Практическое занятие № 25

Практическое занятие № 25.

Тема: Диагностика холеры.  «Рубежный контроль» по циклу «частная микробиология»

3. Цель:

Ознакомиться с морфологическими и культуральными свойствами возбудителя холеры. Изучить патогенез холеры. Овладеть методами оценки результатов лабораторной диагностики холеры. Научиться практически решать вопросы профилактики холеры.

4. Вопросы  для  самоподготовки:

Классификация вибрионов. Этиология холеры. Эпидемиология и патогенез холеры. Лабораторная диагностика холеры. Дифференциация биоваров холерных  вибрионов. Ускоренные методы диагностики холеры. Диагностика бактерионосительства.  Профилактика холеры.

5. Основные понятия:

Холерный вибрион относится к роду Vibrio, имеет форму запятой, средние размеры, монотрих. Аэроб, неприхотлив к питательным средам. Большой набор сахаролитических ферментов, но диагностическое значение имеет триада Хейберга: холерный вибрион не разлагает арабинозу, разлагает сахарозу и маннозу до кислоты. Имеет протеолитические ферменты, плазмокоагулазу, муциназу, нейроминидазу, эндо - и экзотоксин (холероген).

Холерный вибрион через рот попадает в тонкий кишечник, где реализует все факторы вирулентности.

Холерные вибрионы разделяют на два биовара: классический (V. cholerae asiaticae) и Эль-Тор (V. Cholera eltor). Вибрионы имеют два антигена: О-АГ (включает 139 серогрупп) и Н-АГ.  V. cholerae asiaticae и V. Cholera eltor принадлежат к 01 серогруппе.

Для лабораторной диагностики используют первый принцип – обнаружение возбудителя. Первый метод диагностики – микроскопический. Обнаружение в нативном препарате вибрионов-монотрихов является ориентировочным для диагностики. Основной метод – бактериологический. В этом случае учитываются все особенности возбудителя: pH среды культивирования – 8,2-8,6, аэрофильность, быстрота роста 3-6 часов. Посев проводят на жидкую (пептонная вода) или плотную питательную среду (щелочной агар). Широко используют ускоренный метод диагностики: иммунолюминесцентный, иммобилизацию вибрионов иммунными сыворотками, метод .

6. Рекомендуемая литература:

, , Особо опасные инфекции  (Материалы  11  сессии  Общего  собрания  РАМН  "Медицинские проблемы биобезопасности", 3-6 апреля, 2002, Москва) // Вестник РАМН.- 2002.- N
10.-стр. 34-39. Лабораторная диагностика холеры: Методические указания.- М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2002.- 95 с. , Патогенные бактерии в природных экосистемах. Екатеринбург: Изд-во УрО РАН, 1997. 276 с. , , Распространение холеры в мире и Украине // Журн. микробиол.- 2004.- N 4.- стр. 93-96. с соавт. Холера Эльтор в Латинской Америке (Обзор) // Журн. микробиол.- 2001.-N 5.- стр. 82-90. Смирнова  Н. И.,  Кириллина  О. А.,  Кутырев  В. В.  Генетические  маркёры эпидемических штаммов Vibrio cholerae (Обзор)//Журн. микробиол.- 2000.- N 5.- стр. 87-91. , , Эпидемиологическое значение миграции населения при холереЮпидемиология и инфекционные болезни.- 2003.- N 1.-стр.15-19. ,    Холера как внутрибольничная  инфекция // Эпидемиология и инфекционные болезни.- 2003.- N 5.- стр. 48-51. с соавт. Холера в Дагестане // Журн. микробиол.- 1995.- N2 (Приложение).- стр.71-74. Поль де Крюи. Охотники за микробами.- М: Наука, 1987. - 120с. Особенности эпидемиологии современной холеры (Обзор) // Журн. микробиол.- 2000.- N 5.- стр. 87-91. , Эпидемиологические и экологические проблемы холеры Эль-Тор // Журн. микробиол.- 1988.-N 1.- стр. 88-94. , Кокушкин A. M. Эпидемически значимые штаммы холерного
вибриона: генетические особенности и возникновение / АЭпидемиология инфекционных
болезней.- 2000.- N 3.- стр. 25-29. Гинцбург АЛ., Полимеразная цепная реакция в диагностике и контроле  лечения  инфекционных  заболеваний // Клиническая  лабораторная диагностика.- 1998.-N 2.- стр. 35-39. еобычайная история о том, как родилась полимеразная цепная реакция // В мире науки ( Scientific American).- 1990.- N6.- с. 25-36. с соавт. Экспериментальная оценка эффективности лактобацилл для профилактики и лечения холеры // Журн. микробиол.- 2001.-N 2.- стр. 68-71. , , Ганин B. C., Вибрионы не О1 серологической группы и их значение в патологии человека. Актуальные вопросы особо опасных инфекционных болезней и санитарная охрана территорий в современных условиях // Журн. микробиол., 2008, № 1. – С.17-23. и соавт. Эволюция эпидемиологии холеры // Журн. микробиол., 2006, № 6. – С.63-71. Лабораторная диагностика холеры. Методические указания МЦК 4.2.2218-07  // Справочник заведующего КДЛ, 2008, № 1. – С.43-63.

7. Самостоятельная работа студентов.

САМОСТОЯТЕЛЬНЫЕ РАБОТЫ.

Задание  1:

Цель: Провести бактериологический метод диагностики для подтверждения диагноза холера.

