Роль молекулярно-генетических маркеров в определении тактики хирургического лечения больных раком желудка (стр. 3 )

Точка забора I-o	Точка забора III-o	ЖКБ	р
31,0 ± 4,8	32,6±4,9	30,6± 3,0	>0,05

Отсутствие достоверной разницы между показателями метилирования генов RASSF1A и MLH1, уровнями экспрессии генов hTERT, металлопротеиназ ММР7, ММР9, BIRC5, PTGS2, а также активностью теломеразы в исследуемой группе (больные раком желудка) в точках I, III-о и соответствующими показателями в группе сравнения (больные ЖКБ) подтверждает, что объемы операции (субтотальная дистальная резекция, или проксимальная резекция желудка), выполняемых при местно-распространенном росте опухоли, являются правомочными, поскольку выполняются в пределах не только морфологически неизмененных тканей, но и на фоне молекулярно-генетических изменений, несущих лишь возможный потенциал, который не реализован в развитии опухолевого процесса (экспрессии генов, синтезе белка).

Оценка статистических показателей диагностической ценности молекулярно-генетических маркеров рака желудка (Таблица 11).

Таблица 11.Чувствительность и специфичность, положительная и отрицательная предиктивная оценка, точность, отношение правдоподобия положительного и отрицательного результатов (ОППР), отношение шансов диагностического теста (ОШДТ) в определении диагностической ценности молекулярно-генетических маркеров рака желудка.

	Чувс-ть	Спец-ть	ПоложитПО	ОтрицПО	Точность	ОППР	ОПОР	ОШДТ
MLH1	16,3	98,0	100,0	58,0	53,8	8,15*	0,85	9,6
RASSF1A	15,9	98,0	100,0	57,5	52,6	7,95*	0,86	9,2
BIRC5	69,8	87,5	78,6	60,9	79,5	5,58*	0,35**	15,9
MMP7	84,9	87,5	75,0	75,7	89,7	6,79*	0,17*	39,9
hTERT	62,3	99,0	100,0	55,5	74,4	62,3*	0,38**	163,9
АТ	66,7	97,0	100,0	58,1	76,9	22,2*	0,34**	65,3

* Наиболее полезные для диагностики тесты
** Полезные для диагностики тесты

C учетом оценки статистических показателей диагностической ценности маркеров экспрессию hTERT, MMP7, BIRC5, а также определение активности теломеразы целесообразно использовать для дооперационной дифференциальной диагностики у пациентов с предварительным диагнозом рака желудка.

Выводы

1.  Для адекватной оценки молекулярно-генетических изменений слизистой у больных раком желудка целесообразно использовать комплексную панель, включающую маркеры различных стадий канцерогенеза и пригодную как на этапах диагностики, так и лечения. Разработанная панель молекулярно-генетических маркеров адекватна для оценки изменений слизистой у больных раком желудка. Она включает определение частоты метилирования генов-супрессоров CDH1, RASSF1А, MLH1, N33, DAPK, экспрессию генов металлопротеиназ MMP7, ММP9, BIRC5, PTGS2, hTERT, а также активности теломеразы. Интенсивность метилирования генов, показатели экспрессии и активность теломеразы достоверно выше в опухоли, чем в неопухолевой слизистой желудка группы сравнения.

2.  Достоверные различия показателей молекулярно-генетических маркеров в клинических подгруппах можно использовать в качестве прогностических показателей течения рака желудка. С увеличением размера опухоли до 2-4 см достоверно возрастает степень метилирования почти всех генов, кроме DAPK, а также экспрессия BIRC5, ММР7, PTGS2, и активность теломеразы. Аномальное метилирование генов N33 и CDH1, увеличение экспрессии BIRC5, ММР7, PTGS2 являются маркерами негативного прогноза для рака желудка, и достоверно связаны с генерализацией опухолевого процесса, повышаются при генерализованном раке по сравнению с ранним и местно-распространенным раком. Метилирование гена DAPK напротив, является маркером благоприятного прогноза, и показатель метилирования снижается при развитии метастазов в лимфатические узлы. Показатели экспрессии генов BIRC5 и hTERT при интестинальном типе рака по отношению к диффузному достоверно выше. Метилирование CDH1, напротив, характерно для опухолей диффузного типа.

3.  Частота метилирования генов RASSF1А, MLH1, экспрессии генов hTERT, MMP7, BIRC5, активности теломеразы в опухоли желудка достоверно выше (p<0,01), чем в морфологически нормальной окружающей слизистой желудка. Высокий уровень метилирования генов CDH1, N33, DAPK в морфологически нормальной ткани, пограничной с опухолевой, не случаен и он косвенно указывает на вовлеченность этой ткани в предопухолевую трансформацию слизистой оболочки желудка.

