Основа среды для патогенных нейссерий

Thayer Martin Medium Base Основа среды для патогенных нейссерий

M413

Этот агар с добавками используют в качестве селективной среды для выделения гонококков из патологического материала.

Состав**:

Ингредиенты	грамм/литр
Пептон специальный Крахмал Натрия хлорид Агар-агар Конечное значение рН (при 25єС) 7,0 ± 0,2	23,00 1,00 5,00 13,00

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 21,0 г порошка в 450 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121єС) в течение 15 мин. Остудить среду до 45єС и асептично добавить 50 мл стерильной лизированной крови,  растворенное в воде содержимое 1 пузырька с ростовой добавкой (FD025) и добавку V. N.C. (FD023)  или добавку V. C.N. T. (FD024). Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Если будет использован гемоглобин (FD022), размешать 21,0 г порошка среды в 250 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Приготовить 250 мл 2%-ного раствора гемоглобина. Стерилизовать обе части отдельно автоклавированием при 1,1 атм (121єС) в течение 15 мин. Остудить до 45єС, смешать части и асептично добавить селективные добавки, как описано выше.

Принцип и оценка результата:

Вначале Carpenter и Morton предложили среду для выделения гонококков в течение 24 ч (1). Позже было показано преимущество среды с добавлением гемоглобина и дрожжевого концентрата для выделения гонококков (2). Соответственно данная среда была разработана  (3, 4) для первичного выделения Neisseria meningitidis и Neisseria gonorrhoeae из материала, содержащего смешанную микрофлору (из глотки, влагалища, прямой кишки, уретры).  Для придания селективных свойств в среду добавляют ванкомицин, колистин и нистатин (4), и дополнительно триметоприм (5).

Специальный пептон обеспечивает среду питательными веществами, крахмал нейтрализует токсические жирные кислоты, если они присутствуют в агаре. Гемоглобин является источником фактора Х, а фактор V (НАД) вносят с ростовой добавкой, которая содержит также витамины, аминокислоты, коферменты и другие вещества, стимулирующие рост нейссерий. Ванкомицин и колистин подавляют рост грамположительных и грамотрицательных бактерий, соответственно (6). Нистатин подавляет рост грибов. На этой среде может подавляться рост гемофильных палочек. При посеве материала из ротоглотки на ней могут вырасти некоторые штаммы Capnocytophaga.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,3%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Основа среды имеет желтую окраску, прозрачна или слегка опалесцирует. После добавления гемоглобина и специальных добавок среда приобретает шоколадный цвет, непрозрачна, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25єС водный раствор (4,2% вес/об) имеет рН 7,0 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 18-48 ч при 35єС.

Штаммы микроорганизмов (АТСС) Neisseria meningitidis (13090) Neisseria gonorrhoeae (19424) Escherichia coli (25922) Proteus mirabilis (25933)

Рост Хороший или обильный Хороший или обильный Подавляется Подавляется

Ссылки:

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25єС. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8єС.