Рубрика – фармакология.
Некоторые фармакологические свойства иммунотропного препарата из кожи
, ,
Лаборатория экспериментальной гемосорбции и окислительных методов детоксикации, зав. лабораторией – к. м.н. ; Испытательный центр, директора: академик РАМН, д. м.н., профессор и к. м.н. , лаборатория молекулярной иммунологии ФГУ «Научно-исследовательский институт физико-химической медицины Росздрава», Москва. Директор - академик РАМН, д. м.н., профессор
Изучены фармакологические свойства иммунотропного препарата из кожи свиньи: кожно-резорбтивное действие, острая и хроническая токсичность. Обнаружено, что препарат не нарушал кожных покровов при оценке кожно-резорбтивного действия, при изучении острой и хронической токсичности не было обнаружено изменений в состоянии животных и гистологическом строении внутренних органов и кожного покрова животных, при изучении хронической токсичности также не было обнаружено достоверных отличий биохимических показателей крови от показателей контрольной группы.
Ключевые слова: иммунотропный препарат, кожа, острая токсичность, хроническая токсичность, кожно-резорбтивное действие.
Адрес для корреспонденции:
119828 Москва, ул. Малая Пироговская, д. 1а
НИИ физико-химической медицины
Тел.: (495) 246-44-38;
E-mail: Olga. *****@***org. ru
Разработка и создание новых иммунотропных препаратов является важной проблемой современной иммунофармакологии. Иммунотропные препараты в настоящее время применяются при многих заболеваниях, в том числе и при заболеваниях кожи. Одним из наиболее распространенных кожных заболеваний является псориаз. В настоящее время до конца неясны этиология и патогенез заболевания, однако исследования последних лет говорят о том, что иммунологические изменения при псориазе предшествуют гиперпролиферации и незавершенности дифференцировки кератиноцитов [5]. Доказанным фактом при псориазе является сдвиг регуляции Т-лимфоцитов в сторону Т-хелперов типа I и цитотоксических Т-лимфоцитов типа 1, что выражается в повышении выработки цитокинов, секретируемых Th1 и Тс1 лимфоцитами: интерферона-гамма, интерлейкина-2, фактора некроза опухолей и др., и снижении выработки цитокинов, секретируемых Th2 и Тс2 лимфоцитами: интерлейкина-10, интерлейкина-4, интерлейкина-5 и др. [4]. Разработка новых иммунотропных препаратов, восстанавливающих этот сдвиг является актуальным.
Ранее , и др. был разработан ацетоновый способ получения иммунотропных препаратов из кожи свиньи [1]. Используя этот метод были выделены три иммунотропных препарата, один из которых ингибировал пролиферацию и стимулировал дифференцировку кератиноцитов человека в первичной культуре [3, 2]. Поскольку при псориазе одним из основных проявлений является гиперпролиферация и незавершенность дифференцировки кератиноцитов, мы предположили, что этот препарат может проявить лечебный эффект. Необходимо было провести доклинические испытания препарата. Этому препарату было дано предварительное название - К-активин. Цель настоящего исследования: изучить кожно-резорбтивное действие, острую и хроническую токсичность препарата К-активин.
Методика исследования
Изучение фармакологических свойств К-активина проводилось на беспородных белых мышах, беспородных белых крысах, морских свинках и кроликах породы Шиншилла, полученных из питомника «Крюково». Было изучено кожно-резорбтивное действие, острая и хроническая токсичность.Было решено применять препарат неинвазивным методом – наружно в виде мази. В качестве основы мази использовали крем Унны, состоящий из ланолина, оливкового или подсолнечного масла и воды в соотношении 1:1:1. К-активин растворяли в дистиллированной воде до концентрации 900 мкг/мл, после чего смешивали с подсолнечным или оливковым маслом и ланолином. Концентрация К-активина в мази составляла 0,03%.