4.  Для предоперационной диагностики рака желудка с использованием молекулярно-генетических маркеров целесообразно использовать биопсийный материал, полученный в результате дооперационного эндоскопического исследования. Количество ДНК, РНК и белка, получаемое из эндоскопического образца, достаточно для проведения серии молекулярно-генетических исследований.

5.  Экспрессионные молекулярно-генетические маркеры hTERT, MMP7, BIRC5, а также определение активности теломеразы в биоптатах слизистой оболочки желудка на дооперационном этапе, вместе с клиническими, лабораторными и инструментальными показателями позволяют уточнить показания к операции. Субтотальная дистальная и проксимальная резекции желудка при ограниченном антральном или проксимальном росте опухоли, являются правомочными, поскольку выполняются в пределах не только морфологически неизмененных тканей, но и на фоне молекулярно-генетических изменений, несущих лишь возможный потенциал, который не реализован в развитии опухолевого процесса (экспрессии генов, синтезе белка).

Практические рекомендации

1.  Параллельно с морфологическим исследованием тканевого материала, полученного при эндоскопическом исследовании, у пациентов с предварительным диагнозом рака желудка, рекомендуется проводить анализ молекулярно-генетических маркеров. При этом возможно получение дополнительной диагностической информации в сомнительной клинической ситуации.

2.  Для дооперационной дифференциальной диагностики у пациентов с предварительным диагнозом рака желудка могут быть использованы следующие молекулярно-генетические маркеры - экспрессия генов ММР7, hTERT, BIRC5 и активность теломеразы.

3.  Определение экспрессии генов hTERT, BIRC5, а также активности теломеразы полезно в диагностике рака, а определение экспрессии ММР7 наиболее перспективно.

4.  Экспрессия гена hTERT показывает наибольшую вероятность злокачественного заболевания у пациентов с положительным результатом теста.

5.  Исследование аномального метилирования генов CDH1, RASSF1А, MLH1, N33, DAPK, экспрессии генов ММР9, PTGS2 рационально проводить для оценки состояния слизистой оболочки после резекции желудка по поводу ракового процесса при динамическом наблюдении за больными с целью исключения истинного рецидива заболевания.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1.  , , Теломеразная активность и ее связь с экспрессией транскрипционных вариантов гена HSP90α и гена каталитической субъединицы теломеразы при опухолевых заболеваниях желудка и кишечника // Молекулярная медицина. – 2009 – №6. – С.37-41.

2.  , , Маркеры генетической нестабильности в диагностике рака желудка // Молекулярно-генетическая диагностика злокачественных опухолей человека: Материалы II Российского симпозиума с международным участием – Москва, 2009. – С.34.

3.  , , Маркеры генетической нестабильности в диагностике рака желудка // Вестник РОНЦ им. РАМН. – 2009 – Т. 20. – № 1. –С. 109.

4.  , , и др. Система молекулярных маркеров в диагностике рака желудка // Молекулярные основы наследственной патологии: Материалы VI съезда Российского общества медицинских генетиков – Ростов-на-Дону, 2010. – С.127.

5.  , , Исследование уровня экспрессии генов сервивина и ММР-7 для диагностики онкопатологии желудка // Молекулярная медицина и биобезопасность: Материалы VII международной конференции – Москва, 2010. – С.46-47.

6.  , , и др. Первый опыт использования маркеров молекулярно-генетической нестабильности слизистой в диагностике рака желудка // Вестник хирургической гастроэнтерологии. – 2010. –№3. – С. 84.

7.  , , и др. Использование маркеров молекулярно-генетической нестабильности слизистой в диагностике рака желудка // Вестник СПбГУ. – Приложение к научно-теоретическому журналу –2010.– С.204.

8.  , Использование молекулярных и генетических маркеров, определяемых в слизистой, для диагностики рака желудка // Здоровье и образование в XXI веке: Материалы ХI международного конгресса – Москва, 2010. – С.47.

9.  , , Исследование активности теломеразы при онкопатологии желудка // Биомедицинская химия. – 2010 – Т.56. – №5. – С. 602-608.

10.  Молекулярные и генетические маркеры в диагностике рака желудка // Хирург. – 2010 – №9. – С.52–59.

11.  , , и др. Молекулярно-генетические маркеры в диагностике рака желудка // Вестник РГМУ. – 2011 – Спецвыпуск – №1 – С.342-343.

12.  , , и др. Определение маркеров в диагностике рака желудка // Материалы ХI съезда хирургов Российской Федерации. 25-27 мая 2011: – Волгоград, 2011. – С. 380.

13.  L. V. Svinareva, A. I. Glukhov, O. V. Zimnik, I. kov, T. V. Khorobrykh, V. I. Shvets The study of telomerase activity in gastric cancer // Вiochemistry (Moscow) Supplement series B: Biomedical chemistry. – 2011. – Vol.5. – №2. – Р. 188–192.