Сорбционные свойства и фармакологическая активность некрахмальных полисахаридов (стр. 1 )

На правах рукописи

ХОТИМЧЕНКО Максим Юрьевич

СОРБЦИОННЫЕ СВОЙСТВА И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ

АКТИВНОСТЬ НЕКРАХМАЛЬНЫХ ПОЛИСАХАРИДОВ

14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора медицинских наук

Владивосток – 2011

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Владивостокский государственный

медицинский университет Росздрава» и Институте биологии моря им.  Дальневосточного отделения Российской академии наук

Научный консультант: доктор биологических наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинский наук, профессор

ГОУДПО «Институт повышения квалификации специалистов здравоохранения»

доктор медицинских наук, профессор

НИИ фармакологии СО РАМН

доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН

НИИ микробиологии и эпидемиологии СО РАМН

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет Росздрава»

Защита диссертации состоится «29» апреля 2011 года в ___ часов на заседании диссертационного совета Д208.007.03 при Владивостокском государственном медицинском университете ( г. Владивосток, пр. Острякова, 2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Владивостокского государственного медицинского университета г. Владивосток, пр. Острякова, 2.

Автореферат разослан «___» ________________ 2011 года.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Поиск соединений с высокой фармакологической активностью и разработка на их основе новых лекарственных препаратов являются важными задачами современной экспериментальной фармакологии и фармации. Актуальность поисковых исследований обусловлена необходимостью пополнения арсенала лекарственных средств более эффективными и менее токсичными препаратами, предназначенными для лечения и профилактики социально-значимых заболеваний. Наряду с медицинскими задачами, необходимость в создании новых фармацевтических субстанций и лекарственных средств диктуется социальными и экономическими причинами. По данным агентства «DSM Group», в 2008 г. на Российском фармацевтическом рынке 75,8% лекарственных препаратов в стоимостном объеме были представлены средствами импортного производства [, 2008]. Большинство лекарственных средств отечественного производства является препаратами-дженериками, эффективность которых по сравнению с оригинальными препаратами, как правило, значительно ниже. В настоящее время примерно 80% отечественных лекарственных препаратов производится из фармацевтических субстанций импортного производства. В период с 1991 г. до 2005 г. объем производства фармацевтических субстанций в Российской Федерации сократился с 17,5 тыс. усл. тонн до 0,98 тыс. усл. тонн. Все это негативно отражается на состоянии здоровья населения и требует более интенсивного развития биомедицинских исследований, направленных на создание новых эффективных лекарственных средств.

По разным оценкам от 40 до 70% новых лекарственных препаратов создается на основе природных молекул или их синтетических аналогов и производных. На основе природных соединений могут быть разработаны фармацевтические средства, обладающие качественно новыми фармакологическими эффектами по сравнению с химически синтезированными лекарственными препаратами. Существенными преимуществами лекарственных веществ из природных источников являются доступность сырья, меньшая сложность технологических процессов выделения и очистки, выраженная фармакологическая активность и, как правило, низкая токсичность [, 2010]. В этом отношении большой интерес вызывают представители морской флоры и фауны, которые можно рассматривать как источник новых лекарств и фармакологически активных субстанций [Bowling J. J. et al., 2007; Martinez A., 2007; Kinghorn A. et al., 2009]. Известно, что филогенетическое (макротаксономическое) разнообразие в море существенно выше, чем на суше. Так, из 33 типов многоклеточных животных 31 тип встречается в морских водах, 17 типов – в пресных водах и только 11 типов – на суше [, 2004]. Благодаря многочисленным адаптациям к разнообразным факторам внешней среды, многие морские животные и растения вырабатывают уникальные вторичные метаболиты, отсутствующие у наземных организмов. Зачастую эти соединения характеризуются чрезвычайно высокой фармакологической активностью [Haefner B., 2003; Muller W. et al., 2003; Alonso D. et al., 2005; Newman D., Cragg G., 2006; , , 2008].

