Разработка способа количественного опредления общего Билирубина в сыворотке крови на фоне лекарственной терапии натрия п-аминосалицилатом, месалазином, парацетамолом (стр. 1 )

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4

На правах рукописи

ЛЕДЯНКИНА ОЛЬГА ВАСИЛЬЕВНА

разработка способа количественного определения

общего билирубина в сыворотке крови на фоне

лекарственной терапии натрия п-аминосалицилатом,

месалазином, парацетамолом

Специальность 15.00.02. – фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата фармацевтических наук

Пермь - 2007

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» г. Пермь

Научный руководитель: кандидат фармацевтических наук,

доцент

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук,

профессор

кандидат фармацевтических наук,

доцент

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится 17 апреля 2007 года в 13 часов на заседании диссертационного совета Д.208.068.01 при ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия» 8.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пермской государственной фармацевтической академии 6.

Автореферат разослан “16”марта 2007 года

Ученый секретарь

диссертационного совета

кандидат фармацевтических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы Современный уровень аналитических исследований, расширение арсенала применяемых в медицинской практике лекарственных средств требуют совершенствования методик биохимического контроля, так как содержащиеся в биологических жидкостях лекарственные вещества и их метаболиты нередко искажают результаты анализа.




Распространенным лабораторным исследованием является биохимический анализ крови, в частности, определение содержания общего билирубина, что важно для прогноза и контроля течения заболеваний печени и желчевыводящих путей пациента.

Замечено, что у больных, принимающих салофальк (МНН месалазин), наблюдаются нарушения функции печени, тогда как концентрация общего билирубина в сыворотке крови, определяемая унифицированным и нормативным методом , остается в пределах нормы.

Искажение результатов лабораторного исследования общего билирубина сыворотки крови может вызвать лекарственная аналитическая интерференция, то есть участие лекарственных веществ или их метаболитов в химических реакциях, лежащих в основе анализа (, 2001). Однако механизмы подобного влияния, а, соответственно, и способы их устранения, недостаточно изучены. Поэтому актуальной является разработка новых или совершенствование существующих методик биохимического анализа, в том числе при лабораторных исследованиях на фоне терапии лекарственными веществами различной химической структуры.

Цель и задачи работы Целью работы явилась разработка способа количественного определения общего билирубина в сыворотке крови, исключающего аналитическую интерференцию, возможную при лекарственной терапии натрия п-аминосалицилатом, месалазином, парацетамолом.

Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:

·  Изучить влияние натрия п-аминосалицилата (ПАСК-Na), 5-аминосалициловой кислоты (5-АСК) и п-аминофенола – метаболита парацетамола на результаты количественного определения общего билирубина в сыворотке крови, получаемые по нормативной методике.




·  Установить причину аналитической интерференции ПАСК-Na, 5-АСК и п-аминофенола при определении общего билирубина в сыворотке крови методом Иендрашика и предложить способ ее устранения.

·  Выбрать селективные методики для количественного определения ПАСК-Na, 5-АСК и п-аминофенола в сыворотке крови.

·  Апробировать способ количественного определения общего билирубина в сыворотке крови пациентов с учетом аналитической интерференции ПАСК-Na, 5-АСК и п-аминофенола.

·  Разработать форму запроса лабораторного исследования.

Научная новизна работы Впервые показана возможность количественного определения 5-АСК и п-аминофенола в сыворотке крови фотометрическим методом на основе реакции с п-диметиламинобензальдегидом (ПДМАБА).

Установлено, что в результате аналитической интерференции ПАСК-Na, 5-АСК и п-аминофенола результат количественного определения общего билирубина методом Иендрашика определяется заниженным на величину, соответствующую значению оптической плотности интерферирующего вещества, определяемого тем же методом.

Разработан способ количественного определения общего билирубина крови на фоне ПАСК-Na, 5-АСК и п-аминофенола, основой которого является методика используемого на практике унифицированного метода Иендрашика, и исследуемых веществ на основе реакции с ПДМАБА. Расчет концентрации билирубина предложено проводить по фактору среднему. Экспериментально доказана правильность получаемых данным способом результатов.

Практическая значимость и внедрение результатов исследования




Разработанный способ количественного определения общего билирубина крови методом Иендрашика на фоне лекарственной терапии натрия п-аминосалицилатом, месалазином и парацетамолом рекомендован для использования при биохимических исследованиях в клинико-диагностических лабораториях лечебных учреждений, а также в учебном процессе кафедр лабораторной диагностики средних специальных учебных заведений.

