DNase Test Agar Base / DNase Test Agar with Toluidine Blue Основа агара для теста на ДНКазу / Агар для теста на ДНКазу с толуидиновым синим | M482/M1041 |
Агар рекомендуют для определения дезоксирибонуклеазной активности у бактерий и грибов, в первую очередь у клинических штаммов стафилококков.
Состав**: |
Ингредиенты | М482 грамм/литр | М1041 грамм/литр |
Гидролизат казеина Папаиновый перевар соевой муки Триптоза Дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) Натрия хлорид Толуидиновый синий Агар-агар Конечное значение рН (при 25єС) 7,3 ± 0,2 | 15,00 5,00 – 2,00 5,00 – 15,00 | – – 20,00 2,00 5,00 0,10 15,00 |
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление: |
Размешать 42,0 г порошка М482 или 42,1 г порошка М1041 в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть с частым помешиванием для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 0,9-1,1 атм (118-121єС) в течение 15 мин. Остудить до 45єС и разлить в чашки Петри. Перед стерилизацией к агару М482 добавить 0,1 г толуидинового синего (FD051) или (при необходимости) залить чашку после инкубирования 0,1%-ным раствором толуидинового синего (FD051).
Принцип и оценка результата: |
Эту среду рекомендуют для определения дезоксирибонуклеазной активности у бактерий и грибов, в первую очередь для идентификации клинических штаммов стафилококков. При добавлении толуидинового синего среду используют для дифференциации непигментированных вариантов серраций клинического происхождения от клебсиелл и энтеробактеров. Weckman и Catlin (1) наблюдали ДНКазную активность у микрококков и отметили наличие корреляции между положительной реакцией на ДНКазу и коагулазной активностью, что было подтверждено другими исследователями (2). Для активации ДНКазной активности в состав среды были введены ДНК и хлорид кальция. Модификацию с введением толуидинового синего предложил Schreier (3). На модифицированной среде можно быстро идентифицировать Serratia marcescens и дифференцировать серрации от других энтеробактерий.
Гидролизат казеина, папаиновый перевар соевой муки и триптоза служат источником питательных веществ. В результате деполимеризации ДНК под действием ДНКазы после внесения на поверхность инкубированной среды раствора соляной кислоты вокруг колоний образуется прозрачная зона, а остальная часть среды мутнеет (4). Далее, если вносится толуидиновый синий, ввиду метахромазии, свойственной этому красителю, зона активности становится ярко-розовой. Следует отметить, что краситель может подавлять рост некоторых штаммов стафилококков. Для точной идентификации рекомендуется проведение дополнительных тестов.
Контроль качества: |
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий светло-желтый (М482) или голубой (М1041) порошок.
Плотность готовой среды:
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.
Цвет и прозрачность готовой среды:
Готовая среда имеет янтарную (М482) или голубую (М1041) окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.
Кислотность среды:
При 25єС водный раствор (4,2% вес/об) имеет рН 7,3 ± 0,2.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-24 ч при 35-37єС.
Штаммы микроорганизмов (АТСС) Staphylococcus aureus (25923) Staphylococcus epidermidis (12228) Streptococcus pyogenes (19615) Serratia marcescens (8100) | Рост Обильный Обильный Обильный Обильный | ДНКаза + – + + |
Примечание: + = изменение цвета среды вокруг колоний с голубого на лилово-розовый (при использовании толуидинового синего)
Ссылки: |
Условия и сроки хранения: |
Порошок хранить при температуре ниже +25єС. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8єС.
