УДК.619:616.982.211:636.2
БИОСФЕРА КОРИНЕБАКТЕРИЙ
ФБНУ «Прикаспийский ЗНИВИ» ФАНО, г. Махачкала
,
ФГБОУ ВПО «Дагестанский ГАУ им. », г. Махачкала
Исследование проводили по следующим направлениям:
-Распространения коринебактерий в природе с охватом всех почвенно-климатических зон республики (горная, предгорная и равнинная).
-Циркуляция в организме животных и в продуктах животного происхождения.
Обсемененность коринебактериями объектов внешней среды изучали на пробах, почвы – 180, корма (комбикорма, солома, остатки силоса в кормушках) – 260, воды из разных источников – 250, навоза – 150, отобранных из разных населенных пунктов равнинной зоны республики.
Пробы высевали на среду Бучина в разведениях до 10-8, в зависимости от загрязнения и на накопительную синтетическую среду с n – алканами, и среду Сотона.
На среде Бучина, в аэробных условиях, через 48 часов обнаружили хороший рост культур при температуре 37оС. Колонии, диаметром 2-2,5 мм, гладкие, серовато розового цвета в титре 1х 103 микробных тел, выделены из проб навоза. Колонии, полученные из посевов проб кормов, характеризовались неровными краями, серовато коричневого цвета в титре 2,9 Х 103 микробных тел. В пробах почвы обнаружили самый высокий титр 12 Х 106, колонии серовато-темного цвета.
Хорошими ростовыми свойствами обладает и среда Сотона, с добавлением углеводородов (n-алканов).
В накопительной синтетической среде с n-алканами (октан, ундекан, тетрадекан), при выращивании в аэробных условиях в течение 7 суток, не удалось обнаружить заметного роста.
По результатам микрокопирования обнаружены, Грам-положительные полочки с явлениями метахромазии, встречаются разнообразные формы, булавовидные, выпуклые, V - образные, длинные сросшиеся, размером от 0,5 до 6 мкм, толщиной до 2 мкм, с неровными краями. Концы палочек заостренные, встречаются и с обрубленными концами.
Палочки, неподвижные, некислотоустойчивые, тест на образование каталазы, пероксидазы и цитохромоксидазы положительный у большинства исследованных культур. Изменение малинового цвета индикатора в желтый по всей длине пробирки в тесте (Hugh R, Leifson E), показывает на способность указанных таксонов анаэробно усваивать глюкозу.
Большинство выделенных культур показывали способность гидролизовать крахмал, желатин, твин-40,60,80, аллонтоин и восстанавливать теллурит и нитрат в нитриты. На хромотограмме диаминопимиленовая кислота (ДАПК), имело зеленовато – желтые пятна, располагающие ниже других аминокислот, имеющих сиреневато - фиолетовую окраску. Следует, отметит, что, наличие ДАПК, обнаружили не у всех штаммов. Тест на липид LCN - А, положительный у большинства исследованных культур.
Для определения циркуляции коринебактерий в организме животных и в продуктах животного происхождения, исследовали кровь крупного рогатого скота реагирующих на ППД-туберкулин - 90 проб, молоко из прикутанных хозяйств 6-районов (по 2 с каждой зоны) – 30 проб, лимфатические узлы
(бронхиальные, заглоточные и средостенные) – всего 35 проб, отобраны в мясном отделе центрального рынка г. Махачкала.
Посевы проб производили на среду Бучина, кровяной и на кровяно-теллуритовый агар.
В 2-пробах на среде Бучина, 4-х и 5 на кровяном и на кровяно - теллуритовых соответственно, обнаружили рост микроорганизмов сплошным газоном, что является показателем низких ингибирующих свойств 2-х последних сред. В остальных пробах, гладкие колонии, размером от 1,5 до 3 мм, с ровными краями, сероватого цвета, на среде Бучина заметно изолированные. На кровяно – теллуритовой среде колонии темно-коричневого цвета.
Результаты морфо-функциональных и физиоло - биохимических свойств, подтвердили принадлежность выделенных таксонов к роду Corynebacterium.
Распространенность коринебактерий в объектах внешней среды, равнинной части республики, где на протяжении многих лет сохраняется напряженная ситуация по туберкулезу, нами показана в многочисленных работах.
В то же время, в условиях благополучных по туберкулезу зон (горная и частично предгорная), где регулярно выявляются реагирующие на туберкулин животные, но диагноз подтвердить другими методами исследования не удается, степень распространения данных таксонов представляет не меньший интерес.
В этой связи, пробы почвы были отобраны в горной, предгорной и равнинной зонах, по следующему принципу. В каждой зоне выбрали по три района, с района по два хозяйства, которые в свою очередь, разбили на два участка (орошаемый и пастбищный). С опытного участка отбирали по 5 проб, весом 0,5 кг каждая, и готовили средний образец весом 1 кг. Всего 54 пробы.
Для посева использовали среду Бучина и сывороточный агар. При учете результатов, на среде Бучина, характерные коринебактериям колонии с титрами микробных тел: в горной зоне 52 Х 105, предгорной 164 Х 105, и равниной
472 Х 107. На сывороточной среде, мелкие, сероватого цвета колонии, на, проросшем сплошным газоном фоне.
Проведенные исследования показали, что, объекты внешней среды, независимо от эпизоотической ситуации по туберкулезу, контаминированы коринебактериями. Выделенные таксоны имеют четкую корреляцию по изученным свойствам, хотя обнаруживались штаммы с нехарактерными свойствами. Данная ситуация является прогнозируемым, если учитывать, что микроорганизмы находящееся в условиях внешней среды, подвержены действиям многочисленных физико - химических и биологических факторов, способствующих изменению свойств.
