последовательной ультрафильтрации и ультрацентрифугирования и характеризовали при помощи трансмиссионной электронной микроскопии и иммуноокрашивания. Концентрацию белка в экзосомах определяли при помощи NanoOrange Protein Quantitation kit. Концентрации ДНК ( Line-1 и б-sattelite), мРНК (гена GAPDH и 28S рРНК), а также микроРНК (let7a, miR103, miR191, miR195) определяли при помощи количественной ПЦР.
Результаты и выводы: Полученные препараты микрочастиц преимущественно содержат экзосомы с характерным размером 30-100 нм, экспрессирующие CD9, CD24 и CD63. Впервые установлено, что экзосомы циркулируют не только в плазме, но и будучи связанными с поверхностью форменных элементов крови. Доля связанных с поверхностью форменных элементов экзосом составляет не менее 60% от общего числа экзосом. Впервые обнаружено, что в крови больных раком молочной железы наиболее представлены экзосомы диаметром от 50 до 70 нм, в крови здоровых женщин — диаметром от 30 до 50 нм. В составе экзосом циркулирует не более 0,1% циркулирующей ДНК крови. Таким образом, поиск диагностически значимых маркеров целесообразно проводить в составе мРНК, микроРНК и белков экзосом.
