Особенности ИЛ-8-продуцирующей способности нейтрофильных гранулоцитов в норме и при патологии (стр. 2 )

При изучении ИЛ-8-секретирующей активности НГ в зависимости от выраженности воспаления и наличия эрозивно-язвенных повреждений СОЖ было выявлено, что существенно повышенный уровень спонтанной продукции ИЛ-8 НГ по сравнению со здоровыми лицами наблюдается у пациентов, как с поверхностным воспалением СОЖ, так и с деструктивным, не отличаясь между этими группами (Табл. 2).

Таблица 2.

Продукция ИЛ-8 нейтрофильными гранулоцитами в зависимости от выраженности воспаления при хроническом активном гастрите (M±m)

Наименование групп	Спонтанная продукция пг/мл/106кл	Спонтанная продукция Кол-во людей (в %)	ЛПС-индуцированная продукция пг/мл/106кл	Индекс стимуляции	% ответа на ЛПС
Здоровые (n=29)	207,2±21,49	89,1	323,1±51,61 1)	1,63±0,3	58,6
Группа 1. Поверхностное воспаление (n=10)	1086±175,31)	100	2088±163,41,2,3)	2,08±0,39	90
Группа 2. Деструктивное воспаление (n=10)	1199±235,9 1)	100	1248±230,71,2,4)	0,94±0,21	50

Примечание: достоверность различий между группами оценивалась с помощью критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони: 1) - р<0,05 в сравнении со спонтанной продукцией ИЛ-8 НГ здоровых лиц; 2) - р<0,05 в сравнении со ЛПС-индуцированной продукцией ИЛ-8 НГ здоровых лиц; 3) - р<0,05 в сравнении со спонтанной продукцией ИЛ-8 НГ1-й группы; 4) - р<0,05 в сравнении с ЛПС-индуцированной продукцией НГ1-й группы.

В то же время нами были показаны статистически значимые различия в ЛПС-индуцированной продукции ИЛ-8 НГ при ХГ в зависимости от наличия эрозивно-язвенных повреждений СОЖ. Установлено, что НГ большинства больных (в 90% случаев) с поверхностным воспалением СОЖ (группа 1) сохраняют способность отвечать на стимуляцию ЛПС, увеличивая концентрацию продуцируемого ИЛ-8 до 2088 пг/мл/106кл., что в 1,9 раз выше спонтанно продуцируемого ИЛ-8 НГ в данной группе и в 6,5 раз выше ЛПС-индуцированной продукции ИЛ-8 НГ здоровых лиц (р<0,05). Индекс стимуляции составил 2,08±0,39. При этом добавление ЛПС в культуральную среду к НГ больных с деструктивным воспалением СОЖ (группа 2) только в 50% случаев незначительно стимулировало увеличение продукции ИЛ-8 НГ, вследствие чего уровень ЛПС-индуцированной продукции ИЛ-8 НГ практически не отличался от спонтанной продукции ИЛ-8 НГ в этой группе - 1248±230,7 и 1199±235,9 пг/мл/106кл, соответственно.

Отсутствие ответа на ЛПС в данной группе с более выраженным и длительным воспалительным процессом может быть обусловлено гиперактивацией НГ и, как следствие, истощением внутриклеточных запасов ИЛ-8. Известно, что деструктивный характер воспаления очень часто связан с типом патогенного штамма Hp [, , 2003; N. Figura, 1996]. Именно при эрозивно-язвенных изменениях СОЖ выявляется высокая частота (79,5%) ульцерогенных штаммов cagA+vacA+-H. Pylori [, , 2004]. Установлено также, что у лиц с более выраженной воспалительной реакцией, ассоциированой с язвенной болезнью, эрозивными процессами в СОЖ гораздо чаще, чем у больных с ХГ выделяются штаммы Нр с выраженной нейтрофил-активирующей способностью [D. Danielsson et al., 2000; H. Rautelin et al., 1993, 1994].

