Основа агара с олеиновой кислотой для микобактерий (по Дюбо)

Dubos Oleic Agar Base Основа агара с олеиновой кислотой для микобактерий (по Дюбо)

M179

Эту среду используют для приготовления плотной среды, предназначенной для выращивания культур Mycobacterium tuberculosis в пробирках или чашках.

Состав**:

Ингредиенты	грамм/литр
Гидролизат казеина L-Аспарагин Калия дигидрофосфат Натрия гидрофосфат Железа аммонийного цитрат Магния сульфат Кальция хлорид Цинка сульфат Меди сульфат Агар-агар Конечное значение рН (при 25єС) 6,6 ± 0,2	0,50 1,00 1,00 2,50 0,05 0,01 0,0005 0,0001 0,0001 15,00

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 4,0 г порошка в 180 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121єС) в течение 15 мин. Асептично добавить 20 мл стерильной добавки (FD020) и 5 000-10 000 ЕД пенициллина к 180 мл  стерильной остуженной среды. Тщательно перемешать и разлить в стерильные пробирки или чашки.

Принцип и оценка результата:

Dubos и Middlebrook (1) описали агаровую среду для первичного выделения туберкулезной палочки и изучения морфологии ее колоний. Данная основа с добавлением альбумина и олеиновой кислоты является богатой средой для выделения туберкулезной палочки (2) и используется также для определения ее чувствительности к химиотерапевтическим препаратам.

Среда обогащена гидролизатом казеина и L-аспарагином. Широкий спектр неорганических солей является источником ионов, необходимых в метаболических процессах Mycobacterium tuberculosis. Добавляемая в среду олеиновая кислота служит источником жирных кислот для размножения микобактерий. Пенициллин подавляет рост многих бактерий. Эту среду готовят без добавления глицерина или глюкозы, чтобы не способствовать росту комменсалов.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий светло-желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Готовая среда имеет светло-янтарную окраску, слегка опалесцирует и дает легкий преципитат, когда в пробирках или чашках формируется гель.

Кислотность среды:

При 25єС водный раствор (2,0% вес/об) имеет рН 6,6 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 4-6 недель при 35-37єС.

Штаммы микроорганизмов (АТСС) Mycobacterium tuberculosis H37 Rv (25618) Mycobacterium kansasii (12478) Mycobacterium gordonae (14470) Mycobacterium avium (25291) Mycobacterium smegmatis (14468)

Рост Обильный Обильный Обильный Обильный Обильный

Характер колоний Плоские шероховатые сухие бесцветные Фотохромогенные плоские гладкие со слегка зернистой поверхностью и неровными краями Чаще гладкие оранжевые или желтые Гладкие тонкие непигментированные Шероховатые или гладкие белые в виде купола

Ссылки:

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25єС. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8єС.