Перспективную группу веществ, преимущественно морского происхождения, составляют некрахмальные полисахариды [ и др., 2005], к которым относятся альгинаты и фукоиданы морских бурых водорослей, каррагинаны красных водорослей, хитин и его производное хитозан морских ракообразных, а также пектины морских трав и наземных растений. Они широко применяются в пищевой промышленности в качестве стабилизаторов, загустителей и гелеобразователей и в меньших масштабах – в фармацевтической промышленности как формообразующие вещества [Redgwell R., Fischer M., 2005]. В последние годы эти полисахариды стали объектом нанотехнологических исследований в качестве структурных компонентов систем адресной доставки лекарственных молекул и микрокапсулирования [Liu Z. et al., 2008].

Все некрахмальные полисахариды объединены общим свойством: в желудочно-кишечном тракте они не гидролизуются амилазами слюнных и панкреатических желез и не абсорбируются из кишечника в кровь, однако, в толстой кишке подвергаются деградации под действием ферментов бактериальной микрофлоры [Wong J. M. et al., 2006]. Уникальным свойством этих полисахаридов является способность поглощать большое количество воды и в присутствии, как правило, двухвалентных ионов образовывать гели. Механизм гелеобразования лежит в основе способности некрахмальных полисахаридов связывать и прочно удерживать ионы металлов и другие ионизированные молекулы [Kohn R., 1987].

У большинства исследованных полисахаридов обнаружены те или иные фармакологические эффекты, заслуживающие внимания в плане создания новых фармацевтических субстанций. Так, пектины, альгинаты и хитозаны обладают достоверным гипохолестеринемическим и гипотриглицеридемическим эффектами [Panlasigui L. N. et al., 2003; Shields K. M. et al., 2003]. Гепатопротекторное и нефропротекотрное действие обнаружено у фукоиданов [Kawano N. et al., 2007; Veena C. K. et al., 2007]. В экспериментальных исследованиях и клинических наблюдениях была доказана терапевтическая эффективность пектинов при инфекционной патологии, проявляющаяся в снижении явлений интоксикации [ и др., 2001], а также при отравлении ртутью [ и др., 1999]. У пектинов и хитозанов выявлены бактерицидные и фунгицидные эффекты, а у фукоиданов и каррагинанов – противовирусная активность [Neurath A. R. et al., 2002; Carlucci M. J. et al., 2004; Adhikari U. et al., 2006; Buck C. B. et al., 2006], которая сочетается с иммуностимулирующим эффектом [Yoshikawa Y. et al., 2008] и способностью к индукции синтеза интерферонов [Tsuji R. F. et al., 2003]. Помимо этого, у фукоиданов и каррагинанов установлена антикоагулянтная активность [Liang A. et al., 2006; Cicala C. et al., 2007], которая у высокосульфатированных фукоиданов сопоставима с таковой препаратов гепарина [Qui X. D. et al., 2006]. Фукоидан проявляет также антиагрегантные свойства [Mourao P. A.S., 2004], а альгиновая кислота, наоборот, обладает протромботической активностью, что на практике реализовалось в создании перевязочных материалов с гемостатическими свойствами [Pielesz A. et al., 2008].

Результаты многих исследований указывают на наличие противоопухолевой активности у некрахмальных полисахаридов. Пектины в эксперименте снижают частоту рака толстого кишечника, что было подтверждено результатами клинических наблюдений. На моделях перевиваемых опухолей у мышей показана противоопухолевая активность альгинатов. В ряде работ продемонстрирована способность фукоиданов ингибировать рост опухолей и уменьшать интенсивность процессов метастазирования [ и др., 2007; Cumashi A. et al., 2007; Li D. Y. et al., 2008]. Получены данные о противоопухолевой активности и каррагинанов [Zhou G. et al., 2006], хотя в литературе имеются факты, указывающие на их онкогенное действие [Tobacman J. K. et al., 2001; Hata K. et al., 2006]. Весьма перспективными препаратами для лечения и профилактики язвенной болезни представляются фукоиданы, которые, с одной стороны, обладают антипептическими и противовоспалительными свойствами [Shibata H. et al., 2000; Yamamoto Y. et al., 2000], а с другой, препятствуют адгезии Helycobacter pylori на мембраны эпителиальных клеток слизистой желудка [Shibata H. et al., 1999].

