Наборы для ПЦР-диагностики инфекций экспресс-детектированием с помощью тест-полоски с ДНК-зондами
Молекулярные методы используются в качестве более быстрой альтернативы традиционным методам ввиду высокой чувствительности и скорости анализа. Часто в ПЦР-наборах используют дорогостоящие или недостаточно чувствительные системы детекции.
Наборы Speed-Oligo (Vircell, Испания) используют ПЦР с последующей детекцией ампликонов на стрипе, обеспечивая быстрое, высокочувствительное и специфическое обнаружение патогенов. Благодаря двойной гибридизации продуктов амплификации увеличиваются специфичность и чувствительность их детекции.
Порядок работы с набором
В зависимости от принятых в лаборатории автоматизированной или ручных методик пробоподготовки и модели циклера, выделение ДНК занимает от 20 мин до 1 часа, амплификация - до 1,5 час, а для детекции результатов на стрипе требуется всего 5-10 мин. Реакционная смесь для ПЦР поставляется в лиофилизованном виде, что облегчает транспортировку и хранение.
Процедура включает три этапа:
1.Экстракция ДНК из исследуемого материала (с помощью коммерчески доступных наборов, приобретаемых лабораторией),
2.Специфическая амплификация;
3.Детекция ампликонов, реагенты которые входят в состав тест-набора. Тест включает внутренний контроль на отсутствие ингибиторов и правильную сборку смеси для амплификации.
Для детекции используется стрип с нанесёнными ДНК-зондами. По завершении амплификации, контрольный и исследуемые ампликоны денатурируют. Продукты ПЦР взаимодействуют с комплементарными олигонуклеотидами, конъюгированными с частицами коллоидного золота на стрипе. Этот комплекс перемещается по мембране стрипа до зон с нанесёнными зондами, специфичными к контрольным и исследуемым ампликонам, где, при наличии комплементарности, происходит вторая гибридизация. Избыток конъюгата с коллоидным золотом гибридизуется в отдельной полосе (контроль конъюгата, КК). При наличии гибридизации на мембране появляется полоса красного цвета.
Этот метод более чувствительнее и специфичнее чем традиционная ПЦР. Двойная гибридизация дискриминирует продукты специфической и неспецифической амплификации. В качестве исследуемого материала используются клинические образцы и образцы культуры (мультиплексный анализ
микобактерий).
Интерпретация результатов:
Полоса контроля конъюгата: должна быть окрашена всегда и это свидетельствует о том, что олигонуклеотидный конъюгат с коллоидным золотом стабилен и гибридизируется в соответствии с заявленными условиями, а гибридизационный раствор сохраняет необходимые характеристики.
Полоса контрольного ампликона (контроль амплификации): отсутствие красной полосы в этой зоне свидетельствует о присутствии в образце ингибиторов ПЦР. В этом случае необходимо повторить анализ с вновь отобранным образцом. Однако отсутствие полосы контрольного ампликона при наличии сильного положительного специфического результата не говорит об недостоверности анализа – имеет место конкуренция матричных ДНК за фермент.
Полоса специфического ампликона (ПСА): наличие красной окраски этой зоны свидетельствует о наличии в исследуемом образце искомого патогенна, результат анализа - положительный.
Несмотря на появление и широкое распространение антибактериальных средств и наличие вакцин против некоторых возбудителей, острые бактериальные менингиты остаются одной из серьёзных причин смертности и нейрологических осложнений. Они остаются в списке десяти главных причин детской смертности в развитых странах. В своё время тремя главными возбудителями менингитов были Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis и Streptococcus pneumoniae.
Быстрая и точная диагностика имеет важное значение для выбора лечения и помогает снизить смертность и остановить развитие долгосрочных нейрологических поражений. Выделение культуры рассматривается в качестве золотого стандарта диагностики бакменингитов. Однако, этот метод требует больших затрат времени (идентификация патогена обычно занимает 1-2 дня), наличия жизнеспособных микроорганизмов для культивирования, а на чувствительность напрямую влияет начало антибиотикотерапии. Латексно-агглютинационный тест проводится быстрее, но недостаток чувствительности ограничивает его клиническое использование.
Набор бактериальные менингиты Speed-Oligo использует ПЦР с последующей детекцией ампликонов на стрипе, обеспечивая быстрое, высокочувствительное и специфическое обнаружение: Haemophilus influenzae, Neisseria meningitidis и Streptococcus pneumoniae в образцах спинномозговой жидкости.
Рутинный пренатальный скрининг на стрептококковые инфекции (GBS; Streptococcus agalactiae) приводит к снижению количества заболевших. Однако, они остаются ведущей причиной неонатальной смертности. Стрептококковые инфекции регистрируются в самом раннем возрасте – около 80% детей заболевают в течение первых дней жизни. Инфекция характеризуется сепсисом и пневмонией. Инфекционные заболевания с отложенным началом возникают у детей в возрасте от 1 недели до трёх месяцев и протекают с развитием менингита и сепсиса. Новорожденные с ранней формой заболевания получают возбудителя интранатально от матерей. Предотвратить заболевание можно путём интранатальной профилактики антибиотиками. У женщин в предродовой и послеродовой период стрептококковая инфекция вызывает клиническую картину в диапазоне от сглаженных проявлений инфекции мочевыводящих путей до угрожающих жизни сепсиса и менингита. Заболевания могут наблюдаться у взрослых пациентов с ослабленным иммунным статусом.