Способ используется в практической деятельности биохимического отдела отделения лабораторной диагностики ГУЗ «Свердловская областная клиническая больница № 1», отдела лабораторной диагностики МУ «Екатеринбургский консультативно-диагностический центр», в работе Центральной научно-исследовательской лаборатории Уральской государственной медицинской академии Росздрава.

Материалы диссертационного исследования использованы при разработке пособия «Определение билирубина на фоне лекарственной терапии» для специалистов лабораторной службы учреждений практического здравоохранения, которое утверждено Ученым Советом Пермской государственной фармацевтической академии, а также методических указаний к практическим занятиям по теме: «Способ определения общего билирубина в сыворотке на фоне лекарственной терапии» для студентов, обучающихся по специальности «Лабораторная диагностика», утвержденных методическим советом Свердловского областного медицинского колледжа.

Фрагменты диссертационных исследований введены в программу учебной дисциплины «Клиническая химия» повышенного уровня образования специальности «Лабораторная диагностика» и в программы циклов повышения квалификации специалистов лабораторной службы со средним медицинским образованием Свердловского областного медицинского колледжа.




Разработана и предложена форма запроса лабораторного исследования, позволяющая специалистам лабораторной службы иметь представление о преаналитическом этапе подготовки пациента, в том числе его фармакотерапевтическом фоне.

Апробация работы Результаты и основные положения диссертационной работы доложены на областной научной конференции молодых ученых, студентов, аспирантов «Молодежная наука Прикамья» (Пермь, 2002г.), межвузовской научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава «Вузы и регион» (Пермь, 2003 г.), втором Съезде медицинских работников со средним образованием Свердловской области (Екатеринбург, 2006 г.).

Публикации По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, в числе которых 3 статьи и 6 тезисов.

Объем и структура диссертации Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы (первая глава), экспериментальной части (две главы), в которых изложены результаты исследований, общих выводов, списка литературы и приложений. Материалы диссертации изложены на 125 страницах машинописного текста, включающего 42 таблицы, 8 рисунков, 3 схемы. Библиографический указатель содержит 113 источников, из них 17 на иностранных языках.

Связь задач исследований с проблемным планом фармацевтических наук Работа выполнена в соответствии с планом научных исследований ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (№ Гос. регистрации 01.9.

Основные положения, выносимые на защиту




·  Результаты анализа причин искажения концентрации общего билирубина при определении его методом Иендрашика в присутствии интерферирующих веществ.

·  Результаты фотометрического определения 5-аминосалициловой кислоты и п-аминофенола в сыворотке крови на основе реакции с ПДМАБА.

·  Результаты экспериментальной проверки разработанного способа количественного определения общего билирубина крови на фоне ПАСК-Na, 5-АСК и п-аминофенола в модельных растворах и биологических объектах.

·  Форма запроса лабораторного исследования, в которой отражаются факторы преаналитического этапа, в том числе лекарственная терапия.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В обзоре литературы (первая глава) рассмотрено значение лабораторных исследований в лечебной практике и этапы их проведения. Особое внимание уделено факторам, влияющим на результат лабораторного исследования, в том числе лекарственной интерференции. Рассмотрено влияние лекарственных веществ на результаты лабораторного исследования общего билирубина крови.

Вторая глава посвящена описанию объектов и методов исследования.

В третьей главе рассмотрено влияние натрия п-аминосалицилата, 5-аминосалициловой кислоты и п-аминофенола на результаты количественного определения общего билирубина крови по методике Иендрашика. Представлены результаты разработки способа количественного определения билирубина на модельных смесях и биологических объектах. Предложены этапы проведения лабораторного исследования общего билирубина крови на фоне интерферирующих веществ. Описана селективная методика определения ПАСК-Na, 5-АСК и п-аминофенола фотометрическим методом на основе реакции с ПДМАБА. Отражена значимость правильного документального оформления запроса на лабораторное исследование.




Объекты и методы исследования

В качестве объекта для изучения лекарственной аналитической интерференции выбран способ оценки содержания общего билирубина крови, находящегося в организме в свободном и связанном с глюкуроновой кислотой состояниях.

