Тест-система «АДЕНОВИР»
Тест-система «АДЕНОВИР» (test-system «ADENOVIR») для выявления и дифференциации ДНК аденовируса плотоядных первого типа (Canine adenovirus I), вызывающего гепатит плотоядных, и аденовируса плотоядных второго типа (Canine adenovirus II), вызывающего аденовироз собак, в биологическом материале методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).
ОТБОР МАТЕРИАЛА ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ
- Выявление ДНК аденовирусов плотоядных первого типа, вызывающих гепатит плотоядных, и аденовирусов плотоядных второго типа, вызывающих аденовироз собак, в смывах с конъюнктивы (в первую неделю после появления конъюнктивита), выделениях из носа (в первую неделю после их появления),фекалиях (при наличии расстройства ЖКТ) и сыворотке крови (при подозрении на гепатит собак).
- При отборе образцов материала, а также при подготовке проб для исследования необходимо соблюдать меры, предупреждающие обсеменение объектов внешней среды, руководствуясь при этом действующими правилами и инструкциями. Материал от каждого животного отбирают отдельными инструментами.
- Для взятия материала со слизистой конъюнктивы и носовой полости рекомендуется использовать стерильные зонды с ватными тампонами и стерильные пробирки объемом 1,5 мл, содержащие 300 мкл стерильного физиологического раствора. Зонд смочить в жидкости и отжать влагу, прислоняя ватный наконечник к внутренней стенке пробирки. Оттянув веко животного, провести зондом по слизистой века по направлению к носу, обмывая глазное яблоко. Тщательно прополоскать зонд в пробирке и аккуратно отжать лишнюю влагу, прижимая наконечник к внутренней стенке пробирки. Процедуру повторить с каждым веком обоих глаз, собирая материал в одну и ту же пробирку. От зонда отломить часть с ватным наконечником и поместить его в ту же пробирку, плотно закрыв крышку. Аналогично проводится получение смывов со слизистой носа. Фекалии животных при наличии диареи собирают в стерильный пластиковый контейнер в количестве 5 - 20 г. Для получения сыворотки проводят забор крови в пробирку без антикоагулянта. Пробирки с кровью отстаивают при комнатной температуре в течение 30 мин. до полного образования сгустка. Затем центрифугируют при 800-1600 g в течение 10 минут при комнатной температуре. Переносят сыворотку в количестве не менее 300 мкл отдельными наконечниками с аэрозольным барьером в стерильные пробирки объемом 1,5 мл. Материалы доставляют в лабораторию в день взятия или на следующий день, сохраняя при температуре от 2 до 8 °С. Допускается хранение материала при температуре не выше минус 16 °С в течение 30 дней.
Тест система «КАЛИЦИВИР»
Тест система «КАЛИЦИВИР» для выявления к ДНК Feline calicivirus методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).
ОТБОР МАТЕРИАЛА ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ
- Диагностики возбудителя калицивироза кошек путем выявления РНК вируса Feline calicivirus в конъюнктивальных и носоглоточных смывах и соскобов из язв ротовой полости методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). При отборе образцов материала, а также при подготовке проб для исследования необходимо соблюдать меры, предупреждающие заражение людей и обсеменение объектов внешней среды. Материал от каждого животного отбирают отдельными инструментами. Для исследования используют следующий клинический материал:
- соскобы из язв ротовой полости;
- смывы со слизистой конъюнктивы глаз;
- смывы со слизистой носа и ротоглотки.
- Для приготовления соскобов из язв ротовой полости, смывов с конъюнктивы, слизистой носа и ротоглотки животных рекомендуется использовать стерильные зонды с ватными тампонами и стерильные пробирки объемом 1,5 мл, содержащие 300 мкл стерильного физиологического раствора. При необходимости вместо зондов и пробирок с физраствором можно использовать подручные средства: спичку с предварительно срезанной с нее серной головкой, с одного конца обмотанную кусочком ваты размером с горошину, и чистые флаконы с пробкой типа пенициллиновых, наполненные свежей холодной кипяченой водой до уровня 0,5 см от дна флакона. Методика получения смывов:
а. зонд смочить в жидкости и отжать влагу, прислоняя ватный наконечник к внутренней стенке пробирки.
