Мочевина Энзиматический Кинетический Метод

МОЧЕВИНА

Энзиматический Кинетический Метод

______________________________________________

Кат № :

UR 445 UR-446 UR-480 UR-443

6 х 15 мл 10 х 50 мл 10 х 100 мл 10 х 250 мл

1.Буфер 2.Энзим-Реагент Стандарт 1.Буфер 2.Энзим-Реагент Стандарт 1.Буфер 2.Энзим-Реагент Стандарт 1.Буфер 2.Энзим-Реагент Стандарт

1 х 100 мл 6 х 15 мл 1 х 5 мл 10 х 50 мл 10 х 50 мл 1 х 5 мл 10 х 100 мл 10 х 100 мл 1 х 5 мл 10 х 250 мл 10 х 250 мл 1 х 5 мл

УФ-МЕТОД

Мочевина в водной среде превращается с помощью уреказы в аммоний и двуокись углерода. Аммоний, полученный в результате первой реакции соединяется с αa-оксиглютаратом и NADH и с помощью глютамат дегидрогеназы продуцирует глютамат и NAD+

ПРИНЦИП МЕТОДА

Ureсase

Urea + H2O------------------------------------------> 2NH34 + CO2

GLDH

2 αa-oxoglutarate + 2NH44 + 2NADH------->2L-glutarate + 2NAD+ + 2H2O

ПРОБА

Cыворотка, гепаринизированная (или ЭДТА) плазма и моча. Развести мочу 1 + 20 дистиллированной водой (результат умножать на 21).

РЕАГЕНТЫ

Состав	Концентрация раствора
1. Буфер Трис буфер 2. Энзим-Реагент Уреаза GLDH NADH Adenosine-5-diphosphate αa-oxoglutarate Стандарт	150 ммоль/л, рН 7.6 ≥і 15 Е/л >0.5 Е/л 0.28 ммоль/л 2.45 ммоль/л 11.7 ммоль/л 13.3 ммоль/л (80 мг/дл)

ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАСТВОРОВ

Буфер

Готов для использования. Стабилен в течение срока, указанного на этикетке при +2 - +8оС.

2. Энзим-Реагент

UR 445 6 x 15 мл

Растворить содержимое флакона Энзим-Реагента 2 в 15 мл Буфера 1. Стабилен 4 недели при +2 - +8оС или 2 дня при +15 - +25оС.

UR 446 10 x 50 мл,

UR 480 10 x 100 мл,

UR 443 10 x 250 мл,

Растворить содержимое флакона Энзим-Реагента 2 в порции Буфера 1, затем перенести раствор в Буферный флакон, ополоснув флакон 2 несколько раз. Стабилен 4 недели при +2 - +8оС или 2 дня при +15 - +25оС.

Стандарт

Готов для использования. Стабилен в течение срока, указанного на этикетке при +2 - +8оС.

ПРОЦЕДУРА

Длина волны Температура Кювета Измерение

340 нм (Hg 334 нм или 365 нм) 37оС Световой путь 1 см Против Реагент-Бланка

Внести в пробирки:

Реагент Бланк (мл)	Стандарт (мл)	Проба (мл)
Дист. Н2О Стандарт Проба Реагент	0.010 - - 1.000	- 0.010 - 1.000	- - 0.010 1.000

Смешать, спустя 30 сек измерить абсорбцию. Точно через 1 мин провести измерение снова.

РАСЧЕТ

ΔDАпробы

Конц. мочевины                = ------------- х конц. стандарта (мкмоль/л)                ΔDАстандарта

НОРМАЛЬНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ

Сыворотка: Моча:

1.7-8.3 ммоль/л 333-583 ммоль/24 ч

(10-50 мг/дл) (20-35 г/24 ч)

КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА

Для контроля качества и воспроизводимости рекомендуется использовать предлагаемые фирмой Randox сыворотки с нормальным, повышенным и пониженным содержанием мочевой кислоты.

ЛИНЕЙНОСТЬ

Линейность измерений в 1189 мкмоль/л или 20 мг/дл. Пробы с более высокой концентрацией разводят 1 + 1 0.9%-ным NaCL и анализируют снова. В этом случае результаты необходимо умножить на 2.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Набор предназначен только для диагностики in vitro. Не пипетировать ртом. Придерживайтесь обычных при лабораторных работах правил техники безопасности.

Раствор 1 содержит Азид натрия. Избегайте попадания реактива в рот, контакта с кожей и слизистыми. В противном случае промойте пораженные участки большим количеством воды. При попадании в глаза или проглатывании - обратитесь к врачу.

Азид натрия реагирует со свинцом и медью с образованием потенциально взрывчатых веществ. Для уничтожения таких образований используйте большие количества воды. Наружные металлические поверхности должны быть обработаны 10% раствором гидроокиси натрия.