Следует подчеркнуть, что представители каждой группы некрахмальных полисахаридов представляют собой гетерогенные соединения, различающиеся не только источниками происхождения, но и параметрами физико-химических свойств, таких как молекулярная масса, вязкость, растворимость в воде, степень этерификации и сульфатирования, что, к сожалению, не учитывается в большинстве работ по оценке биологической активности углеводных биополимеров и, на наш взгляд, является причиной многочисленных противоречивых фактов, имеющихся в литературе, посвященной фармакологии этих полисахаридов. Отсутствие общепринятых количественных показателей для стандартизации препаратов некрахмальных полисахаридов затрудняет проведение сравнительной оценки фармакологической эффективности полисахаридов друг с другом, а также с лекарственными препаратами аналогичного действия. Сформулированные проблемы определили цели и задачи настоящей работы.

Цель работы: изучить сорбционные свойства, фармакологические эффекты и механизмы действия некрахмальных полисахаридов и обосновать возможности использования данных веществ для разработки новых фармацевтических субстанций и лекарственных средств.

Задачи работы:

1.  Изучить металлсвязывающие свойства природных пектинов, альгинатов, хитозанов, каррагинанов и фукоидана при взаимодействии с ионами меди, ртути, кадмия, свинца, цинка и стронция и определить с помощью математических моделей сорбции основные константы связывания.

2.  Провести сравнительный анализ количественных параметров связывания тяжелых металлов некрахмальными полисахаридами и лекарственными препаратами из группы энтеросорбентов и определить наиболее перспективные образцы для дальнейшей разработки на их основе новых лекарственных средств.

3.  Исследовать металлсвязывающую активность образцов пектинов с различной степенью этерификации при взаимодействии с ионами меди, ртути, кадмия, свинца, цинка и стронция и установить зависимость сорбционной емкости полисахаридов от степени этерификации.

4.  На модели свинцовой нагрузки у лабораторных животных оценить влияние пектинов, альгинатов, хитозана, каррагинанов и фукоидана на депонирование и экскрецию тяжелых металлов.

5.  Оценить гипохолестеринемическую, гипотриглицеридемическую и антиоксидантную активность пектинов, альгинатов, каррагинанов и фукоидана на различных моделях экспериментальной гиперлипидемии.

6.  Исследовать гепатопротекторное действие пектинов и альгинатов на животных с экспериментальным тетрахлорметановым поражением печени, а также оценить антиоксидантные свойства полисахаридов на данной модели.

7.  На экспериментальных моделях повреждения слизистой желудка оценить гастропротективные эффекты пектинов, альгинатов, хитозана и каррагинанов.

8.  Определить сорбционную емкость пектинов и альгинатов в отношении мочевины и креатинина и изучить лечебные и профилактические эффекты этих полисахаридов при экспериментальной почечной недостаточности.

9.  Провести анализ зависимости сорбционных свойств и фармакологических эффектов некрахмальных полисахаридов от их физико-химических свойств на примере высокоэтерифицированных и низкоэтерифицированных пектинов с целью стандартизации полисахаридных препаратов.

Научная новизна и теоретическое значение работы. Работа является комплексным научным исследованием, посвященным фармакологии некрахмальных полисахаридов. Дана сравнительная оценка сорбционных свойств, антитоксической, липиднормализующей, гепатопротективной, гастропротективной и нефропротектиновной активности пектинов, альгинатов, хитозана, каррагинанов и фукоидана.

На основе математического аппарата моделей сорбции Лэнгмюра, Фрейндлиха и Брюне-Эммета-Таллера определены параметры максимальной сорбционной емкости, аффинитета и прочности связывания металлов природными и модифицированными некрахмальными полисахаридами. Установлена зависимость количественных значений констант связывания от степени этерификации пектинов, содержания кальция в молекуле альгинатов и пектинов, от степени сульфатирования каррагинанов. Определены наиболее эффективные образцы некрахмальных полисахаридов, препятствующих накоплению металлов в организме и ускоряющих их выведение.