С33Н34N4О6 М. м. 548,68

Для установления концентрации общего билирубина в сыворотке крови используется метод Иендрашика, утвержденный приказом МЗ СССР № 000 от 11.04.72 г. Метод основан на реакции азосочетания с диазотированной сульфаниловой кислотой, при которой образуется азобилирубин, имеющий розовую окраску (λ = 540 нм). Азосочетание связанного билирубина в отличие от несвязанного происходит быстрее, поэтому для ускорения азосочетания последнего в реакцию вводят кофеиновый буфер.

Клинико-диагностическое значение билирубина и принцип метода его количественного определения позволили осуществить выбор лекарственных веществ для исследования с учетом их возможности вступать в реакцию с диазореактивом, востребованности этих лекарственных препаратов и их гепатотоксического действия.

Натрия п-аминосалицилат (Natrii para-aminosalicylas) представляет собой натриевую соль п-аминосалициловой кислоты, который назначается в высоких дозах в течение длительного времени, поэтому при применении в отдельных случаях возможны увеличение и болезненность печени.

Месалазин (Mesalazine) − 5-аминосалициловая кислота (5-АСК), длительность применения которого зависит от заболевания. В частности, при язвенном колите этот период может составлять от 3 до 6 и даже 12 месяцев, вследствие чего у 10-30 % пациентов вызывает поражение паренхимы печени.




Парацетамол (Рaraсеtamolum) – п-ацетаминофенол. При длительном применении препаратов, содержащих парацетамол, необходим контроль состояния функций печени, так как он оказывает гепатотоксическое действие.

Для создания модельных смесей использовали:

·  билирубин-стандарт (лиофилизат) и альбумин (лиофилизат). Последний необходим для создания среды, приближенной к среде сыворотки крови;

·  стандартизованные сыворотки (сыворотки с известной концентрацией общего билирубина) Федеральной системы внешней оценки качества;

·  растворы натрия п-аминосалицилата;

·  растворы 5-аминосалициловой кислоты;

·  растворы п-аминофенола – метаболита парацетамола.

Для анализа интерферирующих веществ выбрана методика фотометрического определения, описанная для ПАСК-Na, которая основана на реакции конденсации первичной ароматической аминогруппы с ПДМАБА и образовании окрашенного основания Шиффа.

В качестве биологических объектов использовали образцы сывороток крови пациентов, проходящих лекарственную терапию препаратами натрия п-аминосалицилата, салофалька (месалазина) и парацетамола.

Экспериментальные данные получены на фотоэлектроколориметре с микропроцессором – КФК-3МП.

Концентрацию веществ определяли:

·  по калибровочному графику;

·  по уравнению калибровочного графика

С = D - а / b, где

С – определяемая концентрация раствора,

D – оптическая плотность,

а и b коэффициенты, предварительно рассчитанные по формулам, в которых использованы данные калибровочного графика ;




·  по фактору среднему (Fсредний).

F= С/D где,

С - концентрация растворов по данным калибровочного графика,

D - оптическая плотность, соответствующая каждой концентрации.

Статистическая обработка результатов, рассчитанных используемыми способами, показала их сопоставимость. Относительная ошибка не превышает ±1,46 %.

Для удобства расчетов в работе использовали фактор средний, значение которого вводили в рабочие таблицы отражающие зависимость концентрации от оптической плотности, составленные с помощью программы Microsoft Excel. При изменении в таблицах значения фактора среднего их данные автоматиче-

ски пересчитываются, что делает данный способ расчета более оперативным и рациональным.

Результаты анализа являются средними трех-семи измерений. Статистическую обработку выполняли согласно методике ГФ ХI, вып.1.

Поведение исследуемых веществ в условиях анализа по методу Иендрашика

В ходе эксперимента апробировали метод Иендрашика на билирубин-стандарте и на стандартизованных сыворотках. Построен калибровочный график по билирубин-стандарту и рассчитан фактор средний (293,59). Относительная ошибка метода составила от 0,40% до 0,78 %, что не превышает норму отклонения (±5%), предусмотренную проектом технических условий ТУ .

В условиях метода Иендрашика ПАСК-Na, 5-АСК и п-аминофенол образуют окрашенные соединения, что может привести к возникновению аналитической интерференции при определении общего билирубина крови. В ходе эксперимента доказано, что максимум поглощения растворов окрашенных соединений, полученных для каждого изучаемого вещества, наблюдается при иной длине волны (λ=440нм), чем в случае определения продуктов, образующихся при анализе по методу Иендрашика.




Применительно к этим условиям для каждого соединения построены калибровочные графики, по которым рассчитаны факторы средние, их значения составляют для ПАСК-Na − 4,90, 5-АСК − 9,90 и п-аминофенола − 12,80.