Задача: В инфекционную больницу поступил больной с жалобами на неукротимую рвоту и частый жидкий стул. В анамнезе контакт с больным холерой. Для подтверждения предварительного диагноза: «Холера» проведено бактериологическое исследование испражнений больного. Учтите результаты и определите диагностическую ценность.

ПРОТОКОЛ ИССЛЕДОВАНИЯ

Цель….

Бактериологический метод

Исследуемый материал	Среда для посева	Идентификацию чистой культуры
Морфология	Подвижность	Биохимические свойства	Антигенные свойства: агглютинация с холерной О-сывороткой
Сахароза	Манноза	Арабиноза

Определение биовара холерного вибриона

Исследуемая культура	Среда с полимиксином	Действие бактериофага	Гемагглютинация куриных эритроцитов	Гемолиз бараньих эритроцитов	Реакция Фогес-Проскауэра	Биовар холерного вибриона

Вывод (Ответить на вопросы: 1.Подтвержден ли диагноз холеры? 2. Дайте обоснование – какой результат диагностики подтверждает диагноз, какой биовар вибриона выделен из исследуемого материала?) 

Задание 2.

Цель: Провести ускоренную диагностику холерного вибрионосительства. Изучить препараты для профилактики холеры.

Задача: В сельской местности зарегистрировано три случая заболевания холерой. Проведена ускоренная диагностика населения на вибрионосительство. Какие специфические и неспецифические препараты надо применять для профилактики холеры у лиц, бывших в контакте с больным, у людей, живущих в этом районе? Оформить протокол.

ПРОТОКОЛ ИССЛЕДОВАНИЯ

Цель…

Исследуемый материал	Метод диагностики	Среда для посева	Результат посева

Название препарата	Состав	Показания к применению	Характер действия

Вывод (Ответить на вопросы: 1. Подтвержден ли диагноз холерного вибрионосительства? 2. Какой метод диагностики проведен? 3. Обоснование положительного результат исследования? 4. Какие специфические и неспецифические препараты используются для профилактики холеры в данной местности?)

ПИСЬМЕННЫЕ ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

ВО ВНЕУЧЕБНОЕ ВРЕМЯ

Заполните таблицу по специфическим препаратам для диагностики холеры.

ПРОТОКОЛ ИССЛЕДОВАНИЯ

Цель: Изучить специфические препараты, используемые для диагностики холеры.

Название препарата	Состав	К какой группе диагностических препаратов относится?	Практическое использование (метод диагностики)

РУБЕЖНЫЙ КОНТРОЛЬ.

В рубежный контроль входит тестирование, опрос студентов по макропрепаратам и ампулам диагностических, лечебно-профилактических препаратов и реакциям иммунитета.

Перечень ампул лечебно-профилактических и диагностических препаратов:

ЭШЕРИХИОЗЫ, ШИГЕЛЛЕЗЫ

Колибактерин сухой и молочный Бифидумбактерин Бификол Лактобактерин Бактериофаг коли Агглютинирующие ОВ-сыворотки Дизентерийный иммуноген Спиртовая дизентерийная вакцина Бактериофаг дизентерийный Интести-бактериофаг Адсорбированные агглютинирующие сыворотки для идентификации шигелл Дизентерийный диагностикум Дизентерийный эритроцитарный диагностикум

САЛЬМОНЕЛЛЕЗЫ

Химическая сорбированная тифо-паратифозная столбнячная вакцина (ТАБТе) Брюшнотифозная вакцина с секста(тетра)анатоксином Вакцина брюшнотифозная спиртовая Вакцина брюшнотифозная спиртовая, обогащенная Vi-антигеном Вакцина брюшнотифозная Vi-полисахаридная Бактерифаг сальмонеллезный Интести-бактериофаг жидкий Лактоглобулин Бактериофаг брюшнотифозный

ХОЛЕРА

Противохолерные агглютинирующие OH-, О-сыворотки Типовые фаги

ЗООНОЗЫ

Аллерген сибиреязвенный Аллерген туляримийный Аллерген бруцеллезный Бруцеллезный диагностикум Туляримийный диагностикум Противочумная люминесцентная сыворотка Люминесцирующая сибиреязвенная сыворотка Противочумный бактериофаг Чумная живая сухая вакцина Туляримийная живая сухая накожная вакцина Живая бруцеллезная вакцина Бруцеллезная лечебная вакцина Сибиреязвенная живая вакцина (СТИ) Противочумная сыворотка Противочумный гамма-глобулин Сибиреязвенная сыворотка Противочумный бактериофаг

АНАЭРОБНЫЕ ИНФЕКЦИИ

Противостолбнячные, противоботулинические и противогангренозные анатоксические сыворотки Анатоксин столбнячный адсорбированный Секста (пента-, тетра-, три-)-анатоксин Противостолбнячная лошадиная сыворотка (ППС) Иммуноглобулин человеческий противостолбнячный (ПСЧИ) Сыворотки противоботулинические типов А, В, Е лошадиные очищенные Противогангренозная поливалентная лошадиная сыворотка

Перечень реакций иммунитета:

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) Реакция агглютинации (РА) Реакция связывания комплемента Реакция преципитации Реакция иммунофлюоресценции

Перечень макропрепаратов:

Чашки с ростом кишечных палочек Пробирки по ускоренной диагностики холеры Диагностика вибрионосительства Чашки с ростом сальмонелл