ЗАНЯТИЕ № 24
Дубильные вещества.
ЛР и ЛРС, содержащие дубильные вещества
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:
1. Уметь:
- определять ЛР по внешним признакам на гербарных образцах и отличать от возможных примесей;
- определять подлинность сырья макроскопическим методом и давать заключение о качестве сырья с использованием НД. Уметь проводить качественный и количественный анализы дубильных веществ в ЛРС.
ОБЪЕКТЫ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ: дуб черешчатый, скумпия кожевенная, сумах дубильный, лапчатка прямостоячая, горец змеиный, кровохлебка лекарственная, бадан толстолистный, ольха черная, ольха серая, черника обыкновенная, черемуха обыкновенная, чай китайский, репешок аптечный, сабельник болотный.
ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОПОДГОТОВКИ
1. Определение понятия "дубильные вещества".
2. Классификация. Физико-химические свойства.
3. Распространение в растительном мире.
4. Методы обнаружения в ЛРС.
5. Методы выделения из ЛРС.
6. Методы количественного определения в ЛРС.
Латинские и русские названия ЛРС, производящих растений и семейств всех объектов изучаемой темы. Морфологическая характеристика растений, ареалы, места обитания, районы возделывания.9. Рациональные приемы сбора, первичной переработки, сушки и хранения ЛРС
10. Внешние признаки ЛРС.
11. Химический состав, структурные формулы: танина, галловой кислоты, эллаговой кислоты, катехина, лейкоантоцианидина, пирокатехина, пирогаллола.
ЛИТЕРАТУРА
ГФ РБ. - Молодечно: Типография «Победа», 2008, т.2, с. 306, 338, 348, 366, 389, 391, 392, 410, 414, 445, 446, 447. ГФ РБ. - Молодечно: Типография «Победа», 2009, т.3, с. 709. ГФ СССР, ХI изд., Вып. 1. М., 1987, с. 286.; Вып. 2. М., 1990, ст. 3, 28, 35, 36, 70, 71.3. ГОСТ 4564-79. Лист скумпии.
4. ГОСТ 4564-79. Лист сумаха.
5. , Руководство к практическим занятиям по фармакогнозии. М., 1977, с. 170 – 176.
6. Фармакогнозия. Природные биологически активные вещества – Витебск: ВГМУ, 2002, с. 140 - 151.
7. Фармакогнозия. М., 1991, с. 487 - 508.
8. Правила сбора и сушки лекарственных растений. Сборник инструкций. М., 1985.
Фармакогнозия. Атлас. Под ред. , . М., 1989, с. 437 – 465. Фармакогнозия / Под ред. проф. , Витебск: ВГМУ, 2003, с.303 - 313. ФС 42-1082-76. Корневище и корень кровохлебки. Химический анализ лекарственных растений. Под ред. , М., 1983. Лекарственные растения Беларуси. Справочник. – Витебск: ВГМУ, 2003.СОДЕРЖАНИЕ ЗАНЯТИЯ
А. Проверка готовности к занятию (тестовый контроль).
Б. Выполнение лабораторной работы.
Задание 1. Определить подлинность коры дуба.
1) Провести макроскопический анализ коры. Выделить диагностические признаки.
2) Провести качественные реакции: при смачивании внутренней поверхности коры дуба каплей железоаммонийных квасцов появляется черно-синее окрашивание (гидролизуемые ДВ).
3) Сравнить результаты анализа с ГФ и дать заключение о подлинности и качестве сырья по внешним признакам.
Задание 2. Определить подлинность корневищ лапчатки прямостоячей.
1) Провести макроскопический анализ корневищ. Выделить диагностические признаки.
Сравнить результаты с ГФ и дать заключение о подлинности сырья.Задание 3. Определить подлинность плодов черники.
1) Провести макроскопический анализ плодов. Выделить диагностические признаки.
2) Провести сравнительный макроскопический анализ плодов черники и возможных примесей: плодов черной смородины, черемухи, можжевельника, жостера слабительного.
Сравнить результаты анализа с ГФ и дать заключение о подлинности сырья.Задание 4. Изучить внешний вид ЛР и возможные примеси к ним по гербарным образцам и диагностические признаки ЛРС: корневища змеевика, соплодия ольхи, корневища бадана, корневища и корни кровохлебки, листья скумпии, листья сумаха, плоды черемухи, чай китайский.
