Подводя итог, можно сказать, что ЗКП действительно могут создавать микроокружение, благоприятное для роста и дифференцировки внепечёночных стволовых клеток, в частности, МСК костного мозга в клетки с фенотипом гепатобластов и гепатоцитов. Среди компонентов микроокружения важными являются как факторы роста, вырабатываемые ЗКП, так и межклеточные контакты между ЗКП и прогениторными клетками. Наиболее оптимальными вариантами для индуцирования МЭТ и гепатоцитарной дифференцировки МСК являются культивирование МСК в питательной среде ЗКП и совместное культивирование МСК и ЗКП.
Выводы
1. Изолированное культивирование МСК и ЗКП крысы в питательной среде с добавлением рекомбинантных факторов роста FGF4 и HGF приводит к повышению в 4 раза количества культивируемых клеток и их мезенхимно-эпителиальной трансдифференцировке с появлением в фенотипе МСК маркёров гепатобластов ЦК18, ЦК19 и б-ФП на 9-е сутки, а в фенотипе ЗКП – появлению экспрессии ЦК18, ЦК19, б-ФП и HSA на 14-е сутки.
2. Культивирование МСК крысы в среде ЗКП, также как и культивирование МСК и ЗКП крысы, разделённых полупроницаемой мембраной, приводит к повышению количества МСК в 3 раза и появлению экспрессии цитокератинов 18 и 19 и б-ФП на 2 недели позже (на 21-й и 28-й день соответственно), чем при культивировании МСК с рекомбинантными факторами роста. Единичные клетки, экспрессирующие HSA, были выявлены только при культивировании МСК в среде ЗКП.
3. Совместное культивирование МСК и ЗКП приводит к выраженной экспрессии маркёров гепатобластов ЦК18, ЦК19 и б-ФП. Сроки появления экспрессии данных антигенов совпадают с таковыми при культивировании МСК в среде ЗКП.
4. При совместном культивировании МСК и ЗКП слияния клеток не выявлено, изменения фенотипа клеток с мезенхимного на эпителиальный осуществлялись путём дифференцировки под действием растворимых факторов, секретируемых ЗКП, и непосредственных межклеточных контактов.
5. Оптимальным режимом для мезенхимно-эпителиальной трансдифференцировки МСК с появлением в фенотипе культивируемых клеток маркёров гепатобластов ЦК18, ЦК19 и б-ФП является культивирование МСК в среде ЗКП и совместное культивирование МСК с ЗКП.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
Рекомендовать внедрение в лабораторную практику метод коллагеназно-проназной перфузии печени с последующим разделением в градиенте плотности гистоденза для выделения чистой популяции ЗКП, а также метод витального мечения клеток мембранными флуоресцентными метками РКН26 и РКН67 (Sigma) для визуализации клеток разных популяций при совместном культивировании.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
По материалам диссертации опубликовано 30 работ (1 монография, 4 статьи и 25 тезисов).
1. Шафигуллина и контактные влияния перисинусоидальных клеток печени на кроветворные и мезенхимальные стволовые клетки in vitro / , , [и др.] // IV Всероссийская научно-практическая конференция «Молодые учёные в медицине». – Казань, 2010. – С. 299-300.
2. Трондин анализ методов выделения перисинусоидальных клеток Ито из печени крыс / , , [и др.] // 84-ая Всероссийская студенческая научная конференция. – Казань, 2010. – С. 259.
3. Трондин и контактные взаимодействия мезенхимальных стволовых клеток и перисинусоидальных клеток печени in vitro / , , [и др.] // 84-ая Всероссийская студенческая научная конференция. – Казань, 2010. – С. 258-259.
4. Шайхутдинова перисинусоидальных клеток печени крысы на выживаемость и морфологию кроветворных и мезенхимальных стволовых клеток при различных методах культивирования / , , [и др.] // 84‑ая Всероссийская студенческая научная конференция. – Казань, 2010. – С. 257-258.
5. Шафигуллина влияния клеток Ито на стволовые клетки / , , [и др.] // IV Всероссийский симпозиум с международным участием «Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии». – Санкт-Петербург, 2010. – С. 200-201.
6. Гумерова и перисинусоидальные клетки печени обладают свойствами стволовых прогениторных клеток в ходе пренатального развития и репаративной регенерации печени / , , [и др.] // IV Всероссийская научно-практическая конференция «Молодые учёные в медицине». – Казань, 2010. – С. 59-60.
