Препарат ФРН оказывал наиболее слабое влияние из всех изученных препаратов, а на 7-е сутки он практически не обладал защитным эффектом. Препарат ПБЦА-НЧ превосходил его по активности на 7-й и 14-й день на 18% и 2% соответственно. Наиболее отчетливое протекторное действие на память оказывал препарат ФРН+ПБЦА+ПС80 на протяжении всего срока эксперимента. Он значительно превосходил по активности другие препараты, увеличивая реакцию избегания на 7-е сутки после инсульта до 70%, а на 1-е и 14-е сутки он полностью на 100% устранял посттравматическую амнезию (табл. 4).
Таким образом, препарат ФРН+ПБЦА+ПС80 на модели УРПИ обладал наибольшей активностью по устранению амнезии, вызванной у крыс геморрагическим инсультом в сравнении со другими исследованными препаратами фактора роста нервов.
Таблица 4.
Изучение влияния препаратов ФРН на обучение и воспроизведение рефлексов методом УРПИ крыс на модели геморрагического инсульта(ГИ).
Группа животных | Обучение | Воспроизведение рефлекса | |
Латентное время рефлекса(мин.) | Латентное время рефлекса(мин.) | Количество крыс не зашедших в темную камеру, % | |
1-е сутки | |||
ЛО | 23,81 ± 15,10 | 180,00 ± 0,00 | 100 |
ГИ | 84,89 ± 17,33# | 180,00 ± 0,00 | 100 |
ФРН | 76,20 ± 24,75 | 180,00 ± 0,00 | 100 |
ФРН+ПБЦА-НЧ | 71,35 ± 20,04 | 180,00 ± 0,00 | 100 |
ФРН+ПБЦА+ ПС80 | 21,00 ± 14,80* | 180,00 ± 0,00 | 100 |
7-е сутки | |||
ЛО | 180,00 ± 0,00 | 100 | |
ГИ | 127,63 ± 14,19 # | 57# | |
ФРН | 145,70 ± 22,34 | 57 | |
ФРН+ПБЦА-НЧ | 176,50 ± 23,50 | 75 | |
ФРН+ПБЦА +ПС80 | 180,00 ± 0,00* | 100 * | |
14-е сутки | |||
ЛО | 180,00 ± 0,00 | 100 | |
ГИ | 94,00 ± 25,45 | 35 # | |
ФРН | 165,00 ± 30,88 | 55 | |
ФРН+ПБЦА-НЧ | 120,55 ± 30,50 | 57 | |
ФРН+ПБЦА+ ПС80 | 180,00 ± 0,00* | 100 * |
# -достоверность отличий группы ложнооперированных животных(ЛО) от группы животных с геморрагическим инсультом (ГИ) (P<0,05);
* - достоверность отличий групп, получавших препараты ФРН от группы с ГИ (Р<0,05).
Количественное определение ФРН в тканях мозга экспериментальных животных.
Исследование проведено на 96 белых беспородных мышах-самцах, которых разделили на 6 групп (по 16 животных в каждой).
Животным внутривенно вводили следующие лекарственные формы:
Группа % раствор натрия хлорида (0, 2 мл)
Группа 2 - 1% суспензия ПБЦА-НЧ (0, 2 мл)
Группа 3 - раствор ФРН (5 мкг/животное в 0, 2 мл)
Группа 4 - раствор ФРН (5мкг/животное) в сочетании с 1% раствором ПС-80
Группа 5 - ФРН (5 мкг/животное), сорбированный на ПБЦА-НЧ
Группа 6 - ФРН (5 мкг/животное), сорбированный на ПБЦА-НЧ, покрытых ПС-80.
Полученные результаты приведены на рис. 5.
При измерении концентрации ФРН в тканях мозга экспериментальных животных, взятых на 15 минуте после введения тестируемых веществ и комбинаций, статистически достоверной разницы между показателями различных групп не наблюдали. В результате измерения концентрации ФРН в образцах тканей мозга экспериментальных животных, взятых на 45 минуте после введения тестируемых веществ и комбинаций, отметили статистически достоверное увеличение уровня ФРН в ЦНС мышей, получавших ФРН, сорбированный на ПБЦА-наночастицах, покрытых ПС-80, в сравнении с группой контроля (группа животных, получавших 0,9% раствор натрия хлорида) . В группе 2 (ПБЦА-наночастицы) увеличения эндогенной концентрации ФРН по сравнению с группой 1 не наблюдали. В группе 3 животных, получавших водный раствор ФРН, отмечалось наименьшее из всех опытных групп увеличение ФРН в ЦНС. На 45 мин в группах 4 (ФРН-ПС80) и 5 (ФРН-НЧ) отметили устойчивую тенденцию к росту уровня ФРН в тканях мозга мышей, которое было статистически значимо. Вместе с тем, наибольшую концентрацию ФРН в тканях мозга из всех исследованных образцов ФРН создавала комбинация ФРН, сорбированного на ПБЦА-НЧ, покрытых ПС-80. При этом содержание фактора роста нервов в 6-й группе по сравнению с контролем достоверно (P<0,05) увеличилось в 6,8 раза.
