Рапонтикума сафлоровидного ФС
корневище с корнями
Rhapontici carthamoidis
rhizomata cum radicibus Взамен ФС 42-2707-99
Cобранные осенью, очищенные от остатков надземных частей и земли, промытые и высушенные корневища с корнями многолетнего травянистого растения рапонтикума сафлоровидного (син. Левзея сафлоровидная) - Rhaponticum carthamoides (Willd.) Iljin (syn. Leuzea carthamoides (Willd.) DC), сем. астровых – Asteraceae.
ПОДЛИННОСТЬ
Внешние признаки. Цельное сырье. Корневище цельное или разрезанное, деревянистое, иногда с остатками стеблей длиной до 1 см, цилиндрическое, многоглавое разветвленное, снаружи неравномерно морщинистое, в изломе неровное, с многочисленными тонкими ветвящимися придаточными корнями. Корни упругие, мелкобороздчатые. Толщина корневищ до 3 см, длина корней – до 36 см. Цвет корневищ и корней снаружи от темного серовато-коричневого до почти черного, в изломе – бледно-желтый; часто встречаются корни с мелкими участками, лишенными коры. Запах слабый, своеобразный. Вкус слегка сладковатый, смолистый.
Измельченное сырье. Кусочки корней и корневищ различной формы, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 7 мм. Цвет желтовато-коричневый. Запах слабый, своеобразный. Вкус слегка сладковатый, смолистый.
Микроскопические признаки. Для приготовления препаратов используют корни диаметром 2-3 мм. На поперечном срезе видны следующие элементы. Покровная ткань – эпидермис; первичная кора широкая, состоит из округлоугловатых, тангентально вытянутых клеток, содержащих инулин в виде бесформенных, блестящих, сильно преломляющих свет «глыбок» (смотреть препарат без нагревания!). Вблизи эндодермы расположены крупные секреторные каналы в виде прерывистого пояса, они состоят из 4-5 крупных выделительных клеток, часто с мелкими каплями смолистого содержимого, окрашивающимися Суданом III в оранжево-красный цвет. Далее располагается эндодерма, клетки ее тангентально вытянуты, стенки утолщены. Клетки паренхимы вторичной коры значительно мельче, изредка встречаются одиночные призматические кристаллы и друзы оксалата кальция, линия камбия узкая. Древесина широкая, представлена в основном, одревесневшими волокнами (либриформом) и немногочисленными узкими сосудами и трахеидами. Сердцевинные лучи многорядные, клетки их вытянуты в радиальном направлении.
Рисунок – Корень рапонтикума сафлоровидного (200?)
а – часть поперечного среза корневища: I – кора; II – центральный цилиндр; 1 – эпидерма; 2 – наружная кора; 3 – эндодерма; 4 - секреторный канал; 5 – камбий; 6 – сердцевинный луч; 7 – сосуд; 8 - либриформ; 9 – друза оксалата кальция; 10 – призматический кристалл; 11 – внутренняя кора; 12 – сердцевина;
б – схема поперечного среза корня диаметром 1 мм; 1 – эпиблема; 2 – первичная кора; 3 –эндодерма; 4 –камбий; 5 – первичная ксилема
Определение основных биологически активных веществ
1. Тонкослойная хроматография
На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля на полимерной подложке размером 10 ? 15 см наносят 15 мкл испытуемого раствора (см. раздел «Количественное определение»), 2 мкл раствора СО экдистена (или СО экдистерона). Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру со смесью растворителей хлороформ – спирт метиловый – ацетон (6:2:1) и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80 – 90 % длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, обрабатывают ванилина раствором 3 % в спирте 96 % и нагревают при температуре 105 - 110 оС в течение 2 мин.
На хроматограмме СО экдистена (или СО экдистерона) должна обнаруживаться зона адсорбции желтовато-зеленого цвета.
На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться не менее 2 зон адсорбции желтовато-зеленого цвета на уровне и выше зоны адсорбции на хроматограмме раствора СО экдистена (или СО экдистерона).
2. ВЭЖХ
На хроматограмме испытуемого раствора, полученной при количественном определении, время удерживания основного пика должно соответствовать времени удерживания основного пика на хроматограмме СО экдистена (или СО экдистерона).
