АКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Красавки листья ФС
Вelladonnaе foliaе Взамен ГФ XI, вып. 2, ст. 13
Собранные в фазу начала бутонизации до массового плодоношения и высушенные листья многолетнего культивируемого травянистого растения красавки белладонны - Atropa bella-donna L. s.l., сем. пасленовых – Solanaceae.
ПОДЛИННОСТЬ
Внешние признаки. Цельное сырье. Цельные или частично измельченные листья эллиптической, яйцевидной или продолговато-яйцевидной формы, к верхушке заостренные, цельнокрайние, к основанию суживающиеся в короткий черешок, тонкие, длиной до 20 см и шириной до 10 см.
Цвет листьев сверху зеленый или коричневато-зеленый, снизу более светлый. Запах слабый, характерный. Вкус водного извлечения не определяется (сырье ядовито).
Измельченное сырье. Кусочки листьев различной формы, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 7 мм. Цвет зеленый или коричневато-зеленый. Запах слабый, характерный. Вкус водного извлечения не определяется (сырье ядовито).
Микроскопические признаки. Цельное сырье. Измельченное сырье.
При рассмотрении листа с поверхности должны быть видны клетки эпидермиса с извилистыми боковыми стенками и складчатой кутикулой. Устьица многочисленные, окружены 3 – 4 околоустьичными клетками, из которых одна значительно мельче других (анизоцитный тип), преобладают на нижней стороне листа. Волоски редкие, головчатые и простые. Головчатые волоски двух типов: с длинной многоклеточной ножкой и одноклеточной головкой, с одноклеточной ножкой и многоклеточной (из 4 – 6 клеток) головкой. Простые волоски 2 – 3- (реже 6) –клеточные, с тонкими стенками. В губчатой паренхиме видны овальные клетки, заполненные мелким кристаллическим песком оксалата кальция. При малом увеличении они имеют вид темных, почти черных пятен, при большом – сероватые, с различимой кристаллической зернистостью. Очень редко в центре клетки с кристаллическим песком можно различить друзы или призматические кристаллы оксалата кальция.
Рис. Красавки листья:
а - верхний эпидермис; б - нижний эпидермис; I - клетки эпидермиса с извилистыми боковыми стенками; 2 - складчатость кутикулы; 3 - устьица окружены 3 - 4 околоустьичными клетками, из которых одна значительно мельче других (анизоцитный тип); 4 - железистые волоски с небольшой одноклеточной ножкой и крупной многоклеточной головкой; 5 - железистые волоски с длинной ножкой и одноклеточной небольшой головкой; 6 - простые волоски из 2 - 3 (реже 6) тонкостенных клеток; 7 - овальные клетки-идиобласты в мезофилле, заполненные кристаллическим песком кальция оксалата (280Ч).
Определение основных групп биологически активных веществ
Тонкослойная хроматография
На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля на полимерной подложке размером 10 Ч 15 см наносят 20 мкл раствора 2 (см. «Количественное определение»). Пластинку с нанесенной пробой сушат при комнатной температуре, помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение 30 мин системой растворителей ацетон – аммиака раствор 10 % (95 : 5), и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80 – 90 % длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей и обрабатывают реактивом Драгендорфа.
На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться доминирующая зона адсорбции оранжевого цвета (алкалоиды); допускается обнаружение других зон адсорбции.
1 г красавки белладонны листьев измельченных до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, помещают в коническую колбу вместимостью 50 мл, приливают 10 мл спирта этилового 40 % и кипятят с обратным холодильником на водяной бане с температурой 80 - 85 °С в течение 1 ч.
5 мл полученного извлечения выпаривают на водяной бане до 1 мл, переносят с помощью 3 мл воды очищенной в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 0,5 мл аммиака раствора 10 %, 15 мл хлороформа и взбалтывают в течение 3 мин. Затем добавляют 2 г натрия сульфата безводного и снова взбалтывают в течение 3 мин. Хлороформное извлечение фильтруют через бумажный фильтр с 2 алюминия оксида безводного в фарфоровую чашку. Фильтр промывают 5 мл хлороформа. Хлороформ выпаривают на водяной бане, к остатку добавляют 1 мл азотной кислоты концентрированной и выпаривают на водяной бане досуха. Сухой остаток охлаждают и смачивают 1 мл ацетона и 4 каплями калия гидроксида 0,5 М раствора спиртового; должно наблюдаться быстро исчезающее фиолетовое окрашивание (алкалоиды).