Установлены константы связывания желчных кислот, билирубина, мочевины и креатинина пектинами и альгинатами. Показана зависимость гипохолестеринемического и гипотриглицеридемического действия пектинов и альгинатов от молекулярной массы и характеристической вязкости полисахаридов. Определены образцы пектинов, альгинатов, хитозана и каррагинанов, обладающие лечебным и профилактическим действием при экспериментальном токсическом поражении печени и почек.

На различных моделях повреждения слизистой желудка крыс показано антиульцерогенное действие альгината натрия, пектата кальция и хитозана.

Проведен анализ зависимости фармакологических эффектов некрахмальных полисахаридов от их химической структуры, молекулярной массы, вязкости и других физико-химических параметров. Количественные характеристики физико-химических свойств предложены в качестве показателей стандартизации препаратов некрахмальных полисахаридов.

Теоретическое значение работы заключается в установлении новых, не известных ранее закономерных связей структуры и физико-химических свойств некрахмальных полисахаридов с их биологической активностью. Установлены новые механизмы фармакологического действия углеводных биополимеров.

Практическая значимость работы и реализация результатов исследования. Практическим итогом проведенного исследования стало базирующееся на полученных результатах обоснование дальнейшей разработки лекарственных средств на основе низкоэтерифицированных пектинов, солей пектовой и альгиновой кислот, предназначенных для применения в качестве энтеросорбентов. Высокая сорбционная емкость пектинов и альгинатов по тяжелым металлам, значительно превышающая таковую препаратов активированного угля и лигнина, сочетающаяся с возможностью их длительного безопасного приема, позволяют рассматривать эти вещества как перспективные препараты для профилактики и лечения хронических отравлений тяжелыми металлами. Пектат кальция может быть рекомендован для дальнейшей разработки в качестве гастропротективного средства.

Препараты некрахмальных полисахаридов с энтеросорбционными свойствами могут рассматриваться в качестве дополнительных средств в комплексном лечении заболеваний, сопровождающихся явлениями интоксикации.

На основании проведенных экспериментальных исследований, анализа физико-химических характеристик и технологических процессов выделения, очистки и химической модификации полисахаридов разработана и зарегистрирована в установленном порядке нормативная документация на производство и реализацию биологически активных добавок к пище, действующим компонентом которых является пектин со степенью этерификации менее 5%, комбинация пектинов с суммарной степенью этерификации 50% и альгинат кальция. Действующие компоненты рассматриваются в качестве основы для разработки лекарственных средств с энтеросорбционными свойствами.

Разработанные технологии получения модифицированных некрахмальных полисахаридов и способы их применения защищены четырьмя патентами Российской Федерации.

Основные положения, выносимые на защиту:

1.  Некрахмальные полисахариды обладают выраженной металлсвязывающей способностью в отношении токсичных металлов, таких как свинец, кадмий, ртуть, стронций и могут стать основой для разработки новых лекарственных средств, предназначенных для лечения и профилактики заболеваний, обусловленных действием тяжелых металлов. Наиболее перспективными для дальнейшего изучения в качестве средств профилактики и лечения хронических поражений тяжелыми металлами являются деэтерифицированный пектин, альгинат натрия, пектат кальция, альгинат кальция.

2.  Механизмы связывания ионов меди, свинца, кадмия и цинка пектинами и альгинатами отличаются от процессов связывания ионов ртути и стронция. Сорбция ионов меди, свинца, кадмия и цинка происходит за счет образования координационных связей между карбоксильными и гидроксильными группами галактуроновых кислот в пектине и гулуроновых кислот в альгинате и ионом метала с формированием упорядоченной структуры гомогенных активных связывающих центров. Связывание ртути и стронция происходит за счет образования координационных связей между карбоксильными и гидроксильными группами галактуроновых кислот в пектине и гулуроновых кислот в альгинате, приводящего к хаотичному формированию гетерогенных активных связывающих центров. Дополнительное введение ионов кальция в сорбционную систему связывания ртути и стронция приводит к упорядочиванию структуры активных связывающих центров.

