ТОЛЬКО ДЛЯ IN VITRO ДИАГНОСТИКИ
ИНСТРУКЦИЯ
по применению набора сорбентов для оценки гемостаза в гепаринизированной плазме крови
Гепасорб
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор Гепасорб предназначен для проведения сорбции гепарина из плазмы крови больных, получающих этот антикоагулянт, с последующим определением в обработанной плазме крови активированного парциального тромбопластинового времени (АПТВ/АЧТВ), протромбинового (ПВ) и тромбинового (ТВ) времени свертывания. Применение сорбентов гепарина позволяет определять фоновые (без влияния гепарина) показатели коагулограммы, а также дифференцировать при ДВС-синдроме причины кровотечений (при выявленной гипокоагуляции в тестах) - связанной и не связанной с гепаринотерапией.
ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА
Принцип метода. Принцип метода основан на способности сорбентов связывать в плазме крови гепарин путем образования нерастворимого комплекса “сорбент-гепарин”, который удаляется последующим центрифугированием.
Сорбент Гепасорб-1 используется для удаления гепарина из плазмы крови только при определении ТВ. Сорбент Гепасорб-2 применяется для удаления гепарина из плазмы крови только при оценке АПТВ и ПВ.
Состав набора.
1. Сорбент Гепасорб-1, 1,0 г - 1 фл.
2. Сорбент Гепасорб-2, 2,0 г - 1 фл.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА
Пригодность сорбентов, входящих в состав набора, оценивается по их способности связывать гепарин в концентрации 5,0 ед/мл в пулированной свежей или лиофилизированной плазме крови с аттестованным значением в нормальной области по АПТВ, ПВ и ТВ.
Исследование крови на фоне лечения непрямыми антикоагулянтами, дезагрегантами и фибринолитиками не влияет на приведенную выше способность сорбента связывать гепарин.
В плазме крови, содержащей гепарин (5,0 ед/мл), отмечается отсутствие свертывания по АПТВ в течение 300 с, по ПВ - в течение 40 с и ТВ - в течение 120 с. В сорбированной свежей цитратной плазме крови определяются неизмененные, по сравнению с аттестованными значениями, показатели свертывания по АПТВ, ПВ и ТВ. В сорбированной лиофилизированной плазме крови определяются показатели по АПТВ в диапазоне 40-55 с, по ПВ - 14-20 с, по ТВ - 16-20 с.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Все реагенты, входящие в набор, используются только для применения in vitro.
Все компоненты набора в используемых концентрациях не токсичны.
При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, так как образцы плазмы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита В или любой другой возбудитель вирусной инфекции.
ОБОРУДОВАНИЕ, МАТЕРИАЛЫ, РЕАГЕНТЫ
- Центрифуга лабораторная;
- секундомер; весы торсионные;
- пипетки вместимостью 1,0 мл; пробирки стеклянные;
- перчатки резиновые хирургические.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ АНАЛИЗИРУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ
Кровь для исследования забирают из локтевой вены в пластиковую или силиконированную пробирку, содержащую 3,8% раствор натрия лимоннокислого 3-х замещенного (цитрата натрия), соотношение объемов крови и цитрата натрия - 9:1. Кровь центрифугируют при 3000-4000 об/мин (1200 g) в течение 15 мин. В результате получают бедную тромбоцитами плазму, которую переносят в другую пробирку, где хранят до проведения исследования.
Центрифугирование должно проводиться непосредственно после взятия крови, а отбор плазмы на исследование - сразу же после центрифугирования. Не допускается анализ плазмы, имеющей сгустки, гемолиз, избыток цитрата натрия и полученной более 2 ч назад, а также замороженной плазмы крови.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ И ПРОВЕДЕНИЕ СОРБЦИИ ГЕПАРИНА
В пробирку внести 10 мг сорбента Гепасорб-1 и 1,0 мл исследуемой плазмы крови. Постоянно встряхивая, перемешать плазму с сорбентом при комнатной температуре (+18...+25о С) в течение 8 мин, исключая образование пены и осадка на дне пробирки. Затем смесь центрифугировать при 1000-1500 об/мин (120 g) в течение 2 мин. Надосадочную жидкость осторожно перенести с помощью пипетки в другую пробирку. Плазму крови после сорбции можно использовать для оценки ТВ в течение 1 ч в условиях хранения при комнатной температуре.
Сорбцию гепарина из плазмы крови сорбентом Гепасорб-2 производить по приведенной выше методике. Расход сорбента - 20 мг на 1,0 мл плазмы крови. Полученную плазму использовать при аналогичных условиях хранения для оценки АПТВ и ПВ.
УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЯ
Набор рассчитан на проведение сорбции гепарина каждым из сорбентов в 100 мл плазмы. Расход реагентов на 1 мл плазмы: 10 мг реактива Гепасорб-1 или 20 мг реактива Гепасорб-2.
Хранение набора должно проводиться при температуре +2-8о С в течение всего срока годности набора (24 мес). Допускается хранение набора при температуре до +25о С в течение 10 сут. Замораживание не допускается.
Сорбенты Гепасорб-1 и Гепасорб-2 можно хранить после начала их использования в течение 12 мес при температуре +2-8о С при условии достаточной герметизации флаконов.
Дополнительные возможности при использовании сорбентов гепарина1
Применение сорбентов позволяет также определить базовые показатели концентрации фибриногена (по Рутберг) и активности антитромбина III (по Abildgaard) в плазме крови больных, получающих гепаринотерапию.
1) При оценке активности антитромбина III применить Гепасорб-1.
2) При определении концентрации фибриногена использовать Гепасорб-2.
Сорбцию гепарина из плазмы провести по методике, приведенной выше.
ЛИТЕРАТУРА: 1. , , Цеймах элиминации из плазмы гепарина для оценки коагулограммы и активности антитромбина III. //Клинич. лаб. диагностика. - 1995. - N 5. - С. 31-34.
2. , Момот диагностики нарушений гемостаза. М.: Ньюдиамед-АО, 1999. - 224 с.
1 , , Цеймах элиминации из плазмы гепарина для оценки коагулограммы и активности антитромбина III // Клин. лаб. диагностика. - 1995. - N 5. - С. 31-34.