7. Shafigullina A. K. Intercellular and paracrine interactions between hepatic perisinusoidal cells and various adult stem cells / A. K. Shafigullina, A. A. Trondin, A. R. Shaihutdinova [et al.] // 2nd International Student Medical Congress. – Kosice, 2010. – P. 39.
8. Trondin A. parative analysis of Ito cells deriving methods / A. A. Trondin, A. K. Shafigullina, A. R. Shaihutdinova [et al.] // 2nd International Student Medical Congress. – Kosice, 2010. – P. 109-110.
9. Gumerova A. Perspectives of different populations of stem/progenitor cells in treatment of alcoholic hepatitis / A. Gumerova, S. Abdulkhakov, A. Shafigullina [et al.] // Abstracts of IV Falk Gastro Conference. – Freiburg, 2010. – P. 66.
10. Шафигуллина растворимых факторов, вырабатываемых перисинусоидальными клетками печени, на мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки костного мозга крысы / , , [и др.] // Материлы III Международного Симпозиума «Актуальные вопросы клеточных технологий». – Москва, 2010. – С. 53.
11. Гумерова использования различных популяций стволовых/прогениторных клеток в клеточной терапии заболеваний печени / , , [и др.] // Материалы III Международного симпозиума «Актуальные вопросы клеточных технологий». – Москва, 2010. – Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. – Т. 5, № 3. – С. 25.
12. Rizvanov A. A. Interaction and self-organization of human mesenchymal stem cells and neuro-blastoma SH-SY5Y cells under co-culture conditions: a novel system for modeling cancer cell micro-environment / A. A. Rizvanov, M. E. Yalvaз, A. K. Shafigullina [et al.] // European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. – 2010. – V. 76, № 2. – Р. 253-259.
13. Шафигуллина факторы, вырабатываемые перисинусоидальными клетками печени, способствуют дифференцировке мезенхимных стволовых клеток костного мозга крысы в гепатоциты in vitro / , , [и др.] // Материалы VI Международной (XV Всероссийской) Пироговской научной медицинской конференции студентов и молодых учёных. – Москва, 2011. – С. 14.
14. Шафигуллина перисинусоидальных клеток печени и мезенхимальных стволовых клеток крысы при совместном культивировании на boyden chambers/ , , [и др.] // XVI Всероссийская научно-практическая конференция «Молодые учёные в медицине». – Казань, 2011. – С. 136.
15. Трондин FGF4 и HGF на гепатоцитарную трансдифференцировку клеток Ито in vitro / , , [и др.] // Международная научная конференция студентов и молодых учёных, посвящённая 135-летию . – Одесса, 2011. – С. 30.
16. Шафигуллина анализ возможностей дифференцировки в гепатоциты перисинусоидальных клеток печени и мезенхимных стволовых клеток костного мозга крысы под влиянием FGF4 и HGF in vitro / , , [и др.] // Международная научная конференция студентов и молодых учёных, посвящённая 135-летию . – Одесса, 2011. – С. 31.
17. Shafigullina A. Transplanted hepatic stellate cells do not liver fibrosis in intact rodent liver / A. Shafigullina, A. Trondin, I. Gazizov [et al.] // The 4th International IMBG conference for young scientists “Molecular Biology: Advances and Perspectives”. – Kyiv, 2011. – P. 178.
18. Shafigullina A. Hepatic stellate cells transplantation – cause liver fibrosis or liver regeneration? / A. Shafigullina, A. Trondin, I. Gazizov [et al.] // 22nd European Student`s Conference “Promising medical Scientists willing to look beyond”. – Berlin, 2011. – P. 29-30.
19. Шафигуллина звёздчатые клетки печени восстанавливают популяцию гепатоцитов без риска развития фиброза печени / , , [и др.] // II Международная научно-практическая конференция «Достижения, инновационные направления, перспективы развития и проблемы современной медицинской науки, генетики и биотехнологий». – Екатеринбург, 2011. – С. 241.
20. Гумерова клетки печени стимулируют дифференцировку мезенхимальных стволовых клеток костного мозга крысы в гепатоциты in vitro / , , [и др.] // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. – 2011. – Т. 6, № 4. – С. 72-81.
21. Шафигуллина дифференцировки свежевыделенных и культивированных in vitro звёздчатых клеток печени после трансплантации интактным крысам и крысам после частичной гепатэктомии / , , [и др.] // XVII Всероссийская научно-практическая конференция «Молодые учёные в медицине». – Казань, 2012. – С. 115.