3.  Пектины, альгинаты, хитозан и фукоидан при энтеральном введении оказывают липиднормализующее действие, позволяющее рассматривать их в качестве основы для разработки средств профилактики атеросклероза.

4.  Пектины, альгинаты и хитозан оказывают гастропротективное действие на различных моделях поражения слизистой желудка и являются перспективной основой для создания новых противоязвенных средств.

5.  Препараты пектинов, альгинатов и хитозана способствуют нормализации биохимических параметров печеночной интоксикации при экспериментальной поражении печени, что позволяет рассматривать их в качестве потенциальных гепатопротекторов. Одним из механизмов антитоксического действия некрахмальных полисахаридов является их антиоксидантная активность.

6.  Препараты альгинатов и пектинов при энтеральном введении уменьшают явления уремической интоксикации и могут найти применение в комплексном лечении почечной недостаточности.

Апробация работы:

Основные результаты работы были доложены и обсуждены на IV Международном симпозиуме «Биологически активные добавки к пище: XXI век» (С.-Петербург, 2000), Русско-японском международном медицинском симпозиуме (Благовещенск, 2000), X-XVI Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, 2003, 2004, 2005, 2006, 2007, 2008, 2009), 2-ом Съезде российского научного общества фармакологов «Фундаментальные проблемы фармакологии» (Москва, 2003), Международном симпозиуме «International Conference on Development Pharmacology» (Harbin, China, 2004), Международном симпозиуме «China-Russia International Conference on Pharmacology» (Harbin, China, 2005), XV мировом фармакологическом конгрессе «Pharmacology in the 21st Century: A Bridge between the Past and the New Molecular Frontiers» (Beijing, China, 2006), V Дальневосточном региональном конгрессе с международным участием «Человек и лекарство» (Владивосток, 2008), XVI мировом конгрессе базисной и клинической фармакологии «WorldPharma 2010» (Copenhagen, Denmark, 2010).

Материалы диссертации были доложены и обсуждены на заседании Проблемной комиссии по фармакологии, клинической фармакологии и фармации Владивостокского государственного медицинского университета. По результатам обсуждения диссертация была рекомендована к защите.

Публикации:

По материалам диссертации опубликована 41 печатная работа, в том числе 1 монография, 36 статей, в том числе 16 в журналах, рекомендованных ВАК, 4 патента Российской Федерации.

Финансовая поддержка:

Работа выполнялась при финансовой поддержке грантов РФФИ № «Сравнительная эффективность и механизмы сорбционной активности высокоэтерифицированных и низкоэтерифицированных пектинов», ДВО РАН – СО РАМН -А-05-468 «Первичные фармакологические исследования, токсикологические испытания, стандартизация и разработка лекарственных препаратов на основе некрахмальных полисахаридов», РФФИ-ДВО № «Условия и механизмы образования комплексов наночастиц некрахмальных полисахаридов с ионами поливалентных металлов», Государственных контрактов в рамках Федеральной целевой программы «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на годы»: Государственный контракт № 02.512.11.2090 «Разработка фармакологических средств защиты человека от действия радионуклидов, токсических металлов и эндогенных метаболитов на основе биопрепаратов из морских животных и растений», Государственный контракт № 02.512.12.2043 «Разработка фармакологических средств на основе модифицированных некрахмальных полисахаридов для использования в терапии злокачественных новообразований».

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 327 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и метолов исследования, 8 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы.

Работа содержит 53 рисунка и 41 таблицу. Библиография состоит из 468 отечественных и зарубежных источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Общая характеристика экспериментальных животных

В экспериментах использованы 900 половозрелых белых беспородных крыс-самцов массой 110-195 г. и 58 половозрелых белых нелинейных мышей-самцов массой 20-26 г. Животных содержали в виварии Владивостокского государственного медицинского университета; часть животных была получена из вивария ТИБОХ ДВО РАН. Во время экспериментальных исследований животных содержали в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей [Страсбург, 1986]. Все животные помимо сбалансированного стандартного рациона (гранулированный корм ПК120-3, согласно приказу № 000 МЗ СССР от 01.01.2001) получали овес, хлеб, свежие овощи и фрукты, мел, также в зимнее время были добавлены комплексные поливитаминные препараты. При разделении животных на группы проводили их ранжирование по массе тела с целью обеспечения идентичности указанных групп по данному показателю. Наркоз и декапитацию животных проводили в соответствии с рекомендациями Рабочей группы Федерации Европейского Сообщества по науке лабораторных животных [, 1998].