В дальнейшем исследовали зависимость результата определения общего билирубина от концентрации ПАСК-Na, 5-АСК и п-аминофенола в сыворотке крови. Показано (табл. 1), что содержание билирубина в присутствии изучаемых веществ ниже, чем в его индивидуальном растворе. Сравнение значений оптических плотностей, полученных в эксперименте, позволило установить, что оптическая плотность при определении общего билирубина ниже на величину, соответствующую оптической плотности интерферирующего вещества.

Выбор селективного способа количественного определения

ПАСК-Na, 5-АСК и п-аминофенола

Для селективного определения ПАСК-Na, 5-АСК и п-аминофенола использовали методику фотометрического количественного определения ПАСК-Na в сыворотке крови, описанную (1971 г.), которая основана на образовании окрашенного основания Шиффа с ПДМАБА (λ = 440 нм).

Построены калибровочные графики, которые показывают, что поглощение продуктов конденсации ПАСК-Na, 5-АСК, п-аминофенола с ПДМАБА в аналитических концентрациях подчиняется закону Бугера-Ламберта-Бера. Для каждого из исследуемых веществ рассчитан фактор средний, который равен для ПАСК-Na − 3,01, 5-АСК − 4,95 и п-аминофенола − 7,10.

Последующими исследованиями установлена селективность методики в отношении определяемых веществ в присутствии билирубина, так как он не вступает в реакцию с ПДМАБА.




Разработка способа количественного определения общего билирубина крови методом Иендрашика на фоне ПАСК-Na, 5-АСК и п-аминофенола

Учитывая, что ПАСК-Na, 5-АСК и п-аминофенол вызывают занижение результатов определения общего билирубина, на модельных растворах разработан способ его количественного определения в крови на их фоне. Способ заключается в использовании классической методики Иендрашика, методики, основанной на реакции интерферирующих веществ с ПДМАБА, таблиц факторов средних, составленных по данным калибровочных графиков (рис. 1).

Таблица 1

Результаты количественного определения билирубина в присутствии ПАСК-Na, 5-АСК и п-аминофенола

Исследуемые

вещества

опыта

Введено

Оптическая

плотность

Д

Определено

р – р билирубин - стандарта концентрации 85,5 мкмоль/л

исследуемые

вещества *

Н2О

очищенная,

мл

билирубина,

мкмоль/л

исследуемого вещества,

мг

мл

мкмоль/л

мл

мг/мл

ПАСК-Na

1.

0,25

0,25

0,25

0,0512

0,0509

0,0508

0,251

0,249

0,248

2.

0,25

21,38

0,25

0,25

0,0203

0,0221

0,0207

6,09

6,63

6,21

3.

0,25

21,38

0,25

0,0694

0,0737

0,0690

20,82

22,11

20,70

5-АСК

5-АСК

1.

0,25

0,25

0,25

0,0257

0,0261

0,0263

0,252

0,256

0,257

2.

0,25

21,38

0,25

0,25

0,0457

0,0462

0,0449

13,71

13,86

13,47

3.

0,25

21,38

0,25

0,0692

0,0718

0,0703

20,76

21,54

21,09

п-аминофенол

1.

0,25

0,25

0,25

0,0181

0,0186

0,0192

0,238

0,246

0,253

2.

0,25

21,38

0,25

0,25

0,0523

0,0539

0,0518

15,69

16,17

15,54

3.

0,25

21,38

0,25

0,0689

0,0673

0,0728

20,67

20,34

21,84

* использованы 0,1% водные растворы

Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 4



Подпишитесь на рассылку:

Билирубин

Проекты по теме:

Основные порталы, построенные редакторами

Домашний очаг

ДомДачаСадоводствоДетиАктивность ребенкаИгрыКрасотаЖенщины(Беременность)СемьяХобби
Здоровье: • АнатомияБолезниВредные привычкиДиагностикаНародная медицинаПервая помощьПитаниеФармацевтика
История: СССРИстория РоссииРоссийская Империя
Окружающий мир: Животный мирДомашние животныеНасекомыеРастенияПриродаКатаклизмыКосмосКлиматСтихийные бедствия

