ID E-2700 ВЭБ VCA IgA
Набор реагентов для ИФА для определения IgА к капсидному антигену Вируса Эпштейн-Барр в сыворотке человека.
Только для in vitro диагностики.
Хранение и стабильность:
Все реагенты необходимо хранить при 2 – 8˚С. Не используйте компоненты набора по истечении срока годности, указанного на этикетке. Не смешивайте компоненты из наборов разных серий в одном исследовании.
Состав набора:
ID E-0022 | SORBENT А | Сорбент А | 1 х 4 мл | Готов к использованию; белковый раствор в фосфатном буфере с 0,02% проклин |
ID E-0030 | WASH-CONC 10× | Концентрат промывочного буфера | 1 х 100 мл | Концентрат; разведите содержимое флакона до конечного объёма 1000 мл; Хранение: до 6 мес. при 2-8˚С |
ID E-0055 | SUBSTRATE | Субстрат | 1 х 12 мл | Готов к использованию; содержит ТМБ |
ID E-0060 | DILUENT | Раствор для разведения | 1 х 100 мл | Готов к использованию; содержит белковый раствор с 0,09% азида натрия в качестве консерванта |
ID E-0080 | STOP-SOLN | Стоп-раствор | 1 х 15 мл | Готов к использованию, содержит 0,25 М серной кислоты |
ID E-2731 | EVA | Микропланшет | 1 х 96 лунок | 12 стрипов, по 8 лунок, разборный, с иммобилизованным капсидным антигеном ВЭБ. |
ID E-2740 | CONJUGATE | Конъюгат | 1 х 12 мл | Готов к использованию. Моноклональные антитела к IgА человека меченные пероксидазой, в растворе фосфатного буфера с 0.02% Proclin |
ID E-2751 | CONTROL - | Отрицательный контроль | 1 х 2 мл | Готов к использованию |
ID E-2752 | CONTROL ± | Cut-off контроль | 1 х 2 мл | Готов к использованию |
ID E-2753 | CONTROL + | Положительный контроль | 1 х 2 мл | Готов к использованию |
НЕОБХОДИМОЕ ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА
- ИФА анализатор, измеряющий ОП на длине волны 450 нм.
- Дистиллированная или деионизированная вода
- Откалиброванные прецизионные микропипетки на 10 мкл, 100 мкл и 1 мл
- Полуавтоматические пипетки на 100 мкл
- Вошер
- Абсорбирующий материал для промокания стрипов
- Водяная баня с контролируемой температурой (37˚С) или аналогичное устройство (инкубатор)
Хранение и стабильность образцов:
Для анализа должна использоваться сыворотка. При венепункции должны быть соблюдены обычные меры предосторожности. Образцы могут храниться при температуре 2-8 ° С в течение 2 дней. При более длительном периоде хранения – при - 20° С. Не используйте гемолизированные или липемические образцы. Избегайте повторных циклов замораживания/оттаивания образцов.
ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
Глубокое понимание этого раздела необходимое для успешного использования продукта. Надежные результаты будут получены только при точном следовании инструкции.
- Перед использованием приведите все реагенты и образцы до комнатной температуры (~ 25 ° C) и тщательно аккуратно перемешайте.
- Не смешивайте компоненты из разных наборов и партий в одном исследовании
- Не используйте компоненты с истекшим сроком годности, указанного на этикетке
- Неполное промывание отрицательно сказывается на точности результата анализа
- Для минимизации потенциальных ошибок анализа в связи с изменением времени инкубации субстрата, следует позаботиться, чтобы стоп-раствор в лунки добавлялся в той же последовательности и с той скоростью, что и раствор ТМБ.
- Избегайте бактериального загрязнения реагентов, промывочного буфера и раствора для разведения. Избегайте загрязнения раствора ТМВ. Используйте чистые одноразовые наконечники пипетки для каждого реагента. Избегайте пипетки с металлическими частями.
- Контейнеры и полуавтоматические наконечники для пипеток, используемые для конъюгата и ТМБ могут быть повторно использованы при условии, что они тщательно промыты деионизированной / дистиллированной водой и высушены до и после каждого использования.
