Информация о ходе выполнения проекта Минобрнауки России по Соглашению № 14.616.21.0009 о предоставлении субсидии от 01.01.01 г. по теме «Сочетание синхротронных излучателей с лазерами на свободных электронах для структурно-функционального изучения объектов молекулярной медицины как пример создания принципиально новых междисциплинарных синергий».
За отчетный период 4-го этапа в рамках выполнения соглашения были проведены следующие работы:
наработаны экспериментальные партии, отобранных из суб-библиотеки вариантов рекомбинантных каталитических антител, пригодных для кристаллизации;
проведен структурно-функциональный анализ каталитических антител, отобранных из суб-библиотеки, и их иммунокомплексов с лигандами;
проведены кинетические исследования каталитического антитела А5.
В результате выполнения работ четвертого этапа работ по Соглашению № 14.616.21.0009 о предоставлении субсидии получены нижеследующие основные результаты.
1. Наработаны экспериментальные партии вариантов рекомбинантного каталитического антитела А5 для проведения исследований по микрокристаллизации антител и подготовки к поточной кристаллографии немецким партнером проекту. Наработаны антитела, полученные из суб-библиотеки, а именно FabA17_35R, FabA17_35K, FabA17_35H, FabA17_35Q, FabA17_35A, FabA17_99R, FabA17_98R, FabA17_47D_35R_92D, FabA17_47R_35D_98E, FabA17_47D_35E_50R, FabA17_107D_47R_35E с каппа и лямбда изотипами легкой цепи. Подготовлены акты наработки экспериментальных партий препаратов FabA5_kappa, FabA5_lambda, FabA17_35R, которые обеспечивают получение не менее 20 мг белкового препарата с чистотой не менее 95%, пригодного для микрокристаллизации.
2. При проведении структурно-функционального анализ каталитических антител, полученных из суб-библиотеки и их иммунокомплексов с лигандами, установлены основные элементы структуры активного центра антител FabA17_35R и FabA17_35R-Par. Установлено, что в результате модификации FabA17_35R параоксоном в активном центре антитела происходят значительные конформационные изменения. Проведено сравнение первичных аминокислотных последовательностей и структур активных центров антител FabA17, FabA17_35R и FabA17_35R-Par определены ключевые аминокислотные остатки, участвующие в реакции взаимодействия с фосфорорганическим токсином.
3. Проведены кинетические исследования взаимодействия каталитических антител FabA5_kappa и FabA5_lambda с арил-фосфонатом в режиме стационарной кинетики. Определены константы взаимодействия. Проведены исследования специфичности взаимодействия антител с панелью фосфорорганических соединений. Установлена исключительная специфичность реакции по отношению к арил-фосфонату. Антитела не проявляли активность по отношению к экотиофату, кумариновому производному зомана, обладали низкой эффективностью взаимодействия с параоксоном.
Все задачи четвертого этапа работ выполнены в установленные сроки в соответствии с планом-графиком исполнения обязательств и условиями технического задания Соглашения № 14.616.21.0009 о предоставлении субсидии от 01.01.01 г.