Изучая способность НГ продуцировать ИЛ-8 и их функциональную активность при ГСО, мы выбрали 2 различных варианта гнойно-септической патологии: ОДП, как модель системного воспаления и абсцессы брюшной полости - локальное воспаление, как модель малой гнойной инфекции. Комплексное исследование периферических НГ у этих больных также выявило наличие различных клеточных дисфункций. У большинства пациентов обеих групп наблюдался выраженный нейтрофилез с достоверным увеличением как процентного, так и абсолютного содержания НГ. У пациентов с ОДП было выявлено повышенное содержание (в 1,5 раза) CD11b+-, CD16+-, CD95+-НГ относительно контроля. Абсолютное количество НГ, экспрессирующих вышеуказанные рецепторы, было значительно выше, чем у здоровых лиц: в 3,4, 3,0 и 3,8 раза, соответственно (р<0,001). У пациентов с абсцессами активация рецепторного аппарата НГ была менее выраженной: наблюдались тенденции к увеличению содержания НГ, несущих CD11b - и CD16-рецепторы, а абсолютное количество CD11b+-, CD16+-, CD95+-НГ было достоверно выше контрольных значений в 2,4, 2,1 и 1,8 раза (р1<0,01, р2,3<0,05), соответственно (Табл. 3.). Активация рецепторного аппарата при ГСО сопровождалась повышенной спонтанной активностью мембранных оксидаз, что проявилось выраженной тенденцией к увеличению %ФПК в спонтанном NBT-тесте у пациентов обеих групп. Несмотря на повышенную экспрессию рецепторов адгезии, цитотоксичности и апоптоза и повышенную спонтанную активность NADPH-оксидаз, НГ пациентов с ГСО обладали более слабыми фагоцитарными способностями по сравнению с НГ здоровых лиц: %ФАН был снижен на 21,6% при ОДП и на 31,9% при абсцессе (р<0,05 и р<0,01, соответственно). Нами выявлены различия в активности кислородзависимых микробицидных систем НГ в нагрузочных тестах in vitro с ОЗ между двумя исследуемыми группами в зависимости от тяжести ГСО.

Таблица 3.

Фенотип и функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов пациентов с гнойно-септическими хирургическими осложнениями в сравнении со здоровым контролем

Показатель	Здоровые лица (контроль) (n=29)	Острый деструктивный панкреатит (n=16)	Абсцессы брюшной полости (n=12)
		М±m	P	М±m	P
Нейтрофилы, % Абсолютн. в мм3	55,9±2,81 3071±203,7	76,0±5,4 7302±1246	P=0.002 P=0.000	73,14±5,22 7408±2040	P=0.005 P=0.001
CD11b-НГ, % Абсолютн. в мм3	42,06±3,4 1320±223	61,17±10,79 4429±833,8	P=0.033 P = 0.000	55,57±11,16 3166±890,5	P=0.129 P=0.008
CD16-НГ, % Абсолютн. в мм3	41,56±3,12 1615±241,6	60,83±6,22 4786±935,8	P=0.006 P=0.000	56,71±12,92 3333±1142	Р>0,05 P=0.035
CD95-НГ, % Абсолютн. в мм3	22,94±1,76 625,1±106,2	32,67±5,84 2344±386,9	P=0.040 P=0.000	22,71±9,97 1149±268,1	Р>0,05 P=0.037
ФАН, %	51,39±2,55	40,29±3,74	P=0.031	35,0±2,74	P=0.002
NBTсп, %ФПК	3,16±0,42	5,43±1,59	P=0.061	5,57±1,77	P=0.063
NBTст, %ФПК	8,11±1,21	6,2±3,02	Р>0,05	19,57±6,49	P=0.012
КМ, усл. ед.	3,61±0,76	1,04±0,25	Р>0,05	9,05±5,95	Р>0,05

Примечание: достоверность различий по отношению к контрольной группе оценивалась с помощью t-критерия Стьюдента.

Так, у пациентов с абсцессами (более легкое течение патологического процесса) наблюдалась стимуляция кислородзависимого метаболизма НГ в ответ на ОЗ (в 2,5 раз по сравнению с контролем, р<0,05).В то же время при ОДП (более тяжелое течение), на фоне повышенной спонтанной продукции супероксиданиона, выявлена значительная депрессия кислородзависимых микробицидных систем в ответ на дополнительную стимуляцию НГ in vitro, что количественно отразилось на КМ, который снизился на 71,2% по сравнению с контролем. Таким образом, более тяжелое течение ГСО сопровождалось феноменом дезадаптации НГ, - блокировалась их способность к адекватному ответу на дополнительную нагрузку.