Изучение кожно-резорбтивного действия проводили на 5 белых беспородных мышах и 5 белых беспородных крысах посредством погружения их хвостов в испытуемую 0,03% мазь К-активина на 4 часа. Оценку осуществляли визуально на основе данных местно-раздражающего действия (наличия на хвостах признаков нарушения целостности кожного покрова).
Определение острой токсичности осуществляли на 3-х видах животных: белых беспородных мышах, белых беспородных крысах и морских свинках. В работе использовалось 20 мышей весом 15-22 г (по 5 мышей в каждой группе), 12 морских свинок весом 301-443 г и 12 белых беспородных крыс весом 217-328 г по три в каждой группе. Водный раствор К-активина вводили внутрибрюшинно (терапевтическая и 100-кратная терапевтическая дозы) или наносили на кожную поверхность животных (терапевтическая доза). В качестве контроля внутрибрюшинно вводили физиологический раствор.
За состоянием животных наблюдали 72 часа. Первые сутки наблюдение вели непрерывно. В процессе наблюдения регистрировали общее состояние животных, особенности их поведения, интенсивность и характер двигательной активности. Следили за состоянием кожного и шерстного покрова, окраской слизистых оболочек и положением хвоста. Раздражающее действие оценивали визуально в баллах по развитию эритемы и отека. Отмечали объем потребляемого корма и воды и количество фекальных масс. Животных взвешивали до и после эксперимента. Влияние препарата оценивали на основе макро - и микроскопических исследований. Через 72 часа животных забивали декапитацией, забирали ткани и органы для гистологического исследования: сердце, легкое, печень, почку, селезенку, тонкий и толстый кишечник и кожу. Срезы тканей и органов окрашивали гематоксилином (по Рего) и эозином и по методу Ван Гизона.
Изучение хронической токсичности 0,03% мази К-активин проводили для выявления степени повреждающего действия препарата при его длительном применении. Исследование проводили на 15 кроликах породы Шиншилла в течение 60 дней. Животные были разделены на 3 группы. Десяти кроликам наносили ежедневно мазь слоем 1-2 мм на предварительно приготовленный оголенный участок кожи размером 36 см2. Пять кроликов использовались в качестве контроля. Первой группе опытных животных 0,03% мазь К-активин наносили на чистый оголенный участок кожи. Второй группе мазь наносили на оголенный поврежденный (ссадина – 4 см2) участок кожи. Третья группа – контрольная, ей мазь не наносили. Двум кроликам контрольной группы только выщипывали участок кожи размером 36 см2, трем кроликам контрольной группы на месте выщипанного участка наносили ссадину, такую же, как и у опытных кроликов. На протяжении всего опыта животные находились под ежедневным наблюдением. Отмечалось их поведение, потребление корма, состояние кожного и шерстного покрова, слизистых оболочек. Раздражающее действие препарата оценивали визуально в баллах по развитию эритемы и отека. Каждые 10 дней изучали биохимические показатели крови. Кровь у контрольных и опытных кроликов забиралась из ушной вены в центрифужную пробирку. Отобранные пробы выдерживались в течение 30 мин. при комнатной температуре для формирования тромба, после чего центрифугировались при 1500 об/мин в течение 10 мин., затем отбиралась сыворотка, в которой определяли следующие биохимические показатели: общий белок, альбумин, триглицериды (ТГ), липопротеиды высокой плотности (ЛВП), холестерин (ХС), калий, кальций, железо, глюкозу, общий билирубин, мочевину, креатинин, щелочную фосфатазу, аспарагиновую аминотрансферазу (АСТ), аланиновую аминотрансферазу (АЛТ), амилазу (Амил), лактатдегидрогеназу (ЛДГ).
АСТ, АЛТ и амилаза определялись на биохимическом анализаторе Reflotron, производства фирмы «Boehringer Mannheim», ФРГ. Все остальные показатели определялись на биохимическом анализаторе Humalyzer 2000, производства фирмы «Human», ФРГ. Биохимические показатели определялись один раз в десять дней на протяжении двух месяцев. Спустя 60 дней все кролики были забиты, после чего было проведено гистологическое изучение сердца, легкого, печени, почки, селезенки, тонкого и толстого кишечника и кожи. Срезы тканей и органов окрашивали гематоксилином (по Рего) и эозином и по методу Ван Гизона.