ИСПЫТАНИЯ
Влажность. Цельное сырье. Измельченное сырье – не более 13 %.
Зола общая. Цельное сырье. Измельченное сырье – не более 15 %.
Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье. Измельченное сырье – не более 3 %.
Измельченность сырья. Цельное сырье: измельченных частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 3 мм, – не более 4 %. Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм, – не более 5 %; измельченных частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, – не более 5 %.
Посторонние примеси
Листьев, изменивших окраску (пожелтевших, потемневших, почерневших). Цельное сырье. Измельченное сырье – не более 4 %.
Других частей растения (стеблей, цветков, плодов). Цельное сырье – не более 4 %.
Органической примеси. Цельное сырье, измельченное сырье – не более 0,5 %.
Минеральной примеси. Цельное сырье, измельченное сырье – не более 0,5 %.
Тяжелые металлы. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».
Количественное определение.
Цельное сырье, измельченное сырье: суммы алкалоидов в пересчете на гиосциамин – не менее 0,3 %.
Сумма алкалоидов в пересчете на гиосциамин
Приготовление растворов.
0,02 М хлористоводородной кислоты. 20,0 мл 1 М раствора хлористоводородной кислоты помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл, доводят объём раствора водой до метки и перемешивают.
Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. Около 10 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу вместимостью 250 мл, приливают 150 мл эфира, 7 мл аммиака раствора 10 % и взбалтывают смесь в течение 1 ч. Эфирное извлечение быстро фильтруют через вату в колбу вместимостью 200 мл, прикрывая воронку часовым стеклом. К фильтрату приливают 5 мл воды, энергично взбалтывают и оставляют до просветления эфирного слоя, после чего отмеривают с помощью мерного цилиндра 90 мл эфирного извлечения в делительную воронку вместимостью 200 мл. Цилиндр дважды ополаскивают эфиром порциями по 10 мл, которые присоединяют к отмеренному эфирному извлечению (раствор 1).
Из эфирного извлечения алкалоиды максимально извлекают хлористоводородной кислотой 1 % порциями по 20, 15, 10 мл (проба с реактивом Майера), каждый раз фильтруя через смоченный водой бумажный фильтр диаметром 5 см во вторую делительную воронку такой же вместимости. Фильтр промывают дважды хлористоводородной кислотой 1 % по 5 мл, присоединяя промывную жидкость к общему кислотному извлечению.
Кислотное извлечение подщелачивают аммиака раствором 10 % до щелочной реакции по фенолфталеину и алкалоиды извлекают последовательно 20, 15, 10 мл хлороформа, взбалтывая по 3 мин. Хлороформные извлечения фильтруют в колбу для отгонки вместимостью 100 мл через бумажный фильтр, на который предварительно помещают 4-5 г свежепрокаленного натрия сульфата безводного, смоченного хлороформом. Фильтр дважды промывают хлороформом по 5 мл (раствор 2). Хлороформ отгоняют на водяной бане до объема 1-2 мл, остаток хлороформа в колбе удаляют продуванием воздуха до полного исчезновения запаха растворителя. Сухой остаток растворяют в 15 мл 0,02 М хлористоводородной кислоты при подогревании на водяной бане, прибавляют 2 капли метилового красного спиртового раствора 0,1 % и 1 каплю метиленового синего спиртового раствора и избыток хлористоводородной кислоты оттитровывают 0,02 М раствором натрия гидроксида до появления зеленой окраски.
Содержание суммы алкалоидов в пересчете на гиосциамин в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = | (15 - V) · 0,005780 · 100 · 100 |
а · (100 - W) |
где:
0,005780 - количество алкалоидов в пересчете на гиосциамин, соответствующее 1 мл 0,02 М хлористоводородной кислоты, в граммах;
V - объем 0,02 М раствора натрия гидроксида, израсходованного на титрование, в миллилитрах;
а - навеска сырья, соответствующая отмеренному объему эфирного извлечения, в граммах;
W – влажность сырья, в процентах.
Содержание суммы алкалоидов в пересчете на гиосциамин должно быть не менее 0,3 %.
Примечание. В случае завышенного содержания суммы алкалоидов (в пересчете на гиосциамин в %) расчет количества лекарственного растительного сырья, необходимого для производства лекарственного препарата следует проводить по формуле, приведенной в ОФС «Лекарственное растительное сырье. Фармацевтические субстанции растительного происхождения».
Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья».
Хранение. В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».