Анализируя ИЛ-8-продуцирующую активность НГ при ОДП, нами была выявлена секреция ИЛ-8 НГ без их дополнительной стимуляции в 100% случаев. При этом у 12 пациентов (75%) средний уровень спонтанной продукции ИЛ-8 НГ составил 378,4±30,69 пг/мл/106кл., что в 1,5 раза превышает аналогичный показатель у здоровых лиц (р<0,001). У 2-х пациентов уровень спонтанной продукции ИЛ-8 был значительно ниже, чем у большинства больных ОДП (58,7 и 63,2 пг/мл/106кл.), а у еще 2-х – существенно выше (2032 и 2070 пг/мл/106кл.). У 11 пациентов (91,7%) с абсцессами спонтанная продукция ИЛ-8 НГ не отличалась от контроля – 239,9±52,92 пг/мл/106кл., только у 1 больного уровень спонтанной продукции ИЛ-8 НГ составил 2500 пг/мл/106кл. Однако, в данной группе, как и при ОДП, спонтанная секреция ИЛ-8 НГ наблюдалась в 100% случаев. Возможно, что выявленное повышение спонтанной продукции ИЛ-8 НГ у большинства пациентов с ОДП обусловлено их предварительной активацией в кровотоке как ЛПС, так и провоспалительными цитокинами, так как известно, что ОДП в отличие от абсцесса, где имеется локально-ограниченный воспалительный процесс, сопровождается системным воспалительным ответом.

Кроме различий в спонтанной продукции, наблюдались также различия и в характере ответа НГ на стимуляцию ЛПС между этими группами (Рис. 3).

Рис. 3. Изменение продукции ИЛ-8 нейтрофильными гранулоцитами под влиянием ЛПС в норме и при гнойно-септических осложнениях. По вертикали: концентрация ИЛ-8 (пг/мл) в супернатанте; 1) - р<0,05; в сравнении со спонтанной продукцией ИЛ-8 НГ здоровых лиц; 2) - р<0,05; в сравнении со спонтанной продукцией ИЛ-8 НГ при абсцессе.

Было установлено, что НГ у 80% пациентов с абсцессами и только у 35,7% с ОДП “отвечали” на ЛПС, в отличие от 58,6% в контроле. В связи с этим, средний уровень ЛПС-индуцированной секреции ИЛ-8 НГ у пациентов с абсцессами, превышал спонтанную в 1,7 раз и составил 402,6±47,07 пг/мл/106кл. А так как у большинства пациентов с ОДП НГ реагировали не увеличением продукции ИЛ-8 в ответ на ЛПС, а ее снижением, то средний уровень ЛПС-индуцированного ИЛ-8 при ОДП не отличался от спонтанного у данной категории больных, составив 363±42,33 пг/мл/106кл.

Наши данные совпадают с результатами, полученными ранее Marie C. et al. [1998], где показана сниженная продукция ИЛ-8 НГ в ответ на ЛПС при развитии синдрома системного воспалительного ответа инфекционного и неинфекционного генеза. Установлено, что не инфекционный, а именно воспалительный компонент септического синдрома является существенным для изменения механизма синтеза ИЛ-8 НГ. Предполагают, что одной из причин редуцированного уровня высвобождения ИЛ-8 НГ в ответ на ЛПС при системном воспалении является находящийся в кровотоке ИЛ-10, обладающий супрессирующим воздействием на функционирование НГ [F. Randow et al., 1995].

Одной из задач настоящего исследования входило изучение влияния пептидов: γ-D-глутаминил-L-триптофана (Бестима, БС) и глюкозаминилмурамилдипептида (ГМДП), являющихся основой эффективных в отношении НГ иммунотропных препаратов, на секрецию ИЛ-8 НГ в норме и при патологии в эксперименте in vitro для возможного предварительного обоснования их применения при дисфункциях НГ, связанных с их цитокин-секретирующей активностью.

Изучая влияние БС на продукцию ИЛ-8 НГ здоровых лиц, мы установили, что добавление пептида в инкубационную среду без предварительной ЛПС-активации НГ не влияло на уровень продуцируемого ИЛ-8 (Рис. 4).

Рис. 4. Влияние Бестима на продукцию ИЛ-8 нейтрофильными гранулоцитами здоровых лиц. По вертикали: концентрация ИЛ-8 в пг/мл/106кл. Контроль – спонтанная продукция ИЛ-8; ЛПС – 10 нг/мл; Бестим - 0,1 мкг/мл.

