Charcoal Agar Base / Charcoal Blood Agar Base / Charcoal Agar with Niacin Основа угольного агара для бордетелл / Основа кровяно-угольного агара для бордетелл / Угольный агар с ниацином для бордетелл | M344/M646/ M1053 |
Угольный агар с добавками рекомендуют для культивирования Bordetella pertussis при производстве вакцины и также для сохранения лабораторных культур этих микроорганизмов.
Состав**: |
Ингредиенты | М344 грамм/литр | М646 грамм/литр | М1053 грамм/литр |
Настой говяжьего сердца Пептический перевар животной ткани Панкреатический перевар желатина Мясной экстракт Дрожжевой экстракт Натрия хлорид Крахмал растворимый Уголь Никотиновая кислота Агар-агар Конечное значение рН (при 25єС) | 500,00 10,00 – – 3,50 5,00 10,00 4,00 0,001 18,00 7,3 ± 0,2 | – 10,00 – 10,00 3,50 5,00 10,00 4,00 – 12,00 7,5 ± 0,2 | – – 10,00 10,00 – 5,00 10,00 4,00 0,01 12,00 7,4 ± 0,2 |
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление: |
Размешать 31,25 г порошка М344 в 450 мл или 54,50 г порошка М646 или 51,00 г порошка М1053 в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить при постоянном помешивании для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121єС) в течение 15 мин. Остудить до 45-50єС. Асептично внести 50 мл стерильной дефибринированной крови и селективную добавку для бордетелл (FD004) в среду М344 или в среду М1053. В среду М646 (на каждые 100 мл) добавить 10 мл стерильной дефибринированной лошадиной крови, 0,3 мл стерильного раствора пенициллина (100 ЕД/мл) и 0,3 мл 0,1%-ного раствора 4,4-диамидодифениламина гидрохлорида.
Принцип и оценка результата: |
Угольный агар соответствует прописи, предложенной для метода Mishulow и соавт.(1), и рекомендуется для культивирования Bordetella pertussis при производстве вакцины. Потребность в никотиновой кислоте, как ростовом факторе, показана Proom (2). Для производства коклюшной вакцины Ensminger и соавт.(3) заменили среду Борде-Жангу на угольный агар.
Такие компоненты, как настой говяжьего сердца, мясной и дрожжевой экстракты, желатиновый пептон, дают необходимые питательные вещества. Хлорид натрия создает оптимальное осмотическое давление. Сложность выделения чистых культур коклюшного микроба из носоглоточной слизи состоит в необходимости подавления сопутствующей микрофлоры в течение длительного инкубационного периода на высокопитательной среде. Для подавления нежелательного роста в среду можно добавить пенициллин. Однако, по данным Lacey (4), часть сопутствующей флоры остается из-за устойчивости к пенициллину. Как показали Broome и соавт. (5), метициллин превосходит пенициллин по ингибирующему действию на назофарингеальную микрофлору, а, по данным Sutcliffe и Abbott (6), цефалексин лучше, чем метициллин. Далее Regan и Lowe (7) показали, что селективной средой может быть основа кровяно-угольного агара половинной концентрации с цефалексином. Основа кровяно-угольного агара используется для культивирования Bordetella pertussis при производстве вакцины.
Скошенную среду можно также использовать для сохранения лабораторных культур указанных микроорганизмов (с еженедельными пересевами). Угольный агар или Угольный агар с ниацином можно превратить в шоколадный агар для выделения видов Haemophilus.
Контроль качества: |
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий серый порошок.
Плотность готовой среды:
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,8%-ному (М344) или 1,2%-ному (М646 и М1053) агаровому гелю.
Цвет и прозрачность готовой среды:
Среды имеют черную окраску, опалесцирует при затвердевании и содержат нерастворимые в воде черные частицы угля.
Кислотность среды:
При 25єС водный раствор М344 (6,25% вес/об) имеет рН 7,3 ± 0,2, раствор М646 (5,45% вес/об) имеет рН 7,5 ± 0,2, а раствор М1053 (5,1% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-48 ч при 37єС.
Штамм микроорганизмов (АТСС) Bordetella bronchiseptica (4617) Bordetella parapertussis (15311) Bordetella pertussis (8467) | Рост Обильный Обильный Обильный |
Ссылки: |
Условия и сроки хранения: |
Порошок хранить при температуре ниже +25єС. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8єС.