Сходные закономерности от введения препаратов ФРН, как и на 45 минуте отмечались в изменениях концентрации ФРН в образцах тканей мозга, взятых на 90 минуте. При измерении концентрации ФРН в гомогенатах мозга, полученных через 24 часа после введения тестируемых веществ и комбинаций, показатели опытных 2-5 групп животных достоверно не отличались от контрольной. Исключение составлял препарат, ФРН сорбированный на ПБЦА-НЧ, покрытых ПС-80 из группы 6, который статистически значимо(P<0,05) увеличивал содержание ФРН в 1,7 раза.
Таким образом, установлено, что комбинированный препарат состоящий из ФРН, сорбированного на ПБЦА-НЧ, покрытых ПС-80 способствует самой эффективной доставке ФРН в мозг по сравнению с другими исследованными препаратами ФРН на всем протяжении эксперимента. Способность повышать содержание ФРН у препаратов (2-5 группы) сравнительно низка по отношению к препарату ФРН, сорбированного на ПБЦА-НЧ, покрытых ПС-80(группа 6), а через 24 часа она исчезала у них полностью. В это же самое время(на 24-й час) только препарат ФРН на ПБЦА-НЧ, покрытых ПС-80 из группы 6, был способен статистически значимо(P<0,05) увеличивать содержание ФРН в 1,7 раза.
Рис.5 Влияние препаратов ФРН и его комбинации с ПБЦА-НЧ на концентрацию ФРН в мозге у мышей.
Выводы:
1.Экспериментальные наносомальные формы фактора роста нервов для парентерального введения, стабильны после ресуспендирования и при хранении в лиофилизированном виде.
2. Фактор роста нервов практически полностью (95%) сорбируется из раствора на поверхности полибутилцианакрилатных наночастиц( ПБЦА-НЧ). Полисобат 80(ПС-80) не влияет на степень сорбции ФРН.
3. Полибутилцианоакрилатные наночастицы, покрытые полисорбатом - 80, обеспечивают доставку сорбированного на них ФРН через гемато-энцефалический барьер.
4. Фактор роста нервов, сорбированный на наночастицах, покрытых полисорбатом 80, обладает выраженным нейропротективным эффектом на модели геморрагического инсульта, вызванного интрацеребральной посттравматической гематомой по всем использовавшимся тестам. Образец фактора роста нервов, сорбированного на наночастицах (ПБЦА-НЧ), уступает по активности препарату, покрытому полисорбатом, а ФРН практически не влияет на комплекс нарушений поведения, памяти и неврологических дефицитов развивающихся у крыс после геморрагического инсульта.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
Полученные результаты позволяют рекомендовать продолжить теоретические и практические изыскания в области получения новых лекарственных форм фактора роста нервов на основе ПБЦА-НЧ, покрытых другими видами полисорбатов; введение в лекарственную форму других наполнителей и стабилизаторов и т. п. для повышения эффективности новых нанопрепаратов.
Рекомендуется продолжить доклинические и клинические испытания для последующего внедрения препарата в качестве средства для лечения последствий геморрагического инсульта.
Рекомендуется применять материалы исследования в учебном процессе на кафедрах фармакологии и биотехнологии фармацевтических и медицинских ВУЗов.
Рекомендуется применять учебник «Общественного Здравоохранения», содержащий материалы работы Хосравани Масуда, для студентов Иранских медицинских Университетов.
СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. А, , , Аляутдин доставки фактора роста нервов в мозг в эксперименте in vivo.// Фармация.- 2008.-№ 5.-с. 51-53.
2. Оценка нейропротективного действия фактора роста нервов при экспериментальном геморрагическом инсульте// Материалы Всероссийская научно-практическая конференции «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в медицине и физиологии»-Санкт-Петербург, 23-26 ноября 2010- с.2
3. Khosravani Masood. Nanoparticulates as Drug Carriers.// Journal of Nanotechnology(Tehran), No 13p.277-283.
4. Khosravani Masood. Drug delivery to the brain by nanoparticles-Trojan Horse of modern neuropharmacology// Journal of Nanotechnology-Tehran - Nop.28-31.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ГИ - геморрагический инсульт
ИПГ - интрацеребральная посттравматическая гематома
ЛО - ложнооперированные животные
ГЭБ - гемотоэнцефалический барьер
ФРН-фактор роста нервов
ПС-80- полисорбат 80
НЧ-наночастицы
ПБЦА - полибутилцианакрилат
ПБЦА-НЧ – наночастицы полибутилцианакрилата
ФРН + ПБЦА-НЧ – фактор роста нервов, сорбированный на наночастицах полибутилцианакрилата
ФРН + ПБЦА-НЧ + ПС 80- фактор роста нервов, сорбированный на наночастицах полибутилцианакрилата, покрытых полисорбатом-80.
УРПИ - условная реакция пассивного избегания
|
Из за большого объема этот материал размещен на нескольких страницах:
1 2 3 |
