Среда обогащения для листерий (Среда UVM)

Listeria Enrichment Medium (UVM Medium) Среда обогащения для листерий (Среда UVM)

M890

Эту среду используют для селективного культивирования и выделения Listeria monocytogenes из клинического материала.

Состав**:

Ингредиенты	грамм/литр
Гидролизат казеина Протеозопептон Мясной экстракт Дрожжевой экстракт Натрия хлорид Калия дигидрофосфат Натрия гидрофосфат Эскулин Налидиксовая кислота Конечное значение рН (при 25єС) 7,4 ± 0,2	5,00 5,00 5,00 5,00 20,00 1,35 12,00 1,00 0,02

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 54,37 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121єС) в течение 15 мин. Остудить до 50єС и асептично добавить стерилизованный фильтрованием раствор акрифлавина гидрохлорида (до конечной концентрации 12 мкг/мл или 25 мкг/мл).

Принцип и оценка результата:

Основная пропись среды предложена сотрудниками Университета Вермонта (1), которая затем была изменена (2), а именно уменьшена концентрация налидиксовой кислоты и увеличена концентрация акрифлавина для вторичного селективного обогащения.  Среду используют для двухступенчатого селективного обогащения листерий, что позволяет увеличить высеваемость Listeria monocytogenes из мясных продуктов в течение 3-4 дней. Эту среду рекомендуют в качестве среды первичного обогащения для выделения листерий, поврежденных при термической обработке (3).

Гидролизат казеина, протеозопептон, дрожжевой и мясной экстракты являются источником необходимых питательных веществ для роста листерий. Эскулин придает среде дифференцирующие свойства. Налидиксовая кислота и акрифлавин подавляют рост, соответственно, грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов, что, наряду с повышенной концентрацией фосфата, придает среде селективные свойства по отношению к листериям.

Для обогащения к 25,0 г или 25,0 мл материала добавляют 225 мл среды, содержащей  12 мкг/мл акрифлавина и инкубируют при 30єС в течение 4 часов, после чего высевают 0,2 мл культуры на чашки с Селективным агаром для листерий. Через 24 ч инкубирования 0,1 мл культуры вносят в 10,0 мл той же среды, содержащей 25 мкг/мл акрифлавина гидрохлорида, и через 24 ч снова делают высев на чашки с Селективным агаром для листерий. Бульонные культуры листерий представляют большую опасность, по сравнению с колониями на агаре, поэтому при работе с ними надо соблюдать особую осторожность.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Готовая среда имеет янтарную окраску, слегка опалесцирует с голубоватым оттенком.

Кислотность среды:

При 25єС водный раствор (5,44% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-48 ч при 35єС.

Штаммы микроорганизмов (АТСС) Listeria monocytogenes (19118) Escherichia coli (25922) Staphylococcus aureus (25923)

Рост Обильный или хороший Отсутствует или слабый Отсутствует или слабый

Ссылки:

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25єС. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8єС.