СИСТЕМА АККРЕДИТАЦИИ ЛАБОРАТОРИЙ,
ОСУЩЕСТВЛЯЮЩИХ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ
ИССЛЕДОВАНИЯ, ИСПЫТАНИЯ
Испытательная лаборатория водной микробиологии
Лимнологического института СО РАН
УТВЕРЖДАЮ Руководитель ИЛ __________ «____»_______________200__г. |
Процедура управления качеством испытаний
Общие положения
Ведущим аспектом деятельности современной лаборатории является разработка Системы качества и обеспечение ее функционирования.
Система качества - это совокупность организационной структуры, методик, процессов и ресурсов, необходимых для осуществления общего руководства качеством.
Система качества охватывает широкий спектр позиций, начиная от нормативно – технической документации, всесторонне регламентирующей деятельность лаборатории, ее планировки и технического оснащения, квалификации и численности и расстановки кадров – до организации внутреннего контроля качества выполняемых анализов.
В своей деятельности испытательная лаборатория водной микробиологии Лимнологического института СО РАН (ЛИН СО РАН) руководствуется следующими внутренними документами: «Положение об аккредитованной испытательной лаборатории» и «Руководство по качеству аккредитованной испытательной лаборатории»
Внутренний контроль качества микробиологических исследований – это комплекс выполняемых лабораторией мероприятий и процедур, направленных на обеспечение и контроль стабильности требуемых условий развития искомого микроорганизма, а также предупреждение неблагоприятного воздействия факторов, возникающих в процессе подготовки, выполнения и оценки результатов анализа, способных повлиять на достоверность результата.
Внутренний контроль в испытательной лаборатории водной микробиологии ЛИН СО РАН осуществляется в соответствии со следующими нормативными документами:
ü ГОСТ Р ИСО/МЭК «Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий»
ü ГОСТ Р ИСО 5725 – ч. 1-6 – 2002 под общим названием «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений»
ü МУ 2.1.4.1057-01 «Организация внутреннего контроля качества санитарно-микробиологических исследований воды»
ü МУК 4.2.1018-01 «Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды»
Методические указания представляют собой свод отдельных методик и процедур контроля качества, выполняемых на различных этапах микробиологических исследований, и направлены на их унификацию в целях получения надежных и сопоставимых результатов анализа.
Документальное оформление результатов проведенных контрольных процедур (регистрация) осуществляется в журналы контроля и учета. Для установления периодичности проведения проверок составляются графики на квартал.
Цели (и задачи) внутреннего контроля качества:
1. Обеспечение условий проведения анализов, устранение известных влияющих факторов (подтверждение соблюдения установленных требований).
2. Управление качеством (поддержание процесса в статистически управляемом состоянии).
3. Обеспечение требуемой точности результата анализа (подтверждение соответствия показателей точности установленным требованиям, подтверждение правильности применения методики, оценка пригодности методики).
4. Установление окончательного результата (проверка приемлемости результатов).
5. Подтверждение компетентности (подтверждение заявляемых лабораторией показателей точности).
Основные направления организации внутреннего контроля качества:
1. Контроль за соблюдением требований к условиям проведения анализа (лабораторные помещения, воздушная среда, температурные режимы инкубации и хранения, режимы дезинфекции и стерилизации, подготовка лабораторной посуды, поверка и аттестация приборов и оборудования, контроль стерильности фильтровальных установок).
2. Выполнение регламентированных процедур ведения тестовых культур.
3. Контроль качества питательных сред.
4. Контроль качества мембранных фильтров.
5. Контроль качества дистиллированной воды.
6. Оценка достоверности качественного результата путем использования заведомо положительных и отрицательных контролей.
7. Оценка доверительных границ полученного количественного результата.
Систематический анализ результатов контрольных процедур в целях совершенствования руководства по качеству.
