Изучение специфичности гемагглютинина вируса гриппа с помощью гликочипа: новый способ детекции.

Изучение специфичности гемагглютинина вируса гриппа с помощью гликочипа: новый способ детекции.

a, b, c, b, b, d, d, b

a Московский Государственный Университет имени , Москва, Российская Федерация.

b ФГБУН Институт биоорганической химии им. академиков и Российской академии наук, Москва, Российская Федерация.

c , Москва, Российская Федерация.

d ФГБУ "НИИ гриппа им. " Минздрава России, Санкт-Петербург, Российская Федерация.

E-mail: ermolaeva. *****@***rua.

Ключевые слова

вирус гриппа, гемагглютинин, гликочип

Введение

Известно, что вирус гриппа (ВГ) инициирует инфекцию путем взаимодействия углевод-связывающего белка гемагглютинина (HA) с сиалосодержащими клеточными рецепторами на поверхности клеток-хозяев. Важным элементом адаптации к новому хозяину является подстраивание НА под новые рецепторы. Установлено [Rogers GN, Pritchett TJ, 1983], что ВГ птиц предпочтительно связываются с б2-3-связанными сиаловыми кислотами на рецепторах эпителиальных клеток кишечника. При переходе к человеку как новому "хозяину", НА изменяет специфичность на б2-6. Чтобы вовремя отслеживать мутации птичьего гриппа при переходе к человеку, необходимо контролировать специфичность гемагглютинина вируса гриппа, а также выявлять наиболее аффинные лиганды НА. Наиболее информативным и чувствительным методом изучения рецептор-связывающих свойств ВГ является твердофазный планшетный анализ [Gambaryan A, Matrosovich MN, 1992]. Однако, данный метод ограничен тем, что одновременное исследование ВГ возможно лишь для небольшого количества лигандов. Кроме того, необходимо повышение чувствительности анализа, для того, чтобы анализировать нативные вирусы, не имеющие пассажной истории.

Методы исследования

Для анализа специфичности НА вируса гриппа использовали гликочип, содержащий более 400 гликанов. Исследовали вирусы серой чайки H6N1 (Сарма/51с/2006г. (коллекция НИИ гриппа)) и домашней птицы H7N1 (FPV/Rostoc(Egg)/2007г.). Для детекции вируса связавшегося с лигандами чипа, использовали полиакриламидный конъюгат, несущий 3’-N-ацетил-сиалиллактозамин и биотин, с последующей инкубацией с флуоресцентно меченым стрептавидином. Сигналы считывали с помощью флуоресцентного ридера.

Основные результаты и обсуждение

Оказалось, что с помощью полиакриламидного гликоконъюгата, несущего 3'-SLN, можно детектировать птичьи вирусы на уровне 16 HAU, что на 3 порядка лучше описанных в литературе способов детекции НА на чипе. Была подтверждена полученная ранее информация о том, что вирус серой чайки H6N1 способен связываться как с б2-3, так и б2-6-гликанами, в то время как вирус H7N1 - исключительно с б2-3-гликанами. Кроме того, НА вируса серой чайки H6N1 связывался с б2-8-сиалозидами и Neu5Gcα2-3Galβ1-4Glc.

Заключение

Предложенный способ: 1) позволяет изучать специфичность НА на уровне нативных вирусов; 2) делать это на малом количестве материала; 3) выявлять новые лиганды НА вируса гриппа.

Список литературы

1. Rogers GN, Pritchett TJ, Lane JL, Paulson JC. Differential sensitivity of human, avian, and equine influenza A viruses to a glycoprotein inhibitor of infection: selection of receptor specific variants. // Virology. 1983. V.131, I.2. P. 394-408.

2. Gambaryan A, Matrosovich MN. A solid-phase enzyme-linked assay for influenza virus receptor-binding activity. // Journal of Virology Methods. 1992. V. 39. I. 1-2. P. 111-23.