Характеристика изучаемых веществ

В работы были исследованы следующие вещества и препараты:

1. Альгинат натрия – полимер гулуроновой и маннуроновой кислот; содержание уроновых кислот - 77,3%, характеристическая вязкость - 1270 мл/г; молекулярная масса, вычисленная с помощью уравнения Марка-Куна-Хауинка, в среднем 403000 Да.

2. Альгинат кальция – полимер гулуроновой и маннуроновой кислот; содержание уроновых кислот - 77,3%, содержание кальция - 72,5%, 82,5% карбоксильных групп представлены в виде кальциевой соли, характеристическая вязкость - 1270 мл/г, молекулярная масса 403000 Да.

3. Пектин, степень этерификации 60% – полимер галактуроновой кислоты; содержание чистого галактуронана в молекуле пектина - 78,0%, степень этерификации – около 61%, свободные и метилированные карбоксильные группы расположены в случайном порядке; характеристическая вязкость – 915 мл/г галактуронана, молекулярная масса, вычисленная с помощью уравнения Марка-Куна-Хауинка, в среднем 224000 Да.

4. Пектин, степень этерификации 40% – полимер галактуроновой кислоты; концентрация чистого галактуронана – 70,4%, степень этерификации – около 40,1%. Свободные и метилированные карбоксильные группы расположены в случайном порядке, характеристическая вязкость – 533 мл/г галактуронана, молекулярная масса в среднем 70000 Да.

5. Пектин, степень этерификации 20% – полимер галактуроновой кислоты; концентрация чистого галактуронана – 66,6%, степень этерификации – около 18,8%. Свободные и метилированные карбоксильные группы расположены в случайном порядке, характеристическая вязкость – 433 мл/г галактуронана, молекулярная масса в среднем 45000 Да.

6. Деэтерифицированный пектин – полимер галактуроновой кислоты; концентрация чистого галактуронана – 67,1%, степень этерификации – около 1,2%. Свободные и метилированные карбоксильные группы расположены в случайном порядке, характеристическая вязкость 408 мл/г галактуронана, молекулярная масса в среднем 20500 Да.

7. Пектат кальция – кальциевая соль пектовой кислоты; содержание чистого галактуронана – 60,5%, степень этерификации – около 1,2%, характеристическая вязкость – 160 мл/г галактуронана, 86% карбоксильных групп находятся в виде кальциевой соли, молекулярная масса в среднем 20500 Да.

8. Зостерин – полимер галактуроновой кислоты, пектин из морской травы Zostera marina. Содержание чистого галактуронана в молекуле пектина – 74,8%, степень этерификации – около 5,7%, свободные и метилированные карбоксильные группы расположены в случайном порядке, характеристическая вязкость – 340 мл/г галактуронана, молекулярная масса в среднем 62000 Да.

9. Хитозан – полисахарид (полимер β-(1→4)-2-ацетамидо-2-дезокси-D-глюкопиранозы), выделенный из панциря камчатского краба Paralithodes camtschatica.

10. Фукоидан – сложный сульфатированный полисахарид (полимер L-фукозы), выделенный из бурой водоросли Laminaria japonica.

11. Каррагинан – сульфатированный полисахарид (полимер D-галактозы и ее производных), выделенный из морской красной водоросли Chondrus сrispatus. Суммарный препарат λ- и k-каррагинанов предоставлен лабораторией неинфекционного иммунитета ТИБОХ ДВО РАН.

12. k-каррагинан – сульфатированный полисахарид (полимер D-галактозы и ее производных), выделенный из морской красной водоросли Chondrus сrispatus, предоставлен лабораторией неинфекционного иммунитета ТИБОХ ДВО РАН.