Результаты исследования
Кожно-резорбтивное действие препарата К-активин
При изучении кожно-резорбтивного действия 0,03% мази К-активин было обнаружено, что целостность кожного покрова на хвостах животных не нарушена.
Острая токсичность
При наблюдении за животными в течение 72 часов не было обнаружено заметных изменений в состоянии животных. Ни одно животное не погибло. Изменения массы тела не было зарегистрировано. Кожный и шерстный покров был в прежнем состоянии. Как при внутрибрюшинном введении К-активина, так и при нанесении водного раствора на поверхность кожи поведение животных и потребление ими пищи практически не изменялось. При гистологическом исследовании органов и тканей не было обнаружено достоверных отличий от контрольных групп у всех видов животных (мыши, крысы, морские свинки) как при внутрибрюшинном введении, так и при накожной аппликации препарата при использовании как терапевтической, так и 100-кратной терапевтической дозы препарата. Проведенное гистологическое исследование К-активина показало, что у исследованных видов животных воздействие К-активина не вызывало нарушений в гистологическом строении внутренних органов.
Хроническая токсичность
На всем протяжении ежедневных наблюдений испытуемые кролики были активны и с хорошим аппетитом. При взвешивании животных было зафиксировано, что они постепенно прибавляли в весе. В опытной группе №2 (мазь + царапина) у кроликов на месте царапины образовывалась корочка, при этом воспалительного отека и болезненности вокруг корочки не наблюдалось. К 4-6 суткам корочка отлетала, к 10-м суткам исчезали легкая пигментация, легкое шелушение и гиперемия. У кроликов опытных групп при накожной аппликации мази К-активин не было обнаружено достоверных отличий гистологической картины внутренних органов и тканей от контрольной группы. Гистологическая картина кожи кролика с экспериментальным разрезом кожи и последующим нанесением препарата показывала успешную репарацию эпидермиса и соединительнотканных компонентов кожи и практически не отличалась от состояния кожи в области пореза у контрольных животных. Проведенное гистологическое исследование показало, что у кроликов воздействие мази К-активин как при нанесении его на оголенный участок кожи, так и при нанесении на травмированный участок кожи (ссадина) не вызывало нарушений в гистологическом строении внутренних органов и кожного покрова. При изучении биохимических показателей крови было обнаружено, что все исследуемые показатели в обеих опытных группах достоверно не отличались от показателей контрольной группы. Для уровней ТГ, ЛВП и ХС наблюдались довольно существенные колебания по декадам, однако внутри каждой декады достоверных различий между опытными и контрольной группами не отмечалось.
Таким образом, К-активин не нарушал кожных покровов при оценке кожно-резорбтивного действия, при изучении острой и хронической токсичности не было обнаружено изменений в состоянии животных и гистологическом строении внутренних органов и кожного покрова животных, при изучении хронической токсичности также не было обнаружено достоверных отличий биохимических показателей крови от показателей контрольной группы..
Литература
, , // Патент № 000. Зарегистрирован 27.06.1995. Бюл. изобрет. - 1995. - № 18. - С. 24. , , // Бюл. экспер. биол. мед. 2000; Т.129; № 2: 194-197. , , и др. //Rus. J. Immunol. 1999. Vol. 4, N 2. P. 151-157. Austin L. M., Ozawa M., Kikuchi T. et al. // J. Invest. Dermatol. 1999. V. 113, N. 5. P. 752-759. Ortonne J.-P. // Br. J. Dermatol. 1999. V. 140, Suppl. 54, N. 4. P. 1-7.Подписи авторов:
Автор, осуществляющий связь с редакцией:
119828 Москва, ул. Малая Пироговская, д. 1а
НИИ физико-химической медицины
Тел.: (495) 246-44-38;