Справочная информация

ДокументыЗаконыИзвещенияУтверждения документовДоговораЗапросы предложенийТехнические заданияПланы развитияДокументоведениеАналитикаМероприятияКонкурсыИтогиАдминистрации городовПриказыКонтрактыВыполнение работПротоколы рассмотрения заявокАукционыПроектыПротоколыБюджетные организации
МуниципалитетыРайоныОбразованияПрограммы
Отчеты: • по упоминаниямДокументная базаЦенные бумаги
Положения: • Финансовые документы
Постановления: • Рубрикатор по темамФинансыгорода Российской Федерациирегионыпо точным датам
Регламенты
Термины: • Научная терминологияФинансоваяЭкономическая
Время: • Даты2015 год2016 год
Документы в финансовой сферев инвестиционнойФинансовые документы - программы

Техника

АвиацияАвтоВычислительная техникаОборудование(Электрооборудование)РадиоТехнологии(Аудио-видео)(Компьютеры)

Общество

БезопасностьГражданские права и свободыИскусство(Музыка)Культура(Этика)Мировые именаПолитика(Геополитика)(Идеологические конфликты)ВластьЗаговоры и переворотыГражданская позицияМиграцияРелигии и верования(Конфессии)ХристианствоМифологияРазвлеченияМасс МедиаСпорт (Боевые искусства)ТранспортТуризм
Войны и конфликты: АрмияВоенная техникаЗвания и награды

Образование и наука

Наука: Контрольные работыНаучно-технический прогрессПедагогикаРабочие программыФакультетыМетодические рекомендацииШколаПрофессиональное образованиеМотивация учащихся
Предметы: БиологияГеографияГеологияИсторияЛитератураЛитературные жанрыЛитературные героиМатематикаМедицинаМузыкаПравоЖилищное правоЗемельное правоУголовное правоКодексыПсихология (Логика) • Русский языкСоциологияФизикаФилологияФилософияХимияЮриспруденция

Мир

Регионы: АзияАмерикаАфрикаЕвропаПрибалтикаЕвропейская политикаОкеанияГорода мира
Россия: • МоскваКавказ
Регионы РоссииПрограммы регионовЭкономика

Бизнес и финансы

Бизнес: • БанкиБогатство и благосостояниеКоррупция(Преступность)МаркетингМенеджментИнвестицииЦенные бумаги: • УправлениеОткрытые акционерные обществаПроектыДокументыЦенные бумаги - контрольЦенные бумаги - оценкиОблигацииДолгиВалютаНедвижимость(Аренда)ПрофессииРаботаТорговляУслугиФинансыСтрахованиеБюджетФинансовые услугиКредитыКомпанииГосударственные предприятияЭкономикаМакроэкономикаМикроэкономикаНалогиАудит
Промышленность: • МеталлургияНефтьСельское хозяйствоЭнергетика
СтроительствоАрхитектураИнтерьерПолы и перекрытияПроцесс строительстваСтроительные материалыТеплоизоляцияЭкстерьерОрганизация и управление производством

Каталог авторов (частные аккаунты)

Авто

АвтосервисАвтозапчастиТовары для автоАвтотехцентрыАвтоаксессуарыавтозапчасти для иномарокКузовной ремонтАвторемонт и техобслуживаниеРемонт ходовой части автомобиляАвтохимиямаслатехцентрыРемонт бензиновых двигателейремонт автоэлектрикиремонт АКППШиномонтаж

Бизнес

Автоматизация бизнес-процессовИнтернет-магазиныСтроительствоТелефонная связьОптовые компании

Досуг

ДосугРазвлеченияТворчествоОбщественное питаниеРестораныБарыКафеКофейниНочные клубыЛитература

Технологии

Автоматизация производственных процессовИнтернетИнтернет-провайдерыСвязьИнформационные технологииIT-компанииWEB-студииПродвижение web-сайтовПродажа программного обеспеченияКоммутационное оборудованиеIP-телефония

Инфраструктура

ГородВластьАдминистрации районовСудыКоммунальные услугиПодростковые клубыОбщественные организацииГородские информационные сайты

Наука

ПедагогикаОбразованиеШколыОбучениеУчителя

Товары

Торговые компанииТоргово-сервисные компанииМобильные телефоныАксессуары к мобильным телефонамНавигационное оборудование

Услуги

Бытовые услугиТелекоммуникационные компанииДоставка готовых блюдОрганизация и проведение праздниковРемонт мобильных устройствАтелье швейныеХимчистки одеждыСервисные центрыФотоуслугиПраздничные агентства

Блокирование содержания является нарушением Правил пользования сайтом. Администрация сайта оставляет за собой право отклонять в доступе к содержанию в случае выявления блокировок.