Выделение плазмидной ДНК

Выделение плазмидной ДНК

0,5-1,5 мл ночной культуры E. coli+плазмида перенести в пробирки эппендорф Центрифугируем 3 мин (3-5 тыс. об/мин) Убрать надосадочную жидкость К осадку добавить 100 мкл р-ра 1, хорошо взбить до образования гомогенной массы, чтобы не было хлопьев! (щелочной лизис (разрушение) бактериальной клетки) В пробирку добавить 200 мкл р-ра 2 (охлажденную на льду), перемешать содержимое, аккуратно переворачивая 2-3 раза (без встряхивания!) Поставить на лед на 7 мин В пробирку  добавить 150 мкл р-ра 3 осторожно 4-6 раз перемешать Центрифугируем 10 мин 10 тыс. об/мин Перенести надосадочную жидкость! в чистую пробирку Добавить 270 мкл р-ра  4 для осаждения для осаждение ДНК, перемешать Оставить на 7 мин. Центрифугируем 10 мин 10 тыс. об/мин Удалить надосадочную жидкость, оставить пробирки перевернутыми, чтобы хорошо стекла жидкость на фильтровалную бумагу К осадку добавить р-р 5  и встряхнуть Центрифугировать 3 мин 12 тыс. об/мин Удалить надосадочную жидкость, хорошо подсушить фильтровальной бумагой Оставить на 5 мин до полного испарения остатков жидкости К осадку добавить 50 мкл Н2О (р-р 6)

Раствор 1:  250 мкл 1M трис HCL pH - 8,0

  250 мкл 2M глюкоза

  400 мкл 0,5 М ЕДТА

  Довести Н2О до 10мл

Раствор 2:  7.5 мл Н2О

  400 мкл 5М NaOH

  500 мкл 20% SDS

  Довести Н2О до 10 мл

Раствор 3:  88,5 мл 3М ацетата Na

  11,5 ледяная уксусная к-та

Раствор 4:  100% изопропаноловый спирт

Раствор 5:  70% этанол

Раствор 6:  дистиллированная  Н2О