Человеческие анти-LeC антитела.

1, 1, 1, 1, 1

ФГБУН Институт биоорганической химии им. и РАН, Москва, Россия1.

E-mail: kira. *****@***com, nadine. *****@***com, *****@***ru

Ключевые слова: естественные антитела, гликаны, онкология, цитотоксичность антител

Выделены и охарактеризованы человеческие анти-LeC антитела, принадлежащие к естественным иммуноглобулинам, то есть таким, которые продуцируются B1 лимфоцитами и представлены преимущественно IgM изотипом [, 2013]. Эти антитела узнают Galв1-3GlcNAc (LeC), но не взаимодействуют с углеводными цепями общей структуры Galв1-3GlcNAcв1-3Galв1-4GlcNAc [Obukhova P., 2011], представленными на гликопротеинах здорового человека.

Для выделения антител была использована гаптен-специфическая аффинная хроматография. Специфичность антител подтверждали с помощью иммуноферментного анализа. Для ряда исследований антитела были биотинилированы. Для изучения анти-LeC антител были использованы гистологические чипы с нормальными и опухолевыми тканями различных органов, световая и флуоресцентная микроскопия монослойных клеточных культур и иммуноцитохимия. Проведен анализ связывания антител с опухолевыми клеточными линиями, такими как ZR-75-1, HS-578T и SKBR3 (РМЖ), А549 (рака лёгкого), НТ29 (рака кишечника), а также клеточная культура эмбриональных почек человека HEK293 и фибробластоподобные клетки эмбрионального лёгкого MRC-5V2. Изучены особенности распределения антител внутри опухолевых клеток. С помощью теста с красителем аламаровый синий [J. O’Brien, 2000] исследовано влияние антител на пролиферативную активность клеток. Жизнеспособность клеток при инкубации с антителами оценивали с помощью красителя трипановый синий и автоматического счетчика клеток Countess II Invitrogen.

Показано, что данные антитела связываются почти со всеми нормальными (здоровыми) тканями, окрашивая их внутриклеточно, в то время как нативные клетки опухолевых клеточных линий взаимодействовали как внутриклеточно, так и своей поверхностью. Клетки линий РМЖ связывали анти-LeC антитела только в том случае, если достигали высокой с плотности монослоя. Интересно, что присутствие свободного LeC дисахарида повышает, а не ингибирует уровень поверхностного связывания опухолевых клеток с антителами. Анти-LeC антитела вызывают угнетение пролиферации опухолевых клеток в культурах, что позволяет нам предполагать их цитотоксический эффект на опухоли.

Работа поддержана грантом Российского Научного Фонда #14-50-00131

Список литературы

1. , Естественные антитела к гликанам /Биохимия, 2013, том 78, вып. 7, с. 1008 - 1022. URL: DOI: 10.1134/S0006297913070109

2. Obukhova P,Piskarev V, Severov V, Pazynina G, Tuzikov A, Navakouski M, Shilova N, Bovin N., Profiling of serum antibodies with printed glycan array: room for data misinterpretation. // Glycoconj J. 2011 Dec;28(8-9).,P. 501-5. URL: doi: 10.1007/s10719-011-9355-0.

3. J. O’Brien, I. Wilson, T. Orton et al., Investigation of the Alamar Blue (resazurin) fluorescent dye for the assessment of mammalian cell cytotoxicity // Eur. J. Biochem. 2000., Vol. 267 (17). P. 5421-5426. URL: https://doi. org/10.1046/j.1432-1327.2000.01606.x