Структура внутреннего контроля качества по объектам контроля
| |
| |
| |
| |
 | |
| |
| |
|
 |
 |
 |
Помещения |
Область контроля
| Периодичность | Схема, методика выполнения | Исполнитель | |
Температура | 2 раза/день | Снимаются показания термометров | Уборщик | ||
Влажная уборка помещений «чистой» зоны с применением моющих средств | 1 раз/день | мытье | Специалист - микробиолог | ||
Генеральная уборка помещений «чистой» зоны с применением моющих средств | 1 раз/месяц | мытье | Уборщик | ||
Влажная уборка помещений «заразной» зоны с применением дезинфицирующих средств | 1 раз/день | мытье | Специалист – микробиолог, согласно графика | ||
Генеральная уборка помещений «заразной» зоны с применением дезинфицирующих средств | 1 раз/неделю | мытье | Специалист - микробиолог | ||
Воздух боксов и посевных комнат на обсемененность | перед началом проведения работ | Седиментационный метод: в 2-х контрольных точках комнаты 2 открытые чашки с ПА на 15 минут 24 ч 370С
| Специалист - микробиолог | ||
Смывы с поверхностей и оборудования | 1 раз/месяц | Смыв с поверхности 10 см2 : Стерильный тампон 24 ч Среда Эндо
370С идентификация
«не обнаружено» на принадлежность к ОКБ, ТКБ | Специалист - микробиолог | ||
Контроль времени экспозиции и эффективности бактерицидных ламп | 1 раз/квартал, при проростах воздуха больше нормы | 2 ч ПА - открыть на15 минут - до экспозиции бактерицидной лампы 2 ч ПА – открыть на 15 минут после экспозиции бактерицидной лампы
370С эффективности | Специалист - микробиолог | ||
Оборудование |
Область контроля
| Периодичность | Схема, методика выполнения | Исполнитель |
|
Поверка измерительного оборудования и аттестация испытательного оборудования (приборы, термостаты, фотометры, разновесы, весы, манометры, мановакуумметры, термометры, дозаторы и т. п.) | 1 раз/год согласно графика на год | --- | Контроль осуществляется сотрудниками ЦСМ г. Иркутска согласно договора оказания услуг |
| |
Температурный режим в холодильниках | 1 раз/неделю | Снимаются показания контрольных термометров | Специалист-микробиолог |
| |
Температурный режим в термостатах | 1 раз/день | Снимаются показания контрольных термометров | Специалист - микробиолог |
| |
Контроль работы паровых стерилизаторов: - химический контроль - биологический контроль | - каждый цикл стерилизации - 2 раза/год | Химический: в 5 контрольных точках стерилизационной камеры помещаются бумажные индикаторы стерилизации в зависимости от выбранного режима (стериконты, стеритесты, фарматесты и т. д.) - стерилизационная выдержка - по окончании цикла стерилизации сравнить цвет эталона с элементом индикатора, при совпадении цветов вклеить бумажный индикатор в журнал. Биологический: в 5 контрольных точках стерилизационной камеры поместить коммерческие биотесты стерилизационная выдержка пробирки поместить в термостат (550С, 48ч) по окончании инкубации сравнить с отрицательным контролем (не должно быть проростов) | Химический: сотрудник, осуществляющий стерилизацию Биологический: специалист-микробиолог |
| |
Оборудование |
Область контроля
| Периодичность | Схема, методика выполнения | Исполнитель |
|
Контроль стерильности флаконов для отбора проб | 1 раз/квартал | Общая обсемененность: в 3 флакона от партии простерилизованной посуды внести питательный бульон (ПБ) ПБ (V ПБ = 20% от V флакона) → смыв → 370С, 48ч: а) наличие роста → «не стерильно», б) отсутствие роста → ОМЧ ( с каждого флакона) на ПБ по 1 мл на 2ч ПА, 48 ч, 370С. При отсутствии бактериального роста на чашках с питательным агаром выдается результат «стерильно»; при наличии роста – «не стерильно», вся партия посуды вновь подвергается стерилизации, выясняются причины. Определение спор сульфитредуцирующих клостридий (ССРК): в 3 флакона от партии простерилизованной посуды внести стерильную водопроводную воду (СВВ) СВВ (V СВВ = 20% от V флакона) профильтровать смыв с флакона → ЖСА, 24ч, 440С наличие роста – « не стерильно» рост отсутствует – «стерильно» | Специалист-микробиолог |
| |
