Занятие 4

Занятие 4

Тема: Характер роста микробов на жидких и плотных питательных средах. Колонии микроорганизмов. Пигментообразование у бактерий. Бактериологический метод (второй этап). Выделение чистой культуры бактерий.

1. Характер роста микробов на питательных средах

Характер роста бактерий в жидких питательных средах:

1. Рост бактерий с равномерным помутнением среды.

2. Придонный рост бактерий (образование осадка на дне).

3. Поверхностный рост бактерий (образование пленки на поверх­ности жидкой питательной среды).

Рост на полужидкой питательной среде характеризуется по­мутнением всей толщи среды или образованием сосульки цилиндрической или конической формы.

Рост микробов на плотной питательной среде характеризуется образованием колоний. Колонии – это видимые невооруженным глазом скопления бактериальных особей на поверхности или в толще плотной питательной среды. Для характеристики колоний используют следующие признаки:

1. По размеру выделяют следующие колонии:

- точечные - диаметр менее 1 мм;

- мелкие - диаметр 1-2 мм;

- средние - диаметр 2-4 мм;

- крупные - диаметр 4-6 мм и более.

2. Форма колонии:

- правильная (круглая);

- неправильная (амебовидная);

- ризоидной (корневидная, напоминающая переплетающиеся корни деревьев).

3. Контуры края колонии (определяют при рассмотрении колонии под лупой или с помощью микроскопа при малом увеличении):

- ровные края в виде четко выра­женной линии;

- неровные края (фестончатый, волнистый, эрозированный, зазубренный, бахромчатый).

4. Рельеф колонии характеризуется приподнятостью ее над поверхностью пи­тательной среды и формой на вертикальном разрезе. Определяется невооруженным глазом или при помощи лупы при рассматривании сверху и сбоку:

- каплеобразные и куполообразные колонии правильной круглой формы;

- плоско-выпуклые колонии;

- конусообразные колонии;

- колонии с приподнятой серединой;

- колонии с вдавленным центром;

- плоские колонии.

5. Поверхность колонии изучают при помощи лупы или под микроскопом при малом увеличении:

- матовая или блестя­щая;

- сухая или влажная;

- гладкая или шероховатая.

Гладкие ко­лонии обозначают буквой S (smooth - гладкий), шероховатые - буквой R (rough - шероховатый).

6. Цвет колонии определяется пигментом, который продуцирует культура микробов. Преобладающее большинство патогенных бактерий пигмента не образует (колонии бесцветны или серовато-белого цвета). Пигментообразующие виды образуют колонии кремовые, желтые, золотисто-оранжевые, красные, сиреневые, черные и др.

7. Структура колоний определяется в проходящем свете при слабом увеличе­нии микроскопа, суженной диафрагме или при опущенном кон­денсоре:

- гиалиновые колонии;

- зернистые колонии;

- нитевидные или волокнистые колонии.

8. Консистенцию колоний исследуют прикосновением или взятием из нее части материала бактериоло­гической петлей:

- пастообразные, вязкие или слизистые;

- волокнистые или кожистые;

- хрупкие сухие.

2. Пигментообразование у бактерий

Образование пигментов происходит в присутствии кислорода, при пониженном освещении и температуре 20-25ОС. Пигменты классифицируют по цвету, химическому составу (каротиноиды, пирролы, азахиноны, феназины и др.), раство­римости, по способности диффундировать в окружающую среду. Пигменты класса каротиноидов имеют белый, желтый, оранжевый, красный, бежевый цвет. Они обнаружены у стафилококков, сарцин, микрококков, микобактерий, коринебактерий, пурпурных бактерий, дрожжей. Пигмент феназинового класса синего цвета - пиоцианин присутствует у синегнойной палочки. Пирролловый пигмент красного цвета выявлен у S. marcescens. К азахинонам принадлежит синий пигмент, выделяемый коринебактериями, псевдомонами, артробактерами и др. Производным индола является пигмент, придающий сине-фиолетовую окраску колониям хромобактера. Бактериохлорофиллы встречаются у зеленых, красных несерных бактерий и др. К классу пиразиновых пигментов относится пулъхерримин, окрашивающий колонии грибов рода кандида в темно-красный цвет. Грибы обычно активно про­дуцируют пигменты широкой цветовой гаммы. Цвет пигмента зависит от состава питательной среды и условий культивирования. Важными элементами для обра­зования пигментов являются азот, магний, железо, некоторые аминокислоты.

Пигменты подразделяют на растворимые в воде или в жирорастворителях (спирте, ацетоне, эфире) и нерастворимые в воде и спирте. Водорастворимые пигменты (феназиновые, пиразиновые) способны диффундировать в окружающую среду и окрашивают не только колонии микроорганизмов, но и питательные среды. Спирторастворимые (каротиноиды) и нерастворимые (птерины, мелани­ны) пигменты тесно связаны с клеткой (хромофорные) и окрашивают только колонии микро­организмов.

3. Выделение чистой культуры бактерий

Чистая культура – это культура микроорганизмов одного вида (потомство одной клетки). Методы выделения чистой культуры:

1. Метод Дригалъского - последовательный перенос культуры шпателем из первой чашки в последующие 3 чашки Петри с питательной средой.

2. Метод параллельных штрихов – посев культуры параллельными штрихами по поверхности агара с помощью бактериологической петли.

3. Метод Коха (метод рассева в глубине среды) – внесение капли культуры в расплавленный агар и последовательный перенос капли смеси из этой пробирки в другую пробирку с расплавленным агаром, затем – в третью пробирку. Содержимое пробирок переносят в стерильные чашки Петри и культивируют при оптимальной температуре. Колонии формируются в толще агара.

Литература для подготовки к занятию:

1. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М., 2002.

2. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. Под ред. . М., 2004.

3. Медицинская микробиология. М., ГЭОТАР-МЕДИА, 2005.