Сушеницы топяной трава

Сушеницы топяной трава Gnaphalii uliginosi herba	ФС  Взамен  ГФ XI, вып. 2, ст. 51

Собранная в начале цветения и высушенная трава с корнями дикорастущего однолетнего травянистого растения сушеницы топяной – Gnaphalium uliginosum L. s. l., сем. астровых – Asteraceae.

ПОДЛИННОСТЬ

Внешние признаки. Цельное сырье. Цельные или частично измельченные олиственные стебли длиной до 30 см с серовато – белым войлочным опушением. Корни тонкие, стержневые, ветвистые. Стебли тонкие, цилиндрические, обычно от основания распростерто – ветвистые. Листья длиной 0,5 – 3,5 см, шириной 0,1 – 0,4 см, очередные, короткочерешковые, линейно – продолговатые, с туповатой верхушкой и выдающейся срединной жилкой. Соцветие состоит обычно из нескольких яйцевидных мелких корзинок длиной 0,3 – 0,4 см, плотно скученных клубочками на верхушках побегов и окруженных лучисторасходящимися листьями, превышающими клубочки соцветий. Обвертка корзинки состоит из 2 – 3 рядов черепитчато-расположенных темно-бурых листочков; наружные листочки яйцевидные, при основании войлочные, в верхней половине голые, блестящие; внутренние – продолговато-яйцевидные, заостренные, голые. Цветки мелкие, желтоватые, трубчатые, пятизубчатые. Плоды – семянки с хохолком из 10 отдельных волосков.

Цвет зеленовато-серый. Запах слабый. Вкус водного извлечения солоноватый.

Измельченное сырье. Кусочки стеблей, листьев, соцветий, корней, а также отдельные цветки, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 7 мм. Цвет зеленовато-серый. Запах слабый. Вкус водного извлечения солоноватый.

Микроскопические признаки. Цельное сырье, измельченное сырье. Клетки верхнего эпидермиса листа должны быть со слабоизвилистыми стенками, у основания и вершины листа с ровными стенками. Клетки в основном прямоугольной формы, у основания и вершины листа вытянутые. Нижний эпидермис с извилистыми и сильноизвилистыми стенками, у основания и вершины листа клетки вытянуты и имеют более ровные стенки. Кутикула ровная. Устьица крупные, овально-округлые, погруженные окружены 4-5 клетками эпидермиса и ориентированы по длине листа (аномоцитный тип), на нижней стороне их значительно больше. Волоски 2-типов должны наблюдаться на обеих сторонах листа: простые бичевидные, с 1 – 3 базальными клетками и длинной узкой конечной клеткой, переплетающиеся между собой с образованием сплошного слоя; головчатые волоски: с одно - и многоклеточной ножкой, с одно - и двухрядной ножкой (насчитывающие до 3 клеток в высоту), с одно - и многоклеточной головкой, клетки которой расположены в один или два ряда.

Мезофилл должен быть представлен только губчатой паренхимой (гомогенный), состоящей из 4 – 6 рядов рыхло расположенных клеток. Наружные и внутренние эпидермальные стенки клеток в области главной жилки утолщены, на остальной части листовой пластинки - стенки клеток имеют утолщение только с наружной стороны. На поперечном срезе встречается единственный большой закрытый коллатеральный пучок, соответствующий главной жилке и множество очень маленьких проводящих пучков, часто расположенных; от которых к поверхности листа книзу и кверху должно отходить по 2 – 3 ряда клеток губчатой паренхимы. Ксилема проводящих пучков должна содержать спиральные трахеиды.

Рисунок 1 – Сушеницы топяной лист:

А – верхний эпидермис (250Ч). Б – нижний эпидермис (250Ч). В – поперечный срез (125Ч). 1  –  простые волоски; 2 – головчатые волоски; 3 – клетки эпидермиса; 4 – устьица; 5 – флоэма; 6 – ксилема; 7 – губчатая паренхима.

Рисунок 2 – Сушеницы топяной стебель:

поперечный срез (125Ч). 1 – простые волоски; 2 – головчатые волоски; 3 – клетки эпидермиса; 4 – эндодерма; 5 – флоэма; 6 – сосуды; 7 – камбий; 8 – склеренхимные волокна; 9 – склерифицированная межпучковая паренхима; 10 – паренхима сердцевины.