Контроль стерильности фильтровальных установок | в день проведения работ (в начале посева методом мембранной фильтрации) | Фламбируют воронки и столики фильтровального аппарата 96% спиртом. После сгорания фильтра и остывания воронок на основание держателя помещают стерильным пинцетом стерильный фильтр, одевают воронку. При отключенном вакууме воронку заполняют стерильной водопроводной водой так, чтобы она обмыла стенки воронки (V воды = ½ V воронки), профильтровать. Перенести на чашку с ПА (24ч, 370С). Рост микроорганизмов свидетельствует о неэффективной обработке ФУ. | Исполнитель анализа |
| |
N - не более 3 КОЕ
1 % пептонная вода 37 0С 24 ч
N выросших колоний
24 ч расчет бактерициднойПитательные среды |
Область контроля
| Периодичность | Схема, методика выполнения | Исполнитель |
|
Контроль документации и визуальный контроль, рекламация (возврат продукции) | при поступлении новой партии, нарушении сроков хранения | Проверяется целостность упаковки (визуально), наличие сопроводительной документации (сертификата соответствия, паспорта, инструкции по применению, этикеток на упаковках) | Специалист-микробиолог |
| |
Контроль условий хранения: - сухих питательных сред - готовых питательных сред | 2 раза/неделю | Снимаются показания контрольных термометров (t = 0-250С). На готовых средах смотрят маркировку с указанием даты приготовления, срок хранения определяется изготовителем (в сопроводительных документах), температура хранения в холодильниках 2-80С, допускается хранение некоторых сред при комнатной температуре | Специалист-микробиолог, согласно графика |
| |
Контроль питательных сред на этапе приготовления (рН, внешний вид, стерильность, качественный контроль биологических свойств) | каждую варку | рН определяется у сред, имеющих данное указание на этикетке с помощью универсальной индикаторной бумаги; внешний вид (цвет, прозрачность, консистенция), должен соответствовать описанию изготовителя - определяется визуально; стерильность (отсутствие контаминации) определяется путем инкубации чашки или пробирки с исследуемой средой в термостате, при температуре и в течение времени, определенных для этих сред методическими указаниями по исследованию воды, при окончании срока инкубации в исследуемых питательных средах должен отсутствовать рост микроорганизмов | Сотрудник, осуществляющий варку |
| |
Количественный контроль биологических свойств питательных сред (чувствительность, скорость роста, процент извлекаемости) | при поступлении новой партии среды, при решении вопроса о продлении сроков годности сред, при нарушении условий хранения | «чувствительность» и «скорость роста»: на плотные среды засевают по 0,1 мл из 5,6,7,8 разведения (по 3 чашки среды на разведение), в жидкие – по 1мл из 4,5,6,7 разведений (по 3 пробирки для каждого разведения). 24ч визуально скорость роста оценивают для 370С плотных сред ч/з 12 и 24 ч, для жидких – через 3,6,12 24 ч инкубации; «процент извлекаемости» (всхожести): осуществляют посев на контрольную (ранее проверенной серии) и исследуемую среду по 0,1 мл из 5,6,7,8 разведения (по 5 чашек на разведение). Среда признается пригодной при значении не менее 80%. (вычисляется по формуле, приведенной в МУ 2.1.4.1057-01) | Специалист-микробиолог |
| |
Контроль сред на этапе использования: постановка « + » и « - » контролей в процессе идентификации микроорганизмов | каждый раз при использовании сред | Постановку положительного контроля осуществляют путем внесения одной петли агаровой культуры тестового штамма Е. сoli М17 в чашку (пробирку) с используемой средой для идентификации. Отрицательным контролем служит чашка (пробирка) с аналогичной средой без посева. Обе чашки (пробирки) маркируются и помещаются в термостат вместе с посевами. | Исполнитель анализа |
| |
Посуда |
Область контроля
| Периодичность | Схема, методика выполнения | Исполнитель | |
Контроль стерильности флаконов для отбора проб | 1 раз/квартал | См. раздел Оборудование | Специалист-микробиолог | ||
Дистиллированная вода | Контроль качества дистиллированной воды | 1 раз/месяц каждую новую партию | Оценивается электропроводность (лаб. гидрохимии ЛИН СО РАН) – не более 3 мкС/см. Показатели по ГОСТ 6709-72 Определяется рН (с помощью рН-метра) | Лаборант химического анализа Специалист-микробиолог, согласно графика | |
