Родиолы экстракт жидкий ФС
Взамен ФС 42-2163-96
Родиолы экстракт жидкий, получаемый из корневищ и корней многолетнего дикорастущего или культивируемого травянистого растения родиолы розовой – Rhodiola rosea L., сем. толстянковых – Crassulaceae (ФС.2.5.0036.15), применяемый в качестве лекарственного препарата.
Для получения препарата необходимо:
Родиолы розовой корневищ и корней - 1000 г;
(ФС.2.5.0036.15)
Этанола (спирта этилового) 40 % - достаточное количество для
получения 1000 мл.
Описание. Жидкость от светло-коричневого до темно-коричневого цвета с красноватым оттенком с характерным запахом. В процессе хранения возможно образование осадка.
Подлинность.
Приготовление растворов.
Раствор стандартного образца (СО) розавина. Около 4,0 мг СО розавина растворяют в 10 мл спирта 96 % и перемешивают. Срок годности раствора не более 3 мес при хранении в хорошо укупоренной упаковке в прохладном, защищенном от света месте.
Раствор для детектирования. Смешивают последовательно: 0,5 мл анисового альдегида, 10 мл уксусной кислоты ледяной, 85 мл спирта 96 % и 5 мл серной кислоты концентрированной. Срок годности раствора не более 30 сут при хранении в хорошо укупоренной упаковке в прохладном, защищенном от света месте.
Раствор 1,2-нитрозонафтола спиртовой 1 %. 0,1 г 1,2-нитрозонафтола растворяют в 10 мл спирта 96 %. Срок годности раствора 7 суток хранении в хорошо укупоренной упаковке в прохладном, защищенном от света месте.
К 1 мл препарата прибавляют 9 мл спирта 40 % и перемешивают (испытуемый раствор).
На линию старта хроматографической пластинки со слоем силикагеля с флуоресцентным индикатором на алюминиевой подложке размером 10 Ч 15 см в виде полосы длиной 10 мм, шириной не более 3 мм наносят по 40 мкл (0,04 мл) испытуемого раствора и раствора СО розавина. Пластинку с нанесенной пробой сушат при комнатной температуре в течение 15 мин, помещают в хроматографическую камеру, предварительно насыщенную в течение 3 ч смесью растворителей хлороформ – метанол – вода (26 : 14: 3), и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80 - 90 % длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей и просматривают в УФ – свете при длине волны 254 нм.
На хроматограмме раствора СО розавина должна обнаруживаться зона адсорбции фиолетового цвета.
На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться зона адсорбции фиолетового цвета на уровне зоны адсорбции СО розавина;
допускается обнаружение дополнительных зон адсорбции.
Хроматограмму опрыскивают раствором для детектирования, выдерживают при температуре 100 - 105 °С в течение 2 - 3 мин и просматривают при дневном свете.
На хроматограмме раствора СО розавина должна обнаруживаться зона адсорбции коричневато-зеленого или зеленовато-серого цвета.
На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться зона адсорбции коричневато-зеленого или зеленовато-серого цвета на уровне зоны адсорбции СО розавина; ниже – зона адсорбции сине - или серо-коричневого цвета, выше - зона адсорбции коричневого или красно-коричневого цвета; допускается обнаружение дополнительных зон адсорбции.
Времена удерживания основных пиков на хроматограмме испытуемого раствора, приготовленного для количественного определения, должны соответствовать временам удерживания основных пиков на хроматограммах раствора СО розавина и раствора СО салидрозида.
Спирт. Не менее 34 %. В соответствии с требованиями ОФС «Определение спирта этилового в лекарственных средствах».
Метанол и 2-пропанол. В соответствии с требованиями ОФС «В соответствии с требованиями ОФС «Остаточные органические растворители».
Тяжелые металлы. Не более 0,01 %. В соответствии с требованиями ОФС «Экстракты».
Сухой остаток. Не менее 5 %. В соответствии с требованиями ОФС «Экстракты».
Извлекаемый объем. В соответствии с требованиями ОФС «Извлекаемый объем».
Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота», (категория 3Б).
Количественное определение. Гликозиды коричного спирта. Салидрозид.
Приготовление растворов.
Раствор СО розавина. Около 0,010 г (точная навеска) СО розавина растворяют в метаноле в мерной колбе вместимостью 25 мл, доводят объем раствора метанолом до метки и перемешивают (раствор А СО розавина).
10,0 мл раствора А СО розавина переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора метанолом до метки и перемешивают (раствор Б СО розавина). Срок годности не более 3 мес при хранении в прохладном, защищенном от света месте.