Рисунок 3 – Сушеницы топяной стебель:

А – продольный срез (125Ч). Б – срез с поверхности (150Ч). В – схема расположения сосудисто-волокнистых пучков на поперечном срезе. 1 – простые волоски; 2 – головчатые волоски; 3 – клетки эпидермиса; 4 – эндодерма; 5 – флоэма; 6 – сосуды; 7 – камбий; 8 – склеренхимные волокна; 9 – паренхима сердцевины; 10 – устьица; Фл – флоэма; Кс – ксилема.

Рисунок 4 – Сушеницы топяной цветки:

А – эпидермис обвертки корзинки. Б – волоски летучки семянки. 1 – головчатые волоски. 2 – простые волоски.

Клетки эпидермиса стебля должны быть продолговато-прямоугольной формы, вытянутые по длине стебля. Кутикула ровная. Устьица аномоцитные. Должны встречаться редко. На поперечных и продольных срезах должны быть видны утолщенные наружные и внутренние стенки эпидермальных клеток. Открытые коллатеральные сосудисто-волокнистые пучки расположены по кругу с небольшими межпучковыми зонами, в которых межпучковая паренхима склерифицирована. Склеренхимные волокна в виде «шапочек» расположены над пучками, а также имеются в ксилеме. Сосуды спиральные и точечные представлены небольшими радиальными тяжами группами по 2-4. Кора отделена от центрального осевого цилиндра рядом клеток эндодермы. Сердцевина заполнена крупными паренхимными клетками. Волоски стебля аналогичны волоскам листа.

Эпидермис обвертки корзинки должен состоять из вытянутых прямоугольных клеток с ровными стенками и редко встречающихся аномоцитных устьиц. Кутикула ровная. Волоски должны быть такими же, как волоски листа, но головчатые волоски более крупные,  насчитывающие до четырех клеток в высоту. Хохолок семени должен состоять из многочисленных пучковых многоклеточных волосков. Пыльца округлая шиповатая трехпоровая.

Определение основных групп биологически активных веществ.

Тонкослойная хроматография.

1. Около 5,0 г (точная навеска) измельченного сырья до величины частиц, проходящих сквозь сито с размером отверстий 2 мм, помещают в круглодонную колбу 250 мл, прибавляют 60 мл спирта 70 % и нагревают на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 45 мин. Колбу с содержимым охлаждают до комнатной температуры и фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 мл через бумажный фильтр. В колбу со шротом добавляют 40 мл спирта 70 %, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на водяной бане в течение 15 мин. Колбу с содержимым охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через тот же фильтр в ту же мерную колбу. Объем раствора доводят спиртом 70 % до метки и тщательно перемешивают (раствор А).

20 мл раствора А упаривают до удаления запаха спирта на кипящей водяной бане. Водный остаток раствора А разбавляют водой очищенной до 30 мл и переносят в делительную воронку 100 мл. В ту же воронку добавляют 20 мл бутанола и встряхивают в течение 10 мин. Бутанольное извлечение переносят в колбу и упаривают на водяной бане под вакуумом досуха. Сухой остаток растворяют в 5 мл спирта 70 % (испытуемый раствор).

На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля на алюминиевой подложке размером 10 Ч 10 см наносят 20 мкл испытуемого раствора. Пластинку с нанесенной пробой сушат на воздухе в течение 10 мин, помещают в камеру со смесью растворителей: бутанол - уксусная кислота - вода (9:1:0,5) и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителя пройдет около 80 – 90 % длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе до удаления следов растворителей в течение 15 мин. Затем пластину обрабатывают алюминия хлорида спиртовым раствором 5 %, выдерживают при температуре

100 - 105 °С в сушильном шкафу в течение 10 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.

На хроматограмме испытуемого раствора  должны обнаруживаться две зоны адсорбции с флуоресценцией зеленого цвета (флавоноиды); допускается обнаружение дополнительных зон адсорбции ниже указанных зон адсорбции.

УФ-спектр

В УФ-спектре испытуемого раствора, полученного при количественном определении, в области от 200 до 400 нм, должны регистрироваться максимумы поглощения при (216 ± 3) нм и (330 ± 3) нм и минимум поглощения при (266 ± 3) нм.