- Ферменты, используемые в качестве метки, инактивируются кислородом и очень чувствительны к микробной контаминации, азиду натрия, хлорноватистой кислоте и ароматическим хлоруглеводородам, которые часто встречаются в лабораторном оборудовании и воде.
- Используйте воду высокого качества.
- Избегайте воздействия на реагенты избыточного тепла или солнечного света во время хранения и инкубации.
Подготовка реагентов
Промывочный раствор
Развести 100 мл промывочного концентрата дистиллированной водой до конечного объема 1000 мл.
Хранение: до 6 месяцев при 2-8 ° C.
Микротитровальные стрипы
Извлечь из упаковки стрипы, которые будут использоваться, и поместить неиспользованные в фольгированный пакет с силикагелем, удалить воздух и запечатать.
Процедура анализа
Прогреть все образцы и реагенты до комнатной температуры (20-25 °С). Образцы сыворотки и калибраторы исследуют в дублях.
| Разбавьте образцы сыворотки 1:101 (10 мкл сыворотки в 1 мл раствора для разведения) Добавьте 100 мкл каждого разведенного образца сыворотки и готового к использованию калибратора в соответствующие лунки. Оставьте одну лунку пустой, будет добавляться 100 мкл ТМБ субстрата на этапе инкубации субстрата. Добавьте 30 мкл Сорбента А только в лунку с разведенными образцами. Инкубируйте в течение 45 минут при 37 °С Удалите жидкость и промойте каждую лунку четыре (4) раза в течение 30 секунд промывочным раствором при помощи автоматического микропланшетного вошера или вручную с помощью дозатора. Переверните планшет и прижмите к абсорбирующей бумаге до сухого пятна. Рекомендуется использование автоматического микропланшетного вошера. Если микропланшетный вошер недоступен, то (а) полностью удалите жидкость из каждой лунки, (б) добавьте 300 мкл промывочного раствора в каждую лунку, и (в) повторить этапы (а) и (б) в четыре раза. Добавьте по 100 мкл конъюгата в каждую лунку. Инкубируйте в течение 45 минут при 37 °С.Удалите жидкость и промойте каждую лунку четыре (4) раза в течение 30 секунд промывочным раствором при помощи автоматического микропланшетного вошера или вручную с помощью дозатора. Переверните планшет и прижмите к абсорбирующей бумаге до сухого пятна. Добавить 100 мкл субстрата в каждую лунку с использованием дозатора Инкубировать 15 минут при комнатной температуре (20-25 ° С). Избегайте воздействия прямых солнечных лучей. Добавить 100 мкл Стоп-раствора в каждую лунку с использованием дозатора. Определить оптическую плотность раствора в лунках в течение 30 минут при 450 нм.Если доступно, то определите также ОП при 600 или 620 нм. |
Расчет результатов:
Определите среднюю ОП для каждого контроля и неизвестных.
Качественный результат.
Если ОП образца выше, чем Cut-Off, то анализ на наличии специфического IgA в образце положительный.
Рассчитайте соотношение (коэффициент соотношения) между средним значением ОП образца и Cut-Off.
Образец считают:
Положительным: если коэффициент > 1,1.
Сомнительным: если + / - 10% Cut-Off.
Отрицательным: если коэффициент < 0,9.
Если результат сомнительный, то повторите анализ. Если он остается сомнительным, то необходимо исследовать новые образцы сыворотки.
Ограничения:
- Сыворотки, полученные в стадии инфекционной болезни, когда присутствуют только IgG антитела, могут быть отрицательными.
- Оценивайте результат анализа в сочетании с другими доступными клиническими и диагностическими данными
- Повторное замораживание и оттаивание реагентов и образцов.
- Не используйте макроскопически гемолизированные, желтушные или липемические образцы.
- Не используйте инактивированную теплом сыворотку.
- Ограничение у пациентов с иммунодефицитами и новорожденных
Контроль качества:
Вычтите значение пустой лунки из всех остальных определенных значений. Значение ОП контроля Cut-Off должно быть не менее 0,2. Значение ОП Положительного контроля должно быть не менее чем в 1,5 раза больше, чем Cut-Off контроля.