б. оттянув веко животного, провести зондом по слизистые века по направлению к носу, обмывая глазное яблоко.
в. тщательно прополоскать зонд в пробирке.
г. провести процедуры а. – в. последовательно с каждым веком обоих глаз, собирая материал в одну и ту же пробирку.
д. от зонда отломить часть с ватным наконечником (палочка должна быть полностью погружена в пробирку) и поместить его в ту же пробирку, плотно закрыв крышку.
Аналогично проводится получение смывов со слизистой ротоглотки.
- Материал доставляют в лабораторию в день взятия, сохраняя при температуре от 2 до 8°С. При необходимости хранения материал замораживать при температуре не выше -16°С. Допускается только однократное замораживание-оттаивание материала.
Тест-система «КОРОНАВИР»
Тест-система «КОРОНАВИР» для диагностики инфекционного перитонита кошек и коронавирусного энтерита собак путем выявления РНК коронавируса в плазме крови, асцитной жидкости и фекалиях методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)
ОТБОР МАТЕРИАЛА ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ
- Диагностика инфекционного перитонита кошек и коронавирусного энтерита собак путем выявления РНК коронавируса в плазме крови, асцитной жидкости и фекалиях методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Обнаружение коронавирусов в фекалиях кошек свидетельствует о носительстве коронавирусов в кишечнике этих животных. При отборе образцов материала, а также при подготовке проб для исследования необходимо соблюдать меры, предупреждающие заражение людей и обсеменение объектов внешней среды. Материал от каждого животного отбирают отдельными инструментами. Для исследования на инфекционный перитонит кошек используют следующий клинический материал:
- плазма крови в объеме не менее 300 - 500 мкл;
- асцитная жидкость в объеме не менее 300 - 500 мкл.
- Для исследования на энтерит у собак и носительство коронавирусов используют следующий клинический материал:
- фекалии 5-10 г отбирают в стерильные контейнеры.
- Материал доставляют в лабораторию в день взятия или на следующий день, сохраняя при температуре от 2 до 8°С.
«МИК-КОМ»
Тест-система «МИК-КОМ» для выявления ДНК микроорганизмов рода Mycoplasma в биологическом материале от животных, больной и павшей птицы, эмбрионах, а также культурах клеток и сыворотках (обнаружение контаминантов) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).
ОТБОР МАТЕРИАЛА ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ
- Тест-система предназначена для выявления ДНК микроорганизмов рода Mycoplasma в биологическом материале от животных, больной и павшей птицы, эмбрионах, а также культурах клеток и сыворотках (обнаружение контаминантов) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). При отборе образцов материала, а также при подготовке проб для исследования необходимо соблюдать меры, предупреждающие обсеменение объектов внешней среды, руководствуясь при этом действующими правилами и инструкциями. Материал от каждого животного отбирают отдельными инструментами. Для исследования используют:
- назальные, конъюнктивальные смывы, истечения,
- синовиальная жидкость суставов,
- желток, аллантоисную жидкость эмбрионов,
- паренхиматозные органы, трахею, воздухоносные мешки павшей птицы,
- цельную кровь,
- сыворотки (лечебные), культуры клеток (оптимальная концентрация 106клеток в мл),
- сперма в объеме не менее 2 мл.
