Практическое занятие №29

Практическое занятие №29.

2. Тема: Патогенные простейшие (амебы, лямблии, трихомонады, лейшмании, трипаносомы, плазмодии малярии, токсоплазма). Этиология, патогенез, лабораторная диагностика и профилактика.  Рубежный контроль «Клиническая микробиология. Микология и протозоология».

3. Цель: Изучить этиологию, эпидемиологию, патогенез, методы лабораторной диагностики, принципы профилактики и терапии основных протозойных инфекций человека.

4. Вопросы для самоподготовки:

Амебиаз: этиология, эпидемиология, патогенез, лабораторная диагностика и лечение. Токсоплазмоз: этиология, эпидемиология, патогенез, лабораторная диагностика и лечение. Лямблиоз: этиология, эпидемиология, патогенез, лабораторная диагностика и лечение. Балантидиоз: этиология, эпидемиология, патогенез, лабораторная диагностика и лечение. Малярия: этиология, эпидемиология, патогенез, лабораторная диагностика и лечение. Лейшманиоз: этиология, эпидемиология, патогенез, лабораторная диагностика и лечение. Трипаносомоз: этиология, эпидемиология, патогенез, лабораторная диагностика и лечение. Трихомоноз: этиология, эпидемиология, патогенез, лабораторная диагностика и лечение.

5. Основные понятия темы.

Возбудители протозойных инфекций: Entamoeba histolytica, Toxoplasma gondii, Lamblia intestinalis (Giardia lamblia), Balantidium coli, Plasmodium vivax, Plasmodium malariae, Plasmodium falciparum, Plasmodium ovale, Leischmania tropica (major, minor), L. donovani (infantum, chagasi, archibaldi), L. mexicana, L. brasiliensis, L. peruviana, Tripanosoma gambiense, Tr. rhodensiense, Tr. cruszi, Trichomonas vaginalis.

Эпидемиология и патогенез амебиаза, токсоплазмоза, лямблиоза, балантидиаза, малярии, лейшманиоза, трипаносомоза, трихомоноза. Особенности течения трихомонадной инфекции. Трихомонадоносительство. Внутриутробное инфицирование плода при токсоплазмозе.

Лабораторная диагностика протозойных инфекций. Обследование беременных на токсоплазмоз.

Лечение и профилактика  протозойных инфекций.

6. Рекомендуемая литература:

, Медицинская микробиология, иммунология, вирусология. СПб., 1998. Современная микробиология. Прокариоты (в 2-х томах). Под редакцией Й. Ленгелера, Г. Древса, Г. Шлегеля. М.: Мир, 2005. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. В 2-х т. / под ред. , . - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2010. - 480 с. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии: Учебное пособие для студентов медицинских вузов / Под ред. , – М.: Медицинское информационное агенство, 2003. – 236 с.

7. Самостоятельная работа студентов к занятию.

ПЛАН САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1.Изучить таблицы «Лабораторная диагностика трихомонадной инфекции», «Лабораторная диагностика токсоплазмоза».

2. Решить задачу по диагностике трихомонадной инфекции с помощью микроскопического, культурального метода и ПЦР (работа 1)

а) используя световую микроскопию, рассмотреть нативные мазки (соскоб со слизистой влагалища) с трихомонадами и без них (Работа 1);

б) рассмотреть пробирки с культуральной средой для трихомонад (Работа 1);

в) рассмотреть мазки трихомонад, выросших на культуральной среде (Работа 1).

г) учесть результат электрофорез продуктов ПЦР (Работа 1).

3. Решить задачу по диагностике токсоплазмоза серологическим методом (Работа 2):

а) рассмотреть планшет с результатами ИФА для выявления наличия и класса иммуноглобулинов к Toxoplasma gondii (Работа 2).

САМОСТОЯТЕЛЬНЫЕ ПРАКТИЧЕСКИЕ РАБОТЫ

Работа  1. Оценить диагностическую ценность микроскопического, культурального метода и ПЦР в диагностике трихомонадной инфекции.

Задача. В женскую консультацию обратились две женщины. Пациентка А предъявляла жалобы на пенистые желто-зеленые выделения из влагалища, зуд в области влагалища, неприятные ощущение при мочеиспускании. Пациентка В клинически здорова, обратилась для обследования в связи с планированием беременности. У обеих женщин был отобран материал из влагалища и отправлен в лабораторию для исследования на ИППП с использованием микроскопического, культурального метода и ПЦР.

Методика 1. Микроскопический метод диагностики трихомонадной инфекции

При проведении микроскопии мазка из влагалища, окрашенного метиленовым синим или по Романовскому-Гимзе, можно определить следующие морфологические объекты:

• слизь (фиолетово-синяя аморфная масса/пучки, которая образует фон препарата);

• нормальные клетки плоского эпителия (цитоплазма голубого цвета, ядро темно-синее; края клеток четкие);

• «ключевые» клетки (края нечеткие, ядро темно-синее, поверхность клетки покрыта коккобактериями синего цвета);

• сегментоядерные лейкоциты;

• микроорганизмы;

• трихомонады (клетки с пенистой цитоплазмой голубого цвета и эксцентрично расположенным темно-синим ядром).

критерии	Эпителий	Лейкоциты	Фагоцитоз	Слизь	Особенности микрофлоры	Соотношение лейкоцитов и эпителиальных клеток (Л:Э)
Норма	Единичный	Единичные	Отсутствует	Умеренно	Преобладают лактобациллы	1:1
Трихомониаз	Много	Много	Умеренный	Много	Трихомонады	>1:1

Диагностика по окрашенным препаратам имеет свои ограничения, так как для T. vaginalis не всегда характерна классическая форма со жгутиками. Чувствительность метода микроскопии по данным литературы варьирует от 38% до 82%.

Методика 2. Культуральный метод  диагностики трихомонадной инфекции

Метод выращивания трихомонад в бульонной культуре - "золотой стандарт" для диагностики, потому что это простой в интерпретации метод и требует менее чем 300-500 трихомонад/мл инокулюма для начала роста в культуре. Тем не менее, для него существуют ограничения, присущие культуральным методам. Для диагностики необходим инкубационный период от 5 до 7 дней. Для культивирования используют жидкие среды: среда Добелла-Лейдлоу, Джонсона-Трасселя, среда Diamond's, питательная среда «Трихозел». Наличие роста возбудителя в культуральной среде контролируют с помощью микроскопии. Метод окраски – по Романовскому-Гимза.

Методика 3. Генетический метод диагностики трихомонадной инфекции

ПЦР в последнее время опережает остальные методы генодиагностики трихомониаза и наравне с культуральным методом широко используется в клинической практике. Используя специфические праймеры для определенных участков ДНК T. vaginalis получают амликоны, детекцию которых проводят с помощью электрофореза в агарозном геле.

Результат электрофореза продуктов ПЦР

Оцените результаты. Оформите протокол.

ПРОТОКОЛ ИССЛЕДОВАНИЯ

Цель…

пациент	исследуемый материал	микроскопия окрашенного мазка	культуральный метод	ПЦР
Среда для посева	Наличие трихомонад при микроскопии
А
В

Вывод (ответить вопросы: 1. Какой диагноз можно поставить пациенткам А и В на основании полученных результатов лабораторной диагностики? 2. Как объяснить наличие трихомонад у пациентки В при отсутствии клинических симптомов. 3. Чем объясняется несовпадение результатов микроскопического метода с результатами культурального метода и ПЦР?).

Работа  2. Оценить диагностическую ценность серологического метода в диагностике токсоплазмоза

Акушер-гинеколог в женской консультации направила трех клинически здоровых женщин, планирующих беременность, на обследование по поводу инфекций TORCH-комплекса.

Расшифровывается аббревиатура TORCH следующим образом:

ТО — токсоплазмоз (toxoplasmosis)

R — краснуха (rubella)

С — цитомегаловирусная инфекция (cytomegalovirus)

H — герпес (herpes simplex virus).

Для исследования проводили определение уровня иммуноглобулинов классов M и G с помощью иммуноферментного анализа.

Оцените результат обследования на токсоплазмоз, оформите результаты и сделайте вывод.

пациент	исследуемый материал	метод исследования, реакция	результат	Заключение (наличие и форма инфекции)
Ig M	Ig G
А
B
C

Вывод (ответить вопросы: 1. Учитывая полученные данные, оцените возможность внутриутробного инфицирования плода у каждой из трех пациенток? 2. Каковы должны быть рекомендации акушера-гинеколога в отношении планируемой беременности в связи с этим для каждой из пациенток?)

ПИСЬМЕННЫЕ ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

ВО ВНЕУЧЕБНОЕ ВРЕМЯ

Заполните таблицу: «Патогенные простейшие

Заболевание	Название возбудителя (лат.)	Локализация в организме
Амебиаз
Токсоплазмоз
Лямблиоз
Балантидиоз
Малярия
Лейшманиоз
Трипаносомоз
Трихомоноз
Бабезиоз (пироплазмоз)
Криптоспоридиоз

КЛИНИЧЕСКАЯ  МИКРОБИОЛОГИЯ 

Рубежный контроль

Вариант I

1. К  ГРУППЕ ЭУБИОТИКОВ ОТНОСИТСЯ

Протейный бактериофаг Инулин Колибактерин Антистафилококковая гипериммунная плазма

2. СПОСОБНОСТЬ ФАКТОРОВ ЕСТЕСТВЕННОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ И ИММУННЫХ МЕХАНИЗМОВ ХОЗЯИНА  ВО ВЗАИМОДЕЙСТВИИ С НОРМАЛЬНОЙ МИКРОФЛОРОЙ ПРОТИВОСТОЯТЬ ЗАСЕЛЕНИЮ ПАТОГЕННЫМИ МИКРО-ОРГАНИЗМАМИ НАЗЫВАЕТСЯ  ……………………

3. ВЫБЕРИТЕ ОСНОВНОЙ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЙ КРИТЕРИЙ ПРИ  ОПРЕДЕЛЕНИИ  СТЕПЕНИ  ДИСБИОЗА  КИШЕЧНИКА:

А) количество бактероидов

Б) свойства кишечной палочки

В) наличие условно-патогенных бактерий

Г) количество бифидобактерий

ОСНОВНОЙ ПРИНЦИП ЛАБОРАТОРНОЙ  ДИАГНОСТИКИ ДИСБАКТЕРИОЗА КИШЕЧНИКА ………………………………………

5. ПРИНЦИП  ДЕЙСТВИЯ  ПРОБИОТИКА (эубиотика):

Улучшение метаболизма Детоксикация организма Стимуляция роста нормальной микрофлоры  Антагонизм по отношению к аллохтонным микроорганизмам

6. ДЛЯ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ  ДИСБИОЗА ПРИМЕНЯЮТ:

а) пробиотики 

б) вакцины

в) диагностикум

г) бактериофаги

д) сыворотки

7. МИКРООРГАНИЗМЫ  СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ

1.  Для выделения микроорганизмов  А. Кровяной агар

  рода Staphylococcus используется  Б. Желточно-солевой агар

  \ В. Среда Эндо

2. Для  выделения микроорганизмов  Г.  Среда Блаурока

  рода Bifidobacterium используется  Д. Щелочной агар

8. СОВОКУПНОСТЬ МИКРООРГАНИЗМОВ, ЗАСЕЛЯЮЩИХ ОПРЕДЕЛЕННЫЙ  ………………….., НАЗЫВАЕТСЯ  ………………….

9. КРИТЕРИИ, ХАРАКТЕРИЗУЮЩИЕ УСЛОВНО-ПАТОГЕННОГО МИКРООРГАНИЗМА КАК ВОЗБУДИТЕЛЯ ИНФЕКЦИОННОГО ПРОЦЕССА

1. ПМО=103КОЕ/мл, нарастание титра антител к аутоштамму

2. ПМО=103КОЕ/мл, отсутствие нарастание титра антител к аутоштамму

3. ПМО=104КОЕ/мл, отсутствие нарастание титра антител к аутоштамму

4. ПМО=105 КОЕ/мл, нарастание титра антител к аутоштамму

5. ПМО=102КОЕ/мл, нарастание титра антител к аутоштамму

10. КАКИЕ МЕТОДЫ ИСПОЛЬЗУЮТСЯ ДЛЯ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗВАННЫХ  УПБ:

бактериологический и серологический серологический и биопроба аллергический и биопроба микроскопический и серологический 

11. МЕХАНИЗМ ПЕРСИСТЕНЦИИ        ФАКТОР ПЕРСИСТЕНЦИИ

А) Секретируемый фактор                        1. Капсула

Б) Антигенная мимикрия                        2. Антилизоцимная активность

                                                 3. L-трансформация

                                                4. Общие антигенные детерминанты

12. ОСНОВНЫМи ИСТОЧНИКаМи ГОСПИТАЛЬНых ИНФЕКЦИй ЯВЛЯюТСЯ  ………………  и …………..

13. ПО  КАКИМ СВОЙСТВАМ ДОКАЗАТЬ ПРИНАДЛЕЖНОСТЬ ВЫДЕЛЕННЫХ ШТАММОВ К ГОСПИТАЛЬНЫМ

  1. Грамположительные кокки и расщепляют глюкозу

2. Вызывают гемолиз и фибринолиз

3. Устойчивы к антибиотикам, УФЛ, дезинфектантам

14.        БЛАСТОМИКОЗ И ГИСТОПЛАЗМОЗ ПО РАСПРОСТРАНЕНИЮ ОТНОСЯТ К ………………………..…..МИКОЗАМ.

15. В диагностике трихомонадной инфекции используются методы

1. микроскопический

2. микроскопический, культуральный

3. микроскопический, культуральный, серологический

4. микроскопический, культуральный, серологический, аллергический

КЛИНИЧЕСКАЯ  МИКРОБИОЛОГИЯ 

Рубежный контроль

Вариант II

1. ФУНКЦИИ НОРМАЛЬНОЙ МИКРОФЛОРЫ:

а) защитная, лимфогенная, иммуномодулирующая 

б) защитная, иммуномодулирующая, метаболическая

в) метаболическая, защитная, эндокринная 

г) иммуномодулирующая, метаболическая, гемостатическая 

2. ОСНОВУ  БИФИКОЛА  СОСТАВЛЯЮТ  БАКТЕРИИ  ВИДА  (ОВ)  ………………………

3. ВЫБЕРИТЕ  ПРЕПАРАТ – ПРЕБИОТИК:

Дизентерийный иммуноген Бифидумбактерин Олигофруктоза Коли-бактериофаг

4. УСТАНОВИТЬ СООТВЕТСТВИЕ:

1.  Для выделения гемолитических видов  А. Кровяной агар

  микроорганизмов используется  Б. Желточно-солевой агар

  В. Среда Эндо

2. Для  выделения микроорганизмов  Г.  Среда Блаурока

  семейства Enterobacteriaceae используется  Д. Щелочной агар

5. МЕТОД ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ДИСБАКТЕРИОЗА КИШЕЧНИКА  ……………………

Выпишите номер правильного ответа:

6. ДЛЯ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ  ДИСБИОЗА ПРИМЕНЯЮТ:

а) пробиотики 

б) вакцины

в) диагностикум

г) бактериофаги

д) сыворотки

7. В ТОЛСТОЙ КИШКЕ  ПРЕОБЛАДАЮТ:

облигатные аэробы факультативные анаэробы облигатные анаэробы МИКРООРГАНИЗМЫ, НЕ ЯВЛЯЮЩИЕСЯ ЧЛЕНАМИ ПОСТОЯННОГО БИОЦЕНОЗА ………

9. НАРУШЕНИЕ МИКРОБНОГО БИОЦЕНОЗА ОПРЕДЕЛЕННОГО БИОТОПА НАЗЫВАЕТСЯ  ……………………

10. КРИТЕРИИ, ХАРАКТЕРИЗУЮЩИЕ УСЛОВНО-ПАТОГЕННОГО МИКРООРГАНИЗМА КАК ВОЗБУДИТЕЛЯ ОППОРТУНИСТИЧЕСКОЙ ИНФЕКЦИИ

1. ПМО=102КОЕ/мл, отсутствие антилизоцимной активности

2. ПМО=103КОЕ/мл, отсутствие антилизоцимной активности

3. ПМО=105 КОЕ/мл, наличие антилизоцимной активности

4. ПМО=104КОЕ/мл, отсутствие антилизоцимной активности

5. ПМО=103КОЕ/мл, наличие антилизоцимной активности

11.МЕХАНИЗМ ПЕРСИСТЕНЦИИ        ФАКТОР ПЕРСИСТЕНЦИИ

А) Экранирование пептидогликана                1. Капсула

Б) Потеря пептидогликана                        2. Антилизоцимная активность

                                                       3. L-трансформация

                                                       4. Общие антигенные детерминанты

12. У БОЛЬНОГО ПОСЛЕ УКОЛА ВОЗНИК АБСЦЕСС, ТАКОЙ ПУТЬ ЗАРАЖЕНИЯ НАЗЫВАЕТСЯ  ……………………..

13. У БОЛЬНОГО  ПОСЛЕ ОПЕРАЦИИ НАГНОИЛАСЬ РАНА, ОН ЗАРАЗИЛСЯ ОТ БОЛЬНОГО ФУРУНКУЛЕЗОМ, ЛЕЖАЩЕГО НА СОСЕДНЕЙ КОЙКЕ. Такая  инфекция  называется

  1. эндогенной                                4. вторичной

  2. госпитальной                        5. реинфекцией

  3. смешанной

14. ОСНОВНЫЕ МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ СТРУКТУРЫ ГРИБА РОДА ASPERGILLUS

А – мицелий не септирован, конидиеносцы, дрожжевые клетки, конидии

Б - септированный мицелий, конидиеносцы, стеригмы, конидии

В – септированный мицелий, конидиеносцы, стеригмы, дрожжевые клетки

Г – мицелий не септирован, конидиеносцы, стеригмы, конидии

15. ОСНОВНОЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ ТОКСОПЛАЗМОЗА

1. микроскопический

2. посев на питательные среды

3. серологический

4. аллергический