При скрининге беременных, детекция стрептококков имеет первостепенное значение. Женщины с положительными результатами пренатального скрининга являются кандидатами на интранатальную антибиотическую профилактику.
Быстрый метод детекции важен для определения группы риска среди детей, рождённых матерями с неопределённым инфекционным статусом. Выделение культуры имеет ограничения по времени анализа, так как требует не менее 36 часов. Детекция антигенов в целом показывает результаты низкой точности.
Вместо этих методов для высокочувствительного обнаружения микроорганизма можно использовать ПЦР. Тест Speed-Oligo на стрептококковую инфекцию обеспечивает быстрое, высокочувствительное и специфическое обнаружение S. agalactiae в мазках из влагалища и аноректальной области. Образцы для неонатальных исследований берут с поверхности тела перед первым купанием, используют также мазки из глотки, задних отверстий полости носа, внешних слуховых проходов, ануса или пупка, кровь и спинномозговую жидкость.
Комбинированный тест на бактериальные пневмонии Speed-Oligo использует ПЦР с последующей детекцией ампликонов на стрипе, обеспечивая быстрое, высокочувствительное и специфическое обнаружение Chlamydophila pneumoniae, Mycoplasma pneumoniae и Legionella pneumophila в клинических образцах.
Для анализа можно использовать мазки из носоглотки, выделения из носа и глотки, мокроту, стимулированную мокроту, смывы из бронхов, ткани, инфицированные клетки или культуры.
«Vircell» предлагает также наборы для независимой детекции этих возбудителей.
Микобактерии – одна из групп патогенов, имеющих важное клиническое значение. Около трети населения Земли инфицировано бациллами туберкулёза. С практической точки зрения в пределах рода микобактерий можно выделить 3 группы:
1) комплекс возбудителей туберкулёза, включающий виды M. tuberculosis, M. bovis (включая BCG), M. africanum, M. microti;
2) M. leprae – возбудитель проказы;
3) прочие менее патогенные возбудители (часто оппортунистических инфекций или сапрофитные), дающие нетуберкулёзную симптоматику.
M. tuberculosis complex
Естественным резервуаром для M. tuberculosis является человек, M. bovis - крупный рогатый скот. Туберкулёз – хроническое гранулематозное заболевание, поражающее, как правило, лёгкие, но может локализоваться и в других частях тела или быть диссеминированным.
M. avium-intracellulare complex
Широко распространённый в природе вид микобактерий. Встречается, главным образом, у пациентов с пониженным иммунным статусом или больных СПИД, поражая локализовано или рассеянно: лёгкие, желудочно-кишечный тракт или лимфоузлы.
M. Scrofulaceum
Является возбудителем лимфаденита у детей.
M. Kansasii
Вызывает у человека хроническое лёгочное заболевание, напоминающее туберкулёз. Диссеминированная инфекция встречается у пациентов с пониженным иммунным статусом.
M. abscessus
Может быть возбудителем хронической лёгочной инфекции, колонизировать хирургические раны и место ввода катетеров. Диссеминированная инфекция встречается у пациентов с пониженным иммунным статусом.
M. chelonae
Патоген с высокой резистентностью, часто высевается у пациентов с пониженным иммунным статусом.
M. fortuitum
Может колонизировать хирургические раны и места ввода катетеров, встречается у больных остеомиелитом и целлюлитом.
M. gordonae
Обычно выявляется в качестве контаминанта микробиологических лабораторий, хотя иногда является причиной патологий у пациентов с пониженным иммунным статусом. Тест на обнаружение микобактерий Speed-Oligo использует ПЦР с последующей детекцией ампликонов на стрипе, обеспечивая быстрое, высокочувствительное и специфическое обнаружение рода Mycobacterium и 12 различных видов бактерий: M. tuberculosis complex (M. tuberculosis, M. bovis, M. microti, M. africanum), M. avium-intracellulare-scrofulaceum complex, M. chelonae-abscessus complex, M. kansasii, M. fortuitum и M. gordonae.
Для анализа используют ДНК из бактерий, растущих как на агаризованной, так и в жидкой среде.
Информация для заказа:
| ||
Набор | Кат.№ | К-во тестов |
SPEED-OLIGO BACTERIAL MENINGITIS | SP006 | 24 теста |
SPEED-OLIGO BACTERIAL PNEUMONIA COMBI | SP008 | 24 теста |
SPEED-OLIGO BORDETELLA | SP011 | 40 тестов |
SPEED-OLIGO CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE | SP003 | 40 тестов |
SPEED-OLIGO DIRECT MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS | SP016 | 40 тестов |
SPEED-OLIGO GROUP B STREPTOCOCCUS | SP004 | 40 тестов |
SPEED-OLIGO LEGIONELLA PNEUMOPHILA | SP002 | 40 тестов |
SPEED-OLIGO MYCOBACTERIA | SP005 | 40 тестов |
SPEED-OLIGO MYCOPLASMA PNEUMONIAE | SP001 | 40 тестов |
SPEED-OLIGO NOVEL INFLUENZA A H1N1 | SP015 | 40 тестов |