ИСПЫТАНИЯ
Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье – не более
13 %.
Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье – не более 9 %.
Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье – не более 5 %.
Измельченность сырья. Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм, – не более 10 %; измельченных частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, – не более 20 %.
Посторонние примеси
Другие части растения (остатки стеблей). Цельное сырье, измельченное сырье – не более 2 %.
Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье – не более 1 %.
Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье – не более 4 %.
Тяжелые металлы. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».
Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье: суммы экдистероидов в пересчете на экдистен (или экдистерон) ? не менее 1,0 %.
Приготовление растворов.
Раствор стандартного образца (СО) экдистена (или СО экдистерона). Около 10 мг (точная навеска) СО экдистена (или СО экдистерона), предварительно высушенного при температуре 100 -105 оС в течение 3 ч, помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 30 мл спирта метилового и перемешивают. Затем доводят объем раствора спиртом метиловым до метки и перемешивают.
Срок годности раствора 1 мес при хранении в хорошо укупоренной упаковке, в защищенном от света месте.
Фосфорной кислоты раствор 0,05 %. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 600 мл воды. Прибавляют 0,5 мл кислоты фосфорной концентрированной и доводят объем раствора водой до метки, тщательно перемешивают, фильтруют через стеклянный фильтр от механических примесей, при необходимости дегазируют.
Срок годности раствора 10 сут.
Проверка пригодности хроматографической системы.
Результаты анализа считаются достоверными, если выполняются следующие условия:
- эффективность хроматографической колонки по техническому паспорту должна быть не менее 15000 теоретических тарелок;
- степень разделения пика экдистена (или экдистерона) и следующего за ним должна быть не менее 0,63;
- относительное стандартное отклонение, рассчитанное для площади пика экдистена (или экдистерона) на хроматограммах СО экдистена (или экдистерона) не должно быть более 3 %;
- коэффициент асимметрии для пика экдистена (или экдистерона) должен быть не менее 0,7 и не более 1,5.
Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. Около 2,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в пакет из фильтровальной бумаги и помещают в экстрактор аппарата Сокслета с рабочим объемом около 150 мл. эстрагируют 120 мл спирта метилового в течение 7 час (25-30 сливов). Полученное извлечение количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора спиртом метиловым до метки и тщательно перемешивают. Полученное извлечение фильтруют через стеклянный фильтр ПОР 100 (испытуемый раствор).
Условия хроматографирования
Колонка | 250 ? 4,6 мм, эндкепированный октадецилсилил (С18) силикагель для хроматографии), 5 мкм; | ||
Подвижная фаза | А - ацетонитрил; В - фосфорной кислоты раствор 0,05 %; | ||
Способ элюирования | программа градиента | ||
Время, мин | А, об. % | В, об. % | Режим |
0 | 2 | 98 | Уравновешивание системы |
0 – 4 | 2 | 98 | Изократический |
4 – 40 | 2>20 | 98>80 | К = 1 |
40 – 50 | 20 | 80 | Изократический |
Скорость потока, мл/мин | 1 | ||
Температура колонки, °С | комнатная (20 ± 2) | ||
Детектор | спектрофотометрический | ||
Длина волны, нм | 245 | ||
Объем вводимой пробы, мкл | 10 | ||
Время хроматографирования, мин | 50 |
Хроматографируют раствор СО экдистена (или СО экдистерона), получая не менее 3 хроматограмм. Результаты считаются достоверными, если выполняются требования теста «Проверка пригодности хроматографической системы».
Хроматографируют попеременно испытуемый раствор и раствор СО экдистена (или СО экдистерона), получая не менее 3 хроматограмм.
Содержание суммы экдистероидов в пересчете на экдистен (или экдистерон), и абсолютно сухое сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле:
где S –площадь пиков экдистероидов на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 – площадь пика на хроматограмме раствора СО экдистена (или СО экдистерона),
а – навеска сырья, г;
а0 – навеска СО экдистена (или СО экдистерона), г;
Р – содержание основного вещества в СО экдистена (или СО экдистерона), %;
W – влажность сырья, %.
Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».
Хранение. В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».