22. Шафигуллина клетки печени дифференцируются в гепатоциты in vitro и in vivo / , , [и др.] // Научно-практическая конференция с международным участием, посвящённая 155-летию со дня рождения . – Одесса, 2012. – С. 42.
23. Шафигуллина перисинусоидальных клеток печени – фиброз или регенерация? / , , [и др.] // XI Конгресс Международной Ассоциации морфологов. – Самара, 2012. – С. 176.
24. Shafigullina A. Hepatic stellate cells differentiate into hepatocyte-like cells in vitro and in vivo / A. Shafigullina, A. Gumerova, A. Trondin [et al.] // 47th Annual meeting of the European Association for the Study of the Liver. – Barcelona, 2012. – V. 56. – P. S172.
25. Gumerova A. Hepatic stellate cells as a source for hepatocyte differentiation but no hepatic fibrosis development / A. Gumerova, A. Shafigullina, A. Trondin [et al.] // 47th Annual meeting of the European Association for the Study of the Liver. – Barcelona, 2012. – V. 56. – P. S166.
26. Shafigullina A. Dual nature of hepatic stellate cells in the liver: stem cells/progenitor cells microenvironment component / A. Shafigullina, A. Gumerova, A. Trondin [et al.] // 20th United European Gastroenterology Week. – Amsterdam, 2012. – P. A106.
27. Gumerova A. Cell sources of liver development and regeneration. In search of hepatic stem cells / А. Gumerova, А. Kiassov, S. Abdulkhakov, I. Gazizov, A. Shafigullina, D. Andreeva, A. Trondin, M. Kaligin, M. Titova, T. Yilmaz. – LAP Lambert Academic Publishing. – 2012. – 128.
28. Шафигуллина звёздчатые клетки печени участвуют в регенерации органа после частичной гепатэктомии без риска развития фиброза печени / , , [и др.] // Клеточная Трансплантология и Тканевая Инженерия. – 2012. – Т.7, №3. – C. 169-172.
29. Шафигуллина свежевыделенных и активированных in vivo звёздчатых клеток печени в регенерации печени крыс после частичной гепатэктомии и повреждения четырёххлористым углеродом / , , // 87-я Всероссийская научно-практическая конференция студентов и молодых учёных, посвящённая 155-летию со дня рождения . – Казань, 2013. – С. 211.
30. Шафигуллина различных методов выделения, мечения и трансплантации звёздчатых клеток печени крысы / , , [и др.] // Клеточная Трансплантология и Тканевая Инженерия. Сборник трудов Института Фундаментальной медицины и биологии Казанского (Приволжского) федерального университета. – 2013. – Т.8, №3. – C. 147-151.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
б-ГМА – альфа-гладкомышечный актин
б-ФП – альфа-фетопротеин
ЦK – цитокератин
ПЦР – полимеразная цепная реакция
EGF – Epidermal Growth Factor, эпидермальный фактор роста
ESA – Epithelial Specific Antigen, эпителиальный специфичный антиген
FGF4 – Fibroblast Growth Factor 4, фактор роста фибробластов 4
HGF – Hepatocyte Growth Factor, фактор роста гепатоцитов
HSA – Hepatocyte Specific Antigen, специфический антиген гепатоцитов
IL-10 – Interleukin-10, интерлейкин -10
PCNA – Proliferating Cell Nuclear Antigen, ядерный антиген пролиферирующих клеток
SCF – Stem Cell Factor, фактор стволовых клеток
TNF – Tumor Necrosis Factor, фактор некроза опухоли
VCAM – Vascular Cell Adhesion Molecule, сосудистая молекула клеточной адгезии
Формат 60х84 1/16. Бумага офсетная. Печать офсетная.
Усл. печ. л. 2,5.
Гарнитура Times New Roman. Тираж 110 экз. Заказ № 67.
Подписано в печать 10.02.2012 г.
Отпечатано с готового оригинал-макета
в типографии «АртПечатьСервис» ИП Мартынов
420061, 1.
Тел. 295-10-19
1 Выделение ЗКП из печени крыс выполнено совместно с врачом-ординатором кафедры неврологии и нейрохирургии ФПК и ППС
2 Молекулярно-биологическая часть диссертации была выполнена при консультации зав. кафедрой генетики КФУ, доцента, д. б.н.
3 Постановка ПЦР с обратной транскрипцией и электрофорез ДНК в 1,5% агарозном геле были выполнены совместно с научным сотрудником Отдела генных и клеточных технологий НОЦ «Фармацевтики» К(П)ФУ
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4 |