- Кровь забирают в пробирку с 6% ЭДТА из расчета 20:1. Из тканей и органов вырезают кусочки размером 1х1х1 см (при невозможности толщина кусочков может быть меньше). Материалы доставляют в лабораторию в день взятия или на следующий день, сохраняя при температуре от 2°С до 8 °С. Допускается хранение материала при температуре не выше минус 16 °С в течение 30 дней. Пробы цельной крови, консервированной трилоном Б (ЭДТА), лечебные сыворотки и культуры клеток используют для экстракции ДНК без предварительной подготовки. Пробы исследуемых жидкостей, кроме крови, в объеме 1,5 мл (при необходимости объем проб доводят до требуемого путем добавления физиологического раствора) центрифугируют при 10 тыс об/мин в течение 5 мин. Супернатант осторожно отбирают, оставив над осадком примерно 0,2 мл жидкости. Если осадок практически не виден, то в эту же пробирку вносят еще 1,5 мл материала и повторяют центрифугирование. Осадок суспендируют в оставшейся надосадочной жидкости переносят в пробирку типа “Эппендорф” и 100 мкл суспензии используют для экстракции ДНК. Кусочки паренхиматозных органов, трахеи, воздухоносных мешков размером 1х1х1 см тщательно растирают в отдельных стеклянных гомогенизаторах, фарфоровых ступках и т. п., добавляют по 1 мл (т. е. примерно равный объем) физиологического раствора и тщательно перемешивают. Смесь отстаивают при комнатной температуре в течение 30 мин, после чего верхнюю фазу переносят в пробирки типа «Эппендорф» и 100 мкл ее используют для экстракции ДНК.
«ПАРВОВИР»
Тест-система «ПАРВОВИР» для выявления ДНК парвовирусов (Canineparvovirus, Felinepanleukopeniavirus, Minkenteritisvirus), вызывающих парвовирусный энтерит собак и норок и панлейкопению кошек, в мазках со слизистой прямой кишки и фекалиях восприимчивых животных методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)
- Тест-система предназначена для выявления ДНК парвовирусов (Canineparvovirus, Felinepanleukopeniavirus, Minkenteritisvirus), вызывающих парвовирусный энтерит собак и норок и панлейкопению кошек, в мазках со слизистой прямой кишки и фекалиях восприимчивых животных методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Материал для исследований должен отбираться от животных не ранее чем через 21 день после иммунизации их живыми вакцинами.
ОТБОР МАТЕРИАЛА ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ
- При отборе образцов материала, а также при подготовке проб для исследования необходимо соблюдать меры, предупреждающие обсеменение объектов внешней среды, руководствуясь при этом действующими правилами и инструкциями. Материал от каждого животного отбирают отдельными инструментами. Для исследования используют:
- фекалии отбирают в стерильные контейнеры в количестве 5-10 г.
- мазки со слизистой прямой кишки берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл стерильного физиологического раствора или раствора фосфатного буфера. Конец зонда отламывают, с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают.
- Материалы доставляют в лабораторию в течение суток, сохраняя температуре от 2 °С до 8°С. Допускается хранение материала при температуре не выше -16 °С в течение 7 суток, при температуре не выше -68 °С – в течение длительного времени. Допускается лишь однократное замораживание-оттаивание материала.
«ВИК»
«ВИК» тест система для выявления ДНК провируса иммунодефицита кошек методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).
ОТБОР МАТЕРИАЛА ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ
- При отборе образцов материала, а также при подготовке проб для исследования необходимо соблюдать меры, предупреждающие обсеменение объектов внешней среды, руководствуясь при этом действующими правилами и инструкциями по данному вопросу. Материал от каждого животного отбирают отдельными инструментами. Для исследования используют следующий клинический материал:
- Цельную кровь для исследования отбирают в объеме 5 мл в стерильные пробирки с 3 % раствором ЭДТА из расчета 10:1 (или с цитратом Na в стандартной концентрации). Желательно использовать одноразовые системы взятия крови. Закрытую пробирку с кровью несколько раз переворачивают.
- Материал доставляют в лабораторию в день взятия или на следующий день, сохраняя при температуре от 2 до 8°С. Допускается хранение материала при температуре не выше -16°С в течение 7 дней, при температуре не выше минус 68 °С в течение длительного времени. Возможно лишь однократное замораживание-оттаивание материала.