3. Около 1,0 г сырья помещают в колбу вместимостью 25 мл и прибавляют 10 мл спирта 96 %, соединяют с обратным холодильником и нагревают на водяной бане в течение 10 мин с момента закипания спирта в колбе. После охлаждения до комнатной температуры полученное извлечение фильтруют через бумажный фильтр.

В две одинаковые пробирки помещают по 2 мл полученного фильтрата, затем в одну из пробирок добавляют 0,5 мл алюминия хлорида спиртового раствора 2 % (испытуемый раствор), а во вторую – 0,5 мл спирта 96 % (раствор сравнения), содержимое пробирок перемешивают. Через 20 мин в обе пробирки прибавляют по 10 мл воды очищенной, перемешивают содержимое и просматривают на белом фоне. Анализируемый раствор должен иметь желтый цвет и по интенсивности окраски заметно превосходить раствор сравнения (флавоноиды).

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 13 %.

Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 20 %.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 10 %.

Измельченность сырья. Цельное сырье. Измельченных частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, – не более 5 %. Измельченное сырье. Частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм, - не более 10 %; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,31 мм, - не более 10 %.

Посторонние примеси

Органической примеси. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 2 %.

Минеральной примеси. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 2 %.

Тяжелые металлы. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».

Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье. Сумма флавоноидов в пересчете на гнафалозид А  –  не менее 0,2 %

Приготовление растворов

Приготовление колонки: 1,5 г полиамидного сорбента помещают в стаканчик вместимостью 50 мл, заливают 30 мл воды, перемешивают и выливают через воронку диаметром 3,5 см в колонку шириной 1,2 см и высотой 25 см, в нижнюю часть которой помещают небольшой ватный тампон, предварительно смоченный водой. Колонку заполняют при открытом кране. Элюирование проводят со скоростью 4 мл/мин.

Контрольный раствор. Контрольный раствор получают аналогично определяемой сумме флавоноидов путем пропускания 50 мл спирта 96 % через колонку в мерную колбу вместимостью 50 мл. Объем раствора доводят спиртом 96 % до метки и перемешивают.

Стандартный раствор калия бихромата. Около 0,03 г (точная навеска) калия бихромата, высушенного до постоянной массы, растворяют в серной кислоте растворе 0,005 М в мерной колбе вместимостью 1 л, доводят объем раствора тем же раствором до метки и перемешивают.

Серной кислоты раствор 0,005 М. К 1 л воды приливают 0,28 мл серной кислоты концентрированной и перемешивают.

Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. Около 5,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в патрон из фильтровальной бумаги и экстрагируют спиртом 96 % в аппарате Сокслета с экстрактором вместимостью 150 мл на кипящей водяной бане в течение 5 ч (20 ч 25 сливов). Извлечение в круглодонной колбе вместимостью 100 мл упаривают по частям на кипящей водяной бане досуха.

К сухому остатку в колбе прибавляют 5 мл натрия хлорида раствора 10 %, нагревают на кипящей водяной бане в течение 2 мин, растирая осадок стеклянной палочкой  до растворения. После охлаждения раствор количественно переносят на колонку с полиамидным сорбентом. Операцию проводят два раза. Слив производят через воронку с ватным тампоном, предварительно смоченным водой.

Колонку промывают 10 мл воды, затем убирают ватный тампон и промывают колонку еще 20 мл воды. Водный элюат отбрасывают. Флавоноиды элюируют 50 мл спирта 96 % со скоростью 4 мл/мин. Когда темно-желтая зона (в УФ-свете) подойдет к нижней части сорбента, элюат собирают в мерную колбу вместимостью 50 мл. Объем извлечения доводят спиртом 96 % до метки и тщательно перемешивают.

1 мл полученного элюата переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, объем доводят раствора спиртом 96 % до метки и перемешивают (испытуемый раствор). Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 338 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм по сравнению с контрольным раствором.

Параллельно измеряют оптическую плотность стандартного раствора калия бихромата.  В качестве раствора сравнения используют серной кислоты раствор 0,005 М.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на гнафалозид А в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

=

где   A – оптическая плотность испытуемого раствора;

A0 – оптическая плотность стандартного раствора калия бихромата;

a0 – навеска калия бихромата, г;

a – навеска сырья, г;

0,2020 – коэффициент пересчета калия бихромата на гнафалозид А;

1,03 – поправочный коэффициент на неполное элюирование гнафалозида А с полиамидного сорбента;

W – влажность сырья, %.

Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

Хранение. В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».