Практическое занятие №2.
2. Тема: «Строение бактериальной клетки».
3. Цель: изучить строение бактериальной клетки, освоить сложный метод окраски бактерий по Грамму.
4. Вопросы для самоподготовки:
1. Строение бактериальной клетки, как результат эволюционной адаптации (конкретные примеры: капсула, споры, жгутики и др.).
2. Обязательные и необязательные компоненты бактериальной клетки: химический состав, строение и функция, методы выявления.
3. Понятие о сложных методах окраски бактерий и их назначение. Механизм окраски по Граму.
5. Основные понятия темы:
- Перечислить все структурные элементы бактериальной клетки, методы обнаружения.
- Химический состав, строение и функция каждого компонента бактериальной клетки: нуклеоид, цитоплазма, цитоплазматическая мембрана, клеточная стенка, рибосомы, мезосомы, капсула, спора, жгутики, внутрибактериальные включения, пили.
- Дать определение бактериям, частично и полностью утратившие клеточную стенку, перечислить причины утраты.
- Перечислить отличительные особенности L-форм, протопластов, сферопластов.
- Дать определение сложным методам окраски бактерий, их назначение.
- Варианты микроорганизмов по отношению к окраске по Граму.
- Определить химические особенности микробных клеток, являющиеся основой для дифференциации бактерий на грамположительные и грамотрицательные.
- Основные этапы механизма окраски грамположительных и грамотрицательных бактерий.
6. Рекомендуемая литература:
Молекулярная биология и медицина. М., 1987. , Медицинская микробиология, иммунология, вирусология. СПб., 1998. Методы общей бактериологии: пер. с англ. /под ред. Ф. Герхардта и др. - М. Мир, 1984. Современная микробиология. Прокариоты (в 2-х томах). Под редакцией Й. Ленгелера, Г. Древса, Г. Шлегеля. М.: Мир, 2005. Б. Нолтинг. Новейшие методы исследования биосистем. М.: Техносфера, 2005.7. Самостоятельная работа студентов к занятию.
ПЛАН САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ
1.Сложные методы окраски метод Грама. Окрасить по методу Грама препарат из смеси грамположительных и грамотрицательных бактерий (Работа 1).
2.Строение бактериальной клетки (Работа 2)
а) Жгутики
- рассмотреть препарат из бактерий со жгутиками, окрашенный по Грею; обнаружить движение бактерий при темнопольной микроскопии в препарате «раздавленная» капля;
б) Капсула. Рассмотреть препарат из бактерий (клебсиелла с капсулой), окрашенный по Бурри-Гинсу;
в) Внутриклеточные включения. Рассмотреть препарат из дифтерийных палочек с зернами волютина, окрашенный метиленовой синькой;
г) Споры бактерий
- рассмотреть препарат из палочек со спорами, окрашенный по Граму;
д) Клеточная стенка. Рассмотреть препарат плазмолиз дрожжей, окраска по Бурри-Гинсу.
САМОСТОЯТЕЛЬНЫЕ ПРАКТИЧЕСКИЕ РАБОТЫ
Работа 1. Освоить метод окраски по Граму.
Готовят препарат из смеси грамположительных кокков и грамотрицательных палочек. Окрашивают по методу Грама.
1. На фиксированный мазок наносят карболово-спиртовой раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1-2 мин её снимают, а краситель сливают.
2. Наносят раствор Люголя на 1 мин.
3. Обесцвечивают препарат этиловым спиртом в течение 30- 60 сек. до прекращения отхождения фиолетовых струек красителя.
4. Промывают препарат водой.
5. Докрашивают мазок водным раствором фуксина в течение 1-2 мин, промывают водой и высушивают.
Рассматривают окрашенный препарат под микроскопом с масляной иммерсией. Необходимо обратить внимание на цвет, в который окрашены кокки и палочки.
Протокол исследования:
Цель:
Исследуемый материал | Ингредиенты окраски по Граму и время их действия | Назначение основных ингредиентов | Результат (рисунок с обозначениями) |
Вывод: ответ на вопрос: каков механизм окраски по Граму?
Работа 2. Изучить компоненты бактериальной клетки.
Рассмотреть демонстрационные препараты в световом микроскопе с масляной иммерсией:
1) Плазмолиз дрожжей, окраска по Бурри-Гинсу;
2) Палочка со спорой, окраска по Граму;
3) Палочка со жгутиками, импрегнация серебром
4) Палочка с капсулой в органе, окраска фуксином
5) Дифтерийная палочка с зернами волютина, окраска метиленовым синим.
ПРОТОКОЛ ИССЛЕДОВАНИЯ:
Цель:
Компонент бактериальной клетки | Исследуемый материал | Метод обнаружения, окраска | Результат (рисунок с обозначениями) |
Клеточная стенка | |||
Капсула | |||
Споры | |||
Жгутики | |||
Внутриклеточные включения |
Вывод: ответы на вопросы:
1. Какое функциональное значение имеют изученные компоненты бактериальной клетки?
2. Какие два рода клинически значимых спорообразующих микроорганизмов Вы знаете? Чем они отличаются друг от друга по морфологическим свойствам?
задания для самостоятельной работы во внеучебное время
Заполнить таблицу «Обязательные и необязательные компоненты
бактерий»
№ пп | Обязательные компоненты | Необязательные компоненты |
1 | ||
2 | ||
3 | ||
4 | ||
5 | ||
6 |