Мембранные фильтры | Контроль качества мембранных фильтров Контроль стерильности мембранных фильтров | при поступлении новой партии (для каждой серии) при выполнении анализа методом мембранной фильтрации | Эффективность определяется путем сравнения числа колоний микроорганизмов, выросших на полноценной питательной среде в результате прямого поверхностного посева суспензии культуры Е. сoli М17, и числа колоний, выросших на этой же среде в результате посева методом мембранной фильтрации. За 2 дня до исследования подготавливают тест-культуру, определяют посевную дозу (см. раздел Питательные среды); Стерильность мембранных фильтров определяется при их инкубировании на питательной среде без посева. Эффективность мембранных фильтров: В день исследования выполняют параллельные посевы суспензии тест-культуры способом мембранной фильтрации через исследуемые мембранные фильтры и прямым (поверхностным) способом. Метод фильтрации ( 5 повторностей): фламбировать контроль поместить прибор → прибора → мембранный фильтр → предварительно влить влить содержимое 20-30 мл стерильного → пробирки с посевной дозой →
ополоснуть пробирку 10 мл при профильтровать → разбавителя, профильтровать → включенном вакууме ополос нуть воронку 20-30 мл стер. разбавителя → перенести фильтр на чашку с ПА 370С, 24ч → подсчитать число типичных колоний на каждом фильтре Прямой посев (5 повторностей): используют материал в чашку с ПА, внести из той же пробирки, посевную дозу, 24ч что и для метода м. ф. → распределить шпателем → 370С → вычислить среднее арифметическое. Рассчитать % удержания (см. МУ 2.1.4.1057-01). Пригодными признают фильтры с процентом удержания не менее 80% | Ведущий инженер-лаборант Исполнитель анализа | |
Реактивы |
Область контроля
| Периодичность | Схема, методика выполнения | Исполнитель | |
Контроль работы теста на оксидазу | каждый раз при постановке оксидазного теста | СИБ-оксидазу (диски, полоски и др.) поместить в стерильную чашку Петри, смочить дистиллированной водой. В качестве «+» контроля петлей нанести на СИБ культуру Pseudomonas aeruginosa, в качестве «-» контроля - культуру Е. сoli М 17. | Исполнитель анализа (при идентификации колоний) | ||
Соблюдение условий хранения реактивов Сроки хранения приготовленных растворов. | 2 раза/неделю 2 раза/месяц | Снимаются показания термометров. Проверяется наличие маркировки (даты приготовления) на банках с приготовленными реактивами. | Специалист-микробиолог, согласно графика Специалист-микробиолог | ||
Дезинфицирующие средства
| Наличие и пригодность дез. средств | 1 раз/неделю, при поступлении нового дез. средства, или новой серии | Проверяется наличие сопроводительной документации (сертификат соответствия, лицензия, инструкция по применению). Для определения пригодности готовится раствор определенной концентрации, которую определяют с помощью дезиконтов производства НПФ «Винар». | Специалист-микробиолог | |
Проверка правильности приготовления дезинфицирующих средств, соблюдение дез. режимов | 1 раз/неделю | Применяются дезиконты НПФ «Винар» (ДХИ, НМ и другие, в зависимости от применяемого дез. средства), согласно прилагаемой инструкции. | Специалист-микробиолог | ||
разбавителяЭталонные культуры
Е. сoli М 17 E. coli K12 F+STRR Ps. aeruginosa Бактериофаг MS2 |
Область контроля
| Периодичность | Схема, методика выполнения | Исполнитель |
Восстановление лиофилизированных культур | 1 раз/год | Согласно МУК 4.2.1018-01 | Лицо, ответственное за ведение рабочей коллекции, назначенное приказом института | |
Восполнение запасов рабочей культуры | 1 раз/квартал | Согласно МУК 4.2.1018-01 | Лицо, ответственное за ведение рабочей коллекции, назначенное приказом института | |
Контроль видовых и видовых свойств | Каждый раз при восстановлении лиофилизированной культуры и при восполнении запасов рабочей культуры | Согласно МУК 4.2.1018-01 | Лицо, ответственное за ведение рабочей коллекции, назначенное приказом института | |
Подготовка культур для целевого использования в анализе | Е. сoli М17 – ежедневно Ps. aeruginosa – при необходимости выполнения биохимических тестов E. coli K12 F+STRR Бактериофаг MS2 – при определении колифагов | Согласно МУК 4.2.1018-01 | Лицо, ответственное за ведение рабочей коллекции, назначенное приказом института передает исполнителю анализа с составлением акта необходимые штаммы. | |
Использование культур в анализе | при необходимости | Согласно МУК 4.2.1018-01 | Исполнитель анализа |
Зам. заведующего ИЛ _______________________