Раствор СО салидрозида. Около 0,010 г (точная навеска) СО салидрозида растворяют в метаноле в мерной колбе вместимостью 25 мл, доводят объем раствора метанолом до метки и перемешивают (раствор А СО салидрозида).
10,0 мл раствора А СО салидрозида переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора метанолом до метки и перемешивают (раствор Б СО салидрозида). Срок годности не более 3 мес при хранении в прохладном, защищенном от света месте.
Испытуемый раствор: предварительно профильтрованный через мембранный нейлоновый фильтр (размер пор 0,2 мкм) препарат.
Приготовление фосфатного буфера (pH 7,0).
1. 8,0 г натрия гидроксида растворяют в около 500 мл воды в мерной колбе вместимостью 1000 мл, полученный раствор доводят водой до метки и перемешивают (раствор натрия гидроксида 0,2 M).
Срок годности раствора 6 мес при хранении в хорошо укупоренной упаковке, в прохладном защищенном от света месте.
6,8 г калия фосфата однозамещенного растворяют в 500 мл воды в мерной колбе вместимостью 2000 мл, затем добавляют 130 мл раствора натрия гидроксида 0,2 M, добавляют еще 800 мл воды и перемешивают. Значение рН определяют потенциометрически. При необходимости добавляют раствор натрия гидроксида 0,2 М и доводят объем раствора водой до метки.Приготовленный раствор фильтруют под вакуумом через нейлоновый мембранный фильтр с размером пор не более 0,45 мкм.
Срок годности раствора 1 сутки.
Проверка пригодности хроматографической системы.
Хроматографическая система считается пригодной, если выполняются следующие условия:
- эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пикам СО салидрозида и СО розавина должна быть не менее 2000 и не менее 5000 теоретических тарелок соответственно;
- фактор асимметрии (Т) для пиков салидрозида и розавина должен быть не менее 0,8 и не более 1,5.
Хроматографические условия
Колонка | 250 Ч 4,0 мм, эндкеппированный октадецилсилил (С18) силикагель для хроматографии, 5 мкм | |
Предколонка | 20 Ч 4 мм, эндкеппированный октадецилсилил (С18) силикагель для хроматографии, 5 мкм | |
Подвижная фаза | А - фосфатный буфер (pH 7,0); В - ацетонитрил | |
Способ элюирования | градиент | |
Время | А, об. % | В, об. % |
0 | 89 | 11 |
10 | 89 | 11 |
30 | 70 | 30 |
35 | 20 | 80 |
45 | 20 | 80 |
50 | 89 | 11 |
70 | 89 | 11 |
Скорость подвижной фазы, мл/мин | 1,0 | |
Температура колонки, °С | 50 ± 1 | |
Детектор | диодная матрица или спектрофотометрический | |
250 нм (для определение суммы гликозидов коричного спирта в пересчете на розавин); 219 нм (определение салидрозида) | ||
Объем вводимой пробы, мкл | 10 | |
Время хроматографирования, мин | 35 |
На хроматограмме раствора А испытуемого раствора (длина волны УФ-детектора 250 нм) в области пика, соответствующего по времени удерживания СО розавина, выходят не менее 3 пиков других гликозидов коричного спирта, из которых 1 слева и 2 справа от пика розавина.
Хроматографируют последовательно не менее 5 раз растворы СО салидрозида (раствор А СО салидрозида) и СО розавина (раствор А СО розавина) и вычисляют среднее значение площади пика для каждого СО.
Испытуемый раствор хроматографируют не менее 3 раз.
Содержание гликозидов коричного спирта в пересчете на розавин в препарате в процентах (Х) вычисляют по формуле:
где:
S – площадь пиков гликозидов коричного спирта на хроматограмме испытуемого раствора;
Sо – площадь основного пика на хроматограмме раствора Б СО розавина;
ао – навеска СО розавина, г;
Р – содержание основного вещества в СО розавина, %;
10, 25, 50 – разведения, мл;
V – объем препарата, взятый для анализа, мл.
Содержание суммы гликозидов коричного спирта в пересчете на розавин в препарате должно быть не менее 0,1 %.
Содержание салидрозида в препарате в процентах (Х) вычисляют по формуле:
где:
S – площадь пика салидрозида на хроматограмме испытуемого раствора;
Sо – площадь пика на хроматограмме раствора Б СО салидрозида;
ао – навеска СО салидрозида, г;
Р – содержание основного вещества в СО салидрозида, %;
10, 25, 50 – разведения, мл;
V – объем препарата, взятый для анализа, мл.
Содержание суммы гликозидов коричного спирта в пересчете на розавин - не менее 0,1 %, салидрозида - от 0,5 % до 0,8 %.
Хранение. В защищенном от света месте при температуре от 15 до
25 °С.