«РИНОВИР»
- Тест-система «РИНОВИР» предназначена для выявления ДНК вируса ринотрахеита кошек (Feline herpesvirus) в конъюнктивальных и носоглоточных смывах восприимчивых животных методом ПЦР. Материал для исследований должен отбираться от животных не ранее, чем через 21 день после иммунизации их живыми вакцинами.
ОТБОР МАТЕРИАЛА ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ
- При отборе образцов материала, а также при подготовке проб для исследования необходимо соблюдать меры, предупреждающие обсеменение объектов внешней среды, руководствуясь при этом действующими правилами и инструкциями. Материал от каждого животного отбирают отдельным инструментом. Для исследования используют смывы с конъюнктивы глаз и поврежденной слизистой носоглотки, а также с изъязвлений слизистой ротовой полости. От одного животного берется один общий образец смывов со всех поврежденных слизистых. Для взятия материала используют стерильный зонд или аппликатор, который вместе с материалом помещают в пробирку типа «Эппендорф» с 300 мкл стерильного физиологического раствора. Оттянув веко животного, провести зондом по слизистой века по направлению к носу, обмывая глазное яблоко. Тщательно прополоскать зонд в пробирке и аккуратно отжать лишнюю влагу, прижимая наконечник к внутренней стенке пробирки. Процедуру повторить с каждым веком обоих глаз. Поместить зонд в пробирку. Материал со слизистых носоглотки и с изъязвлений ротовой полости собирают тем же образом. Сначала у животного собирают материал из глаз, затем, при наличии поражений, из полости рта и далее из носоглотки в одну и ту же пробирку. Материалы доставляют в лабораторию в день взятия или на следующий день, сохраняя при температуре от 2 до 8°С. Допускается хранение материала при t° не выше -16 °С в течение 30 дней.
«ПОЛИЧУМ»
Тест-система «ПОЛИЧУМ» предназначена для выявления вируса чумы плотоядных (Canine Distemper virus) методом ПЦР в мазках и смывах с конъюнктивы глаз, со слизистых носоглотки, прямой кишки, цельной крови, плазме, сыворотке крови и фекалиях восприимчивых животных.
ОТБОР МАТЕРИАЛА ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ
- При отборе образцов материала, а также при подготовке проб для исследования необходимо соблюдать меры, предупреждающие заражение людей и обсеменение объектов внешней среды. Материал от каждого животного отбирают отдельными инструментами.
Для исследования используют следующий клинический материал:
- мазки или смывы (в малом объеме - не более 300 мкл жидкости) конъюнктивы глаз,
- мазки со слизистой носа,
- мазки со слизистой прямой кишки,
- цельная кровь, плазма крови, сыворотка крови,
- фекалии животных.
- При длительности заболевания до 5 дней для исследования рекомендуется использовать мазки со слизистых, учитывая клинические симптомы (наличие выделений из носа или наличие диареи). При длительности заболевания более 5 дней рекомендуется одновременное исследование мазков со слизистых, цельной крови (плазмы или сыворотки крови). Кровь для исследования отбирают в объеме 5 мл в стерильные пробирки с 3% раствором ЭДТА из расчета 10:1 (или с цитратом Na в стандартной концентрации). Желательно использовать одноразовые системы взятия крови. Закрытую пробирку с кровью несколько раз переворачивают. Для получения сыворотки забор крови проводят в пробирку без антикоагулянта. Мазки со слизистой носа и прямой кишки берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами. После забора материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл стерильного физиологического раствора или раствора фосфатного буфера. Конец зонда отламывают или отрезают, с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают. Для приготовления смывов с конъюнктивы использовать стерильные зонды с ватными тампонами и стерильные пробирки объемом 1,5 мл, содержащие 500 мкл стерильного физиологического раствора или раствора фосфатного буфера.
