Дневник по практике в РХТУ им. на кафедре биотехнологии
РХТУ им. . Занятие 1. Создание питательной среды для одноклеточной солоноводной водоросли рода Dunaliella salina.
Состав питательной среды:
NaCl 116 г/л
KNO3 5 г/л
MgSO4 x 7H2O 20 г/л
KH2PO4 1,25 г/л
FeSO4 x 7H2O 0,025 г/л
EDTA 0,037 г/л (Минеральные добавки)
(pH 7,5 - 5) Щелочная
Минеральные добавки прибавляются после соединения всех компонентов и их стерилизации в автоклаве.
Самый объёмный продукт ТЭЦ - углекислый газ (СО2). Углекислый газ в промышленном культивировании микроводоросли может использоваться в качестве дополнительного источника питания, кол-во необходимого газа составляет 1-2%.
Предположение: СО2 способствует процесс накопления бета-каротина водорослью (в исследовательской работе снять графики - «кривые роста»)
Возможно предложить свой способ культивирования и производства водорослей. Препарат Crenalon:(при производстве) альфа-лучи убивают водоросль рода Dunaliella salina.
Задача: при выделении биомассы водоросли сохранить её полезные свойства.
РХТУ им. Менделеева. Занятие 2. Микроскопическое исследование одноклеточной солоноводной водоросли рода Dunaliella salina.
Покровное стекло накладывается на предметное стекло с образцом водоросли водоросли.
Препарат закрепляется на предметном столике, изображение настраивается с помощью винтов и объективов от 40Х до 100Х.
На увеличении 100Х:
Используется иммерсия (масло), добавляется к препарату для увеличения разрешающей способности.
Особенности исследования: препарат быстро испаряет воду, концентрация солей в препарате повышается. Вследствие этого одноклеточные водоросли покрываются защитной оболочкой (цистой) в течение 30 минут.
Водоросль под микроскопом, видео:https://www. /watch? v=fYbJbmQ52po
На сайте youtube: fYbJbmQ52po
РХТУ им. Д. И. Менделеева. Занятие 3. Применение метода тонкослойной хроматографии для вычисления объёма бета-каротина.
Тонкослойная хроматография:
Из пробирки извлекается 10 мл среды с водорослью (Образец), образец подвергается центрифугированию, добавляется ацетон и «стеклянные бусы».
Тонкослойная хроматография:
Главная задача: оценить, какое цветное пятно, ВЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография) тонкослойная хроматография.
Получим разные пятна, оценим количество бета-каротина по размеру пятна.
Центрифугирование: (Epeppendorf Centrifugue 5810 R - центрифуга) центрифугирование по 7800 оборотов/мин, начальная температура 13 градусов.
После получения биомассы необходимо разрушить клеточную стенки водорослей с помощью дизраптора (вибрирующий прибор для измельчения биомассы).
Получили биомассу солоноводной водоросли, затем необходимо насыпать стеклянные бусы, добавить ацетон. Эти образцы поместить в темноту для того, чтобы бета-каротин не обесцветился на свету.
Хроматография (тонкослойная - на тонком слою адсорбента):
Берётся измельчённая биомасса с добавленным растворителем - ацетоном. Вырезаются алюминиевые пластинки, покрытые силикагелем. С помощью капилляров наносятся образцы измельчённой биомассы с добавленным ацетоном, ставятся штрихи от (в начале пластинки необходимо обозначить штрихи, в конце - конечную линию). Алюминиевые пластинки помещаются в крупные колбы с ацетоном. Хлорофилл начинает подниматься от нижней части пластинки к верхней, на этом этапе должны выделиться пятна каротина (оранжевого или жёлтого цвета).
Тонкослойная хроматография
Заключение: по итогам хроматографии образец 2 имеет содержит наибольшее количество бета-каротина. В повторной хроматографии для повышения её эффективности в качестве растворителя вместо ацетона будет использоваться метанол.
Оптическая плотность:
Образец 1 - водоросль в среде с низкой концентрацией соли ()
Образец 2 - водоросль в среде с высокой концентрацией соли
Измерение оптической плотности:
Образец водоросли смешивается с дистиллированной водой, помещается в кюветы по 3 мм. Кюветы помещаются в фотокалориметр (КФК 2, лабораторный). Образец 2: 0.127
Длина волны: 450, 670.
РХТУ им. . Занятие 4. Создание новой среды для одноклеточной солоноводной водоросли рода Dunaliella salina.
Подготовка нового биоматериала для исследования:
Состав питательной среды:
NaCl 116 г/л
KNO3 5 г/л
MgSO4 x 7H2O 20 г/л
KH2PO4 1,25 г/л
FeSO4 x 7H2O 0,025 г/л
EDTA 0,037 г/л (Минеральные добавки)
(pH 7,5 - 5) Щелочная
Минеральные добавки прибавляются после соединения всех компонентов и их стерилизации в автоклаве.
Подготовка биоматериала для исследования:
Переместить водоросли из образцов 1 и 2 в новую среду на 5 колб, получим образцы 3 и 4. (Среда создаётся на 0,5 л) После размножения водорослей образцов 3 и 4 разделить все колбы на группы.
Видео по рассаживанию водорослей можно найти по ссылке:
https://www. /results? search_query=MoYpBi0PEQY
На сайте youtube: MoYpBi0PEQY