13. λ-каррагинан – сульфатированный полисахарид (полимер D-галактозы и ее производных), выделенный из морской красной водоросли Chondrus сrispatus, предоставлен лабораторией неинфекционного иммунитета ТИБОХ ДВО РАН.

14. Активированный уголь. В экспериментах был использован активированный уголь в таблетках, произведенный химфармзавод» (Ирбит) и (Пермь).

15. Полифепан. В экспериментах был использован препарат в гранулах производства АОЗТ «Сайнтек» (Санкт-Петербург).

16. Микрокристаллическая целлюлоза. В экспериментах был использован препарат в таблетках «Анкир Б».

Экспериментальные модели

Свинцовую интоксикацию у лабораторных крыс вызывали внутрижелудочным введением ацетата свинца в дозе 50 мг/кг массы тела в течение 18 дней и в течение 21 дня, после чего исследуемые полисахариды вводили в дозах 0,1 г/кг и 0,5 г/кг, соответственно. Для оценки динамики выведения ионов металла из организма лабораторных животных под действием некрахмальных полисахаридов свинцовую интоксикацию вызывали введением свинца в дозе 100 мг/кг в течение 21 дня. Экспериментальное поражение щитовидной железы и печени вызывали введением свинца в дозе 100 мг/кг в течение 21 дня. После этого вводили исследуемые препараты в дозах от 0,1 до 0,5 г/кг в течение 21 дня.

Экспериментальную почечную недостаточность у лабораторных животных моделировали при помощи двухнедельного введения нитрата ртути в дозе 10 мг/кг через желудочный зонд в течение 2 недель. Начиная с 15 дня эксперимента, введение ртути прекращали и животным вводили исследуемые полисахариды и препараты сравнения в дозе 0,1 и 0,5 г/кг в течение трех недель.

Повреждение печеночной паренхимы у лабораторных крыс моделировали внутрижелудочным введением четыреххлористого углерода в дозе 300 мг/кг массы тела животного в течение семи дней. При оценке лечебных эффектов исследуемых полисахаридов препараты вводили после окончания введения четыреххлористого углерода в дозах 0,01, 0,05 и 0,25 г/кг в течение трех недель. Для изучения профилактических эффектов препараты вводили в течение трех недель в тех же дозах до начала введения четыреххлористого углерода. Контрольная группа на протяжении всего эксперимента получала стандартную диету вивария.

Усиление перекисного окисления липидов вызывали либо внутрижелудочным введением ацетата свинца 100 мг/кг массы тела в сутки в виде водного раствора в течение 14 дней, либо внутрижелудочным введением четыреххлористого углерода в дозе 300 мг/кг массы тела животного в течение 7 дней. Препараты некрахмальных полисахаридов вводили после окончания введения свинца или четыреххлористого углерода в дозе от 0,05 до 0,5 г/кг/сут. Контрольная группа животных получала стандартную диету.

Гиперлипидемию вызывали либо внутрижелудочным введением четыреххлористого углерода в дозе 300 мг/кг массы тела животного в течение 7 дней, либо внутрижелудочным введением 100 мг ацетата свинца на кг массы тела в сутки в виде водного раствора в течение 14 дней, либо введением 1 мл 25% водного раствора этанола в течение 30 дней. В экспериментах с тетрахлорметановой интоксикацией изучаемые полисахариды вводили после окончания введения токсиканта в дозе 0,15 г/кг массы тела. При использовании свинцовой и этаноловой моделей интоксикации исследуемые препараты вводили в дозе 0,05 г/кг массы тела животного.

Повреждение слизистой оболочки желудка у лабораторных животных вызывали введением водной суспензии индометацина в дозе 40 мг/кг, либо ежедневным внутрижелудочным введением 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты в дозе 90 мг/кг в течение семи дней. Стресс-индуцированную язву желудка вызывали путем погружения крыс, находящихся в перфорированных плексигласовых клетках, ограничивающих движения, в воду с температурой 23°С на 2 часа. После действия ульцерогенного фактора исследуемые препараты вводили в дозах 0,1-0,5 г/кг в течение 2 недель.