Методика получения смывов:
а) зонд смочить в жидкости и отжать влагу, прислоняя ватный наконечник к внутренней стенке пробирки.
б) оттянув веко животного, провести зондом по слизистой века по направлению к носу, обмывая глазное яблоко.
в) тщательно прополоскать зонд в пробирке.
г) провести процедуры а.-в. последовательно с каждым веком обоих глаз, собирая материал в одну и ту же пробирку.
д) от зонда отломить часть с ватным наконечником (палочка должна быть полностью погружена в пробирку) и поместить его в ту же пробирку, плотно закрыв крышку.
- Материал доставляют в лабораторию в день взятия, сохраняя при температуре от 2 до 8°С. Допускается хранение вышеперечисленного материала при температуре не выше -16 °С в течение 1 нед, при температуре не выше -68°С длительно. Допускается только однократное размораживание материала.
«ХЛА-КОМ»
Тест-система «ХЛА-КОМ» для выявления ДНК микроорганизмов семейства Chlamydiaceae в биологическом материале от животных и птиц методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).
ОТБОР МАТЕРИАЛА ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ
- При отборе образцов материала, а также при подготовке проб для исследования необходимо соблюдать меры, предупреждающие обсеменение объектов внешней среды, руководствуясь при этом действующими правилами и инструкциями. Материал от каждого животного отбирают отдельными инструментами. Для исследования используют:
-соскобы слизистых оболочек (конъюнктивы, урогенитального тракта, а у птиц - клоаки),
-помет птиц,
-паренхиматозные органы павших или вынужденно убитых животных и птиц, кусочки плодовых оболочек, паренхиматозные органы и перевязанный с двух сторон сычуг аборт-плодов,
-сперму замороженную (или пробы эякулята),
-мочу от производителей, подозрительных по заболеванию.
- Жидкости для исследования отбирают в объеме 20 мл. Из тканей и органов вырезают кусочки размером 1x1x1 см (при невозможности толщина кусочков может быть меньше). Материалы доставляют в лабораторию в день взятия или на следующий день, сохраняя при температуре от 2°С до 8 °С. Допускается хранение материала при температуре не выше -16°С в течение 30 дней. Пробы мочи нужно доставлять в тот же день. Пробы паренхиматозных органов, плодовых оболочек размером 1х1х1 см тщательно растирают в отдельных стеклянных гомогенизаторах, фарфоровых ступках и т. п., добавляют по 1 мл (т. е. примерно равный объем) физиологического раствора и тщательно перемешивают. Смесь отстаивают при комнатной температуре в течение 30 мин, после чего верхнюю фазу переносят в пробирки типа “Эппендорф” и 100 мкл ее используют для экстракции ДНК. Сперму в объеме не менее 0,5 мл Соскоб слизистых оболочек разводят в 0,5-1,0 мл физиологического раствора, осаждают на микроцентрифуге при 11-12 тыс об/мин в течение 5-10 мин. Надосадочную жидкость удаляют, а осадок ресуспендируют в 100 мкл физиологического раствора и используют для экстракции ДНК. Если слизь очень густая (не всасывается в отверстие наконечника дозатора), то к пробе добавляют 1-2 мл раствора Р-меркаптоэтанола (0,1М), перемешивают на вортексе, выдерживают при комнатной температуре 15-20 мин, периодически встряхивая на вортексе, и центрифугируют в вышеуказанном режиме. Осадок ресуспендируют в 100 мкл физиологического раствора и используют для экстракции ДНК. Пробы помета птиц массой 0,3-0,8 г тщательно суспендируют в 5 мл физиологического раствора (т. е. готовят 5-10 % суспензию). Суспензию центрифугируют на низкооборотной центрифуге при 1,5 тыс об/мин в течение 5 мин и 100 мкл надосадочной жидкости используют для экстракции ДНК.