Задание 5. Провести качественные реакции обнаружения ДВ на образцах сырья: корневища лапчатки, кора дуба, корневища змеевика, корневища и корни кровохлебки, соплодия ольхи.
Приготовление извлечения
1,0 г измельченного сырья (1-3 мм) поместить в колбу емкостью 250 мл, прилить 50 мл горячей воды и нагреть на кипящей водяной бане 20 мин. Извлечение охладить и процедить через вату.
Реакции осаждения
1) К 2 мл извлечения прибавить по каплям 1% р-р желатина. Появляется муть или осадок, исчезающий при добавлении избытка желатина.
2) К 2 мл извлечения прибавить несколько капель 1% р-ра хинина гидрохлорида - появляется аморфный осадок.
3) К 2 мл извлечения добавить 2 мл 10% уксусной кислоты и 1 мл 10% раствора ацетата свинца среднего. При наличии гидролизуемых ДВ образуется осадок.
Реакция окрашивания
К 2 мл извлечения прибавить 4 капли 1% р-ра железоаммонийных квасцов. В присутствии гидролизуемых дубильных веществ появляется черно-синее окрашивание; в присутствии конденсированных - черно-зеленое.
Задание 6. Провести количественное определение содержания дубильных веществ образцах ЛРС спектрофотометрическим методом с использованием казеина.
Получение извлечения. В круглодонную колбу вместимостью 100 мл помещают 0,2500 г измельчённого ЛРС и заливают 25 мл воды очищенной. Нагревают на водяной бане в течение 30 мин. Охлаждают под проточной водой и процеживают через вату в мерную колбу на 50,0 мл, доводят водой до метки. 5,00 мл фильтрата разбавляют водой очищенной до 50,0 мл.
Полифенолы, не адсорбируемые казеином. К 0,10 г казеина добавляют 10,0 мл разбавленного фильтрата и интенсивно встряхивают в течение 10 мин. Процеживают. К 0,30 мл фильтрата добавляют 0,10 мл реактива Фолина, 2,60 мл воды очищенной и 1,00 мл 290 г/л раствора натрия карбоната. Через 10 мин измеряют оптическую плотность при длине волны 720 нм.
Общее количество полифенолов. К 0,30 мл разбавленного фильтрата добавляют 0,10 мл реактива Фолина, 2,60 мл воды очищенной и 1,00 мл 290 г/л раствора натрия карбоната. Через 10 мин измеряют оптическую плотность при длине волны 720 нм.
Раствор сравнения. 0,10 мл реактива Фолина, 2,90 мл воды очищенной и 1,00 мл 290 г/л раствора натрия карбоната.
Так как кожный порошок, рекомендуемый ГФ РБ, более сильно связывает дубильные вещества из извлечений лекарственного растительного сырья по сравнению с казеином, необходимо ввести коэффициент пересчета, представляющие собой отношение оптической плотности раствора при добавлении кожного порошка к оптической плотности при добавлении казеина (Кж/Кз). Это позволит сравнить полученные результаты с требованиями частных статей на лекарственное растительное сырье ГФ РБ.
Лекарственное растительное сырье | Коэффициент пересчета (Кж/Кз) |
листья брусники | 0,75 |
корневища змеевика | 0,76 |
корневища и корни кровохлебки | 0,53 |
кора дуба | 0,56 |
корневища лапчатки | 0,52 |
Рассчитывают процентное содержание дубильных веществ (%) в пересчёте на
Рассчитывают процентное содержание дубильных веществ (%) в пересчёте на галловую кислоту по формуле:
где
А1 – оптическая плотность извлечения без добавления казеина;
А2 – оптическая плотность извлечения после обработки казеином;
g – масса навески ЛРС, г;
k – коэффициент пересчета.
Оценка качества сырья
На основании проведенного анализа дать заключение о соответствии ЛРС требованиям ГФ РБ.
В. Итоговый контроль
Протокол занятия представить преподавателю на проверку и подпись. Ответить на предложенные вопросы по теме занятия.