В то же время было отмечено увеличение продукции ИЛ-8 НГ при добавлении БС после предварительного 30-минутного праймирования НГ здоровых лиц ЛПС. При этом уровень продуцируемого ИЛ-8 после добавления БС значительно превышал значения, полученные только при добавлении ЛПС в инкубационную среду: концентрация ИЛ-8 возрастала в среднем до 308,2±65,53 пг/мл, что превышало спонтанную продукцию ИЛ-8 НГ в 2,3 раза (p<0,05), а ЛПС-индуцированную продукцию без БС в 1,7 раз. При этом НГ секретировали ИЛ-8 в 100% случаев. Таким образом, БС, не влияя на продукцию ИЛ-8 интактными НГ здоровых лиц, способен оказывать стимулирующее воздействие на ЛПС-индуцированную продукцию ИЛ-8 НГ.

При изучении влияния БС на продукцию ИЛ-8 НГ при патологии установлены следующие особенности (Табл. 4). Аналогично тому, что было отмечено у здоровых лиц (контроль), при ГСО (ОДП, абсцессы) БС проявлял свое действие только после предварительной ЛПС-стимуляции НГ, не оказывая собственного влияния на ИЛ-8-продуцирующую способность клеток. Однако в отличие от контроля, где наблюдалось усиливающее действие БС на ЛПС-индуцированную продукцию ИЛ-8 НГ, при ГСО БС проявлял супрессирующий эффект. У больных ОДП было выявлено снижению продукции ИЛ-8 НГ в 1,9 раз (р<0,05) при добавлении БС после ЛПС. При абсцессах также наблюдалось выраженное и статистически значимое снижение ЛПС-индуцированной продукции ИЛ-8 НГ под влиянием БС: при введении ЛПС в инкубационную среду продукция ИЛ-8 НГ составила 402,6±87,07, что в 1,7 выше спонтанной, а добавление БС после ЛПС снижало концентрацию ИЛ-8 в супернатанте до 189,1±41,01 пг/мл/106 (р<0,05).

Таблица 4.

Влияние бестима на спонтанную и ЛПС-индуцированную продукцию ИЛ-8 нейтрофильными гранулоцитами при патологии (М±m)

№ п/п	Группы	1. Контроль n=10	2. ОДП n=10	3. Абсцесс n=11	4. Хронический гастрит n=10
1.	Спонтанная	1.1 135,6±43,47	2.1 369,5±26,261)	3.1 239,9±32,92	4.1 1228±151,91)
2.	ЛПС-индуцированная (10 нг/мл)	1.2 181,8±48,3	2.2 387,7±69,65	3.2 402,6±47,073)	4.2 1485±371,21,5)
3.	Бестим (0,1 мкг/мл)	1.3 124,2±73,89	2.3. 447,5±78,04	3.3. 229,9±61,73	4.3 772,3±83,984,5)
4.	ЛПС + Бестим	1.4. 308,2±65,531)	2.4. 199,6±33,072,6)	3.4 189,1±41,017)	4.4. 1507±536,45)

Примечание: достоверность различий в группах оценивалась с помощью критерия Стьюдента с поправкой Бонферроне: 1)-р<0,05 в сравнении со спонтанной продукцией ИЛ-8 НГ контрольной группы (группа 1.1.); 2)-р<0,05 в сравнении со спонтанной продукцией ИЛ-8 НГ при ОДП (группа 2.1.); 3)-р<0,05 в сравнении со спонтанной продукцией ИЛ-8 НГ при абсцессе (группа 3.1.); 4)-р<0,05 в сравнении со спонтанной продукцией ИЛ-8 НГ при хроническом гастрите (группа 4.1.); 5)-р<0,05 в сравнении с ЛПС-индуцированной продукцией ИЛ-8 НГ контрольной группы (группа 1.2.); 6)-р<0,05 в сравнении с ЛПС-индуцированной продукцией ИЛ-8 НГ при ОДП (группа 2.2.); 7)-р<0,05 в сравнении с ЛПС-индуцированной продукцией ИЛ-8 НГ при абсцессе (группа 3.2).

В то же время при ХГ, где уровень как спонтанной, так и ЛПС-индуцированной продукции ИЛ-8 НГ значительно превышает аналогичные показатели здоровых лиц, БС без предварительного праймирования ЛПС на 60% супрессирует продукцию ИЛ-8 НГ: 1228±151,9 пг/мл/106 составляла спонтанная продукция ИЛ-8 НГ при ХГ и 772,3±83,98 пг/мл/106 после добавления БС в инкубационную среду (р<0,05). При этом БС не оказывает никакого влияния на ЛПС-индуцированную продукцию ИЛ-8 НГ при данной патологии.