Гидроксикарбамид ФС
Гидроксикарбамид
Hydroxycarbamidum Вводится впервые
Гидроксимочевина
CH4N2O2 | М. м. 76,05 |
Cодержит не менее 97,5 % и не более 102,0 % гидроксикарбамида CH4N2O2 в пересчёте на сухое вещество.
Описание. Кристаллический порошок белого или почти белого цвета. *Гигроскопичен.
Растворимость. Легко растворим в воде, в диметилформамиде, умеренно или мало растворим в спирте 96 %.
Подлинность
1. ИК-спектр. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом, в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру стандартного образца гидроксикарбамида.
2. ВЭЖХ. Время удерживания основного вещества на хроматограмме испытуемого раствора должно соответствовать времени удерживания основного вещества на хроматограмме раствора стандартного образца («Количественное определение»).
Родственные примеси
1. Мочевина. Не более 0,5 %. Определение проводят методом ТСХ.
Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.
Подвижная фаза (ПФ). Пиридин – вода – этилацетат 20:20:100. Перед началом определения насыщают хроматографическую камеру в течение 30 минут.
Испытуемый раствор. Около 50 мг (точная навеска) субстанции помещают в пластиковую закрывающуюся пробирку вместимостью 1,5 мл, прибавляют 1,0 мл воды, растворяют навеску перемешиванием на вибромешалке в течение не менее 5 мин.
Стандартный раствор мочевины. Около 12,5 мг (точная навеска) мочевины помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 30 мл воды и доводят объём раствора водой до метки.
Раствор для проверки пригодности хроматографической системы (раствор ППХС). Около 5 мг субстанции и около 5 мг мочевины помещают в мерную колбу вместимостью 20 мл, растворяют в 10 мл воды и доводят объём раствора водой до метки.
На линию старта пластинки наносят по 10 мкл испытуемого раствора (500 мкг), стандартного раствора мочевины (2,5 мкг) и раствора ППХС (по 2,5 мкг). Пластинку с нанесенными пробами высушивают на воздухе в течение 5 мин, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 – 90 % длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, выдерживают в сушильном шкафу при температуре 100 – 105 °С в течение 2 – 3 мин. Тёплую пластинку опрыскивают 1 % раствором диметиламинобензальдегида в 1 М хлористоводородной кислоте и просматривают в видимом свете.
Хроматографическая система считается пригодной, если на хроматограмме раствора ППХС чётко видны две зоны адсорбции.
На хроматограмме испытуемого раствора зона адсорбции мочевины не должна превышать соответствующую зону на хроматограмме стандартного раствора мочевины.
2. Другие примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ.
Подвижная фаза (ПФ). Метанол – вода 50:950.
Испытуемый раствор 1. Около 100 мг (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, растворяют в 5 мл ПФ, при необходимости обрабатывя ультразвуком, и доводят объём раствора ПФ до метки. Раствор используют свежеприготовленным.
Испытуемый раствор 2. 1,0 мл испытуемого раствора 1 помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл и доводят объём раствора ПФ до метки. Раствор используют свежеприготовленным.
Раствор сравнения. 1,0 мл испытуемого раствора 1 помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объём раствора ПФ до метки. 1,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл и доводят объем раствора ПФ до метки. Раствор используют свежеприготовленным.
Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. Около 100 мг гидроксиламина гидрохлорида и около 5 мг субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, растворяют в 5 мл ПФ, при необходимости обрабатывая ультразвуком, и доводят объем раствора ПФ до метки. Раствор используют свежеприготовленным.
Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. 2,0 мл раствора сравнения помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл и доводят объём раствора ПФ до метки. Раствор используют свежеприготовленным.
Хроматографические условия
Колонка | 30,0 Ч 0,4 см, силикагель октадецилсилильный для хроматографии, 5 мкм; |
Температура колонки | 25 °С; |
Скорость потока | 0,5 мл/мин; |
Детектор | спектрофотометрический, 214 нм; |
Объём пробы | 20 мкл; |
Время хроматографирования | 20 мин. |
Хроматографируют раствор для проверки пригодности хроматографической системы, раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор 1.
Относительное время удерживания. Гидроксикарбамид – 1, гидроксиламин – 0,96.
Пригодность хроматографической системы определяют в соответствии с ОФС «Хроматография» со следующими уточнениями. На хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы:
- разрешение (R) между пиками гидроксиламина и гидроксикарбамида должно быть не менее 1,0;
на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы:
- отношение сигнал/шум (S/N) для пика гидроксикарбамида должно быть не менее 10;
на хроматограмме раствора сравнения:
- фактор асимметрии пика (AS) гидроксикарбамида должен быть не более 2,5;
- относительное стандартное отклонение площади пика гидроксикарбамида должно быть не более 5,0 % (6 определений);
- эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику гидроксикарбамида, должна составлять не менее 3000 теоретических тарелок.
Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:
– площадь пика любой примеси должна быть не более площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1 %);
– суммарная площадь пиков всех примесей не должна более чем в два раза превышать площадь пика гидроксикарбамида на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,2 %).
Не учитывают пики, площадь которых менее площади основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,02 %).
Потеря в массе при высушивании. Не более 0,5 % (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 1). Для определения используют около 1 г (точная навеска) субстанции.
Хлориды. Не более 0,005 % (ОФС «Хлориды»). 0,4 г субстанции растворяют в 10 мл воды.
Сульфатная зола. Не более 0,1 % (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют около 1 г (точная навеска) субстанции.
Тяжёлые металлы. Не более 0,001 %. Определение проводят в соответствии с ОФС «Тяжёлые металлы», метод 2, в зольном остатке, полученном после сжигания 1 г субстанции, с использованием эталонного раствора 1.
Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».
Количественное определение. Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.
Раствор стандартного образца. Около 100 мг (точная навеска) стандартного образца гидроксикарбамида помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 70 мл ПФ, обрабатывая при необходимости ультразвуком, и доводят объём раствора ПФ до метки. Раствор используют свежеприготовленным.
Хроматографируют раствор стандартного образца и испытуемый раствор 2 (раздел «Родственные примеси, 2. Другие примеси»).
Пригодность хроматографической системы определяют в соответствии с ОФС «Хроматография» со следующими уточнениями. На хроматограмме раствора стандартного образца:
- фактор асимметрии пика (AS) гидроксикарбамида должен быть не более 2,5;
- относительное стандартное отклонение площади пика гидроксикарбамида должно быть не более 2,0 % (6 определений);
- эффективность хроматографической колонки (N), рассчитанная по пику гидроксикарбамида, должна составлять не менее 3000 теоретических тарелок.
Содержание гидроксикарбамида CH4N2O2 в субстанции в процентах (
) в пересчете на сухое вещество вычисляют по формуле:
где | S1 | – | площадь пика гидроксикарбамида на хроматограмме испытуемого раствора 2; |
S0 | – | площадь пика гидроксикарбамида на хроматограмме раствора стандартного образца; | |
а1 | – | навеска субстанции, мг; | |
а0 | – | навеска стандартного образца гидроксикарбамида, мг; | |
W | – | потеря в массе при высушивании, %; | |
P | – | содержание гидроксикарбамида в стандартном образце гидроксикарбамида, %. |
Хранение. В защищённом от света месте.
Примечание. *Приводится для информации.
