АЛКОГОЛЬ КРОВИ
Кат № :
BA 106 | 3 х 100 мл | 1.Буфер 2.NAD 3.ADH | 3 х 100 мл 3 фл. 3 фл. |
УФ МЕТОД
Метод основан на окислении алкоголя, содержащегося в крови, до ацетальдегида с помощью алкогольдегидрогеназы (ADН). Сопутствующее этому процессу увеличение концентрации NADH измеряют спектрофотометрически.
ПРИНЦИП МЕТОДА
ADН
C2H50H + NAD+------>CH2CHO + NADH + H+
ТЕСТИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ
Кровь, Сыворотка и Моча.
РЕАГЕНТЫ
Состав | Конц. раствора |
1.Буфер Пирофосфат Полукарбозид Глицин 2.NAD+ 3.Алкогольдегидрогеназа | 75 ммоль/л, рН 8.7 75 ммоль/л 21 ммоль/л 24 ммоль/л >8000 Е/л |
Дополнительные Реагенты (в набор не входят)
Перхлорная кислота 0.33 моль/л, Кат.№ GL 587; 500 мл. (Только для анализа крови).
Использовать стандартные растворы:
1. 0.5 мг этанол/мл (г этанол/л)
2. 1.0 " "
3. 2.0 " "
4. 3.0 " "
ПРИГОТОВЛЕНИЕ РЕАГЕНТОВ
1. Буфер
Готов для применения. Стабилен в течение срока, указанного на этикетке при +2- +8оС.
2. NAD+
Растворить содержимое одного флакона в 3 мл бидистиллированной воды. Раствор стабилен 3 недели при +2 - +8оС.
3. ADH
Растворить содержимое флакона в 0.5 мл бидистиллированной воды. Раствор стабилен 1 неделю при +2 - +8оС.
ПРОЦЕДУРА ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Длина волны Температура реакции Кювета Измерение | 340/365/334 нм 25/37оС световой путь 1см против бланк-реагента |
Приготовление образцов КРОВИ для анализа
Внести в центрифужные пробирки: | ||
Стандарты | Образец | |
Перхлорная кислота (0оС) Стандартные растворы (1-4) Кровь | 4,0 мл 0.5 мл - | 4.0 мл - 0.5 мл |
Суспендировать, образующийся осадок стекляной палочкой. Закрыть резиновыми пробками и центрифугировать при 3000 об/мин, 5 мин. Перенести осветленные супернатанты в сухие пробирки, использовать по 0.1 мл каждого.
Супернатант стабилен до 24 ч при +2 - +8оСС
Процедура для анализа крови
Внести в пробирки:
Бланк- реагент | Стандарт | Проба | |
Раствор 1 Раствор 2 Перхлорная к-та Стандарты (1-4) Супернатант | 4.8 мл 0.1 мл 0.1 мл - - | 4.8 мл 0.1 мл - 0.1 мл - | 4.8 мл 0.1 мл - - 0.1 мл |
Хорошо смешать, затем добавить:
Раствор 3 | 0.02 мл | 0.02 мл | 0.02 мл |
Тщательно смешать, закрыть пробирки пробками и инкубировать на водяной бане в течение 70 мин при 25оС или 25 мин при 37оС. Измерять абсорбцию стандартов и проб относительно бланка.
Процедура для анализа сыворотки и мочи
Внести в пробирки:
Бланк- реагент | Стандарт | Проба | |
Раствор 1 Раствор 2 DDH2O Стандарт (1-4) Проба | 4.80 мл 0.10 мл 0.01 мл - - | 4.80 мл 0.10 мл - 0.01 мл - | 4.80 мл 0.10 мл - - 0.01 мл |
Хорошо смешать, затем добавить: | |||
Раствор 3 | 0.02 мл | 0.02 мл | 0.02 мл |
Тщательно перемешать, закрыть пробирки пробками и инкубировать на водяной бане в течение 70 мин при 25оС или 25 мин при 37оС. Измерять абсорбцию стандартов и проб относительно бланка.
ВЫЧИСЛЕНИЯ
Построить калибровочную кривую : значение абсорбции каждого стандарта относительно его конентрации. Концентрация этанола в тестируемой пробе расчитывается по калибровочной кривой исходя из значения его абсорбции
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Набор предназначен только для диагностики in vitro. Не пипетировать ртом. Придерживаться обычных мер предосторожности при работе с реагентами.
Раствор 1 содержит Азид натрия. Избегайте попадания реактива в рот, контакта с кожей и слизистыми. В противном случае промойте пораженные участки большим количеством воды. В случае попадания в глаза или проглатывания - обратитесь к врачу.
Азид натрия реагирует со свинцом и медью с образованием потенциально взрывчатых веществ. Для уничтожения таких образований используйте большие количества воды. Наружные металлические поверхности должны быть обработаны 10% раствором гидроокиси натрия.
ПРИМЕЧАНИЕ
1. Абсорбция реагент-бланка против воды не должна превышать 0.100 (Hg 365 нм). Лабораторный воздух и вода, используемая для приготовления растворов не должны содержать примесей алкоголя и альдегидов.
2. Калибровочную кривую необходимо строить для каждой серии тестов.
3. Стандартная кривая может не быть прямой линией, но должна проходить через начало координат.
4. Пробы крови с концентрация алкоголя менее 0.1 г/л расцениваются как